Vi præsenterer her, en protokol for at teste anlægget virulens med plante-patogen Magnaporthe grisea. Denne betænkning vil bidrage til den omfattende screening af kartoffelsorter af svampe isolater og tjene som et fremragende udgangspunkt for at forstå de resistente mekanismer af planter under molekylære avl.
Planter have et kraftfuldt system for at forsvare sig mod potentielle trusler af patogene svampe. For landbrugsmæssigt vigtige planter, men aktuelle foranstaltninger til bekæmpelse af disse patogener har vist sig for konservativ, og således ikke tilstrækkeligt effektive, og de kan potentielt udgøre miljørisici. Derfor er det yderst nødvendigt at identificere vært-modstand faktorer at bistå i kontrollerende plantesygdomme naturligt gennem identifikation af resistente kimplasma, isolering og karakterisering af resistensgener og molekylær opdræt af resistente sorter. I denne forbindelse er der behov at etablere en præcis, hurtig og omfattende indpodningsmetode for at avle og udvikle plante resistensgener. Ris blast svampe patogen Magnaporthe grisea forårsager alvorlig sygdomssymptomer og give tab. M. grisea har for nylig dukket op som en model organisme for at studere mekanismerne af plante-svampe patogen interaktioner. Dermed, vi rapport udviklingen af et plant virulens testmetode, der er specifikke for M. grisea. Denne metode giver både spray podning med en conidial suspension og såret podning med mycelium kuber eller dråber af conidial suspension. De vigtigste trin i såret indpodningsmetode for fritliggende ris blade er at gøre sår på planten blade, som undgår forstyrrelser forårsaget af vært indtrængen modstand. Denne spray/såret protokol bidrager til hurtig, præcis og omfattende screening af kartoffelsorter af M. grisea isolater. Denne integrerede og systematisk plante infektion metode vil tjene som et fremragende udgangspunkt for at få et bredt perspektiv af spørgsmål i plantepatologi.
Ris blast, forårsaget af M. grisea, er en af de mest alvorlige sygdomme for ris sorter verdensomspændende1,2. Den proces, hvorved M. grisea inficerer værtsplanter omfatter en konidier produktion og overflade udlæg, en konidier spiring og appressorium dannelse, en formation af penetration pind og smitsomme hypha differentiering, og en sygdom spredes 3. alle disse faser er almindelige i mange andre plante patogene svampe, og faktisk en blokade af enhver enkelt fase forebygger infektion af værtsplanter. På grund af dens økonomiske betydning og genetiske sporbarhed fremstod M. grisea som en model organisme for at studere mekanismerne af plante-svampe patogen interaktioner1,4. Derfor, at studere det molekylære grundlag af disse udviklingsstadier i M. grisea vil bidrage til at belyse de molekylære mekanismer bag svampe patogenicitet og identifikation af kandidat target gener for screening og designe roman fungicider5.
De seneste rapporter om M. grisea infektion har fokuseret på de molekylære mekanismer før penetration faser, især conidiation, appressorium-dannelsen, penetration pløkker og smitsomme vækst3, 6. det er derfor vigtigt at udvikle en detaljeret protokol for at teste M. grisea infektion. Heri, præsenterer vi en detaljeret metode til en infektion test, der udnytter spray-medieret infektion assays med en conidial suspension og podning af sår med mycelial stik af M. grisea. I denne betænkning fokuserer protokollen på kultur af stammer, forberedelse af conidiation løsningen for sprøjtning, og den mycelial plug-medieret podning af planter med M. grisea. Disse trin beskrives i detaljer nedenfor, og en skematisk oversigt viser hele arbejdsgangen for metoden og en typisk læsion er vist i figur 1 og 2, henholdsvis.
Plante sygdom resistensgener spiller en vigtig rolle i forebyggelsen af infektioner af patogener, herunder svampe patogener1,12. Ris blast er blevet brugt som en model til at forstå arten af patogenet befolkning strukturer og identificere plante resistens gener4. Det er derfor nødvendigt at undersøge sygdommen modstand genotype og avirulence genotyper af de vigtigste sorter af landbruget planter i stor skala at identificere sygdomsresis…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af den særlige videnskabelige forskningsprojekt af Beijing landbrug Universitet (YQ201603) og den videnskabelige projekt af Beijing pædagogiske udvalg (KM201610020005).
Agar | AOBOX Biotechnology(China) | 01-023 | |
Filter paper | GE Healthcare brand(Sweden) | 10311387 | |
50-mL tube | CORNING(Amercia) | 430290 | |
Centrifuge | Eppendorf(Amercia) | 5804R | |
Tween-20 | Coolaber(China) | CT11551-100ml | |
Culture dish | Thermofisher(Amercia) | 150326 | |
0.5-5 mL pipette | Eppendorf | 4920000105 | |
100-1000uL pipette | Eppendorf | 4920000083 | |
Vacuum pump | Leybold | D25B | |
Dissection needle | FST | 26000-35 | |
Incubator | MEMMERT | PYX313 | |
Inoculation ring | Greiner Bio One | 731175 |