Este protocolo descreve a gravação dos potenciais de campo local com haste multi sondas de silicone linear. Conversão de sinais usando análise de densidade atual fonte permite a reconstrução do local atividade elétrica no hipocampo do mouse. Com esta técnica, oscilações espacialmente restrita do cérebro podem ser estudadas em ratos movimentando-se livremente.
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Artigo de método
Gravação espacialmente restrita oscilações no hipocampo de ratos de comportar-se
Neste artigo
Resumo
Resumo
O potencial do campo local (LFP) emerge de movimentos de íons através das membranas neurais. Desde que a tensão gravada por eletrodos LFP reflete o campo elétrico somado de um grande volume de tecido cerebral, extrair informações sobre a atividade local é um desafio. Estudando microcircuitos neuronais, no entanto, exige uma confiança distinção entre eventos verdadeiramente locais e volume-conduzido sinais originários de regiões distantes do cérebro. Análise de densidade (CSD) fonte atual oferece uma solução para este problema, fornecendo informação sobre dissipadores atuais e fontes na proximidade dos eléctrodos. Em áreas do cérebro com cytoarchitecture laminar, tais como o hipocampo, CSD unidimensional pode ser obtido, estimando-se a segunda derivada espacial da LFP. Aqui, descrevemos um método de registro multilaminar LFPs usando sondas de silicone linear implantadas no hipocampo dorsal. Vestígios CSD são calculados ao longo de hastes individuais da sonda. Assim, este protocolo descreve um procedimento para resolver espacialmente restrita rede neuronal oscilações no hipocampo de ratos movimentando-se livremente.
Introdução
Oscilações na LFP criticamente estão envolvidas no processamento pelos circuitos neuronais de informações. Eles cobrem um amplo espectro de frequências, que variam de ondas lentas (~ 1 Hz) a ondulação rápido oscilações (~ 200 Hz)1. Bandas de frequências distintas estão associadas com funções cognitivas, incluindo memória, processamento emocional e navegação2,3,4,5,6,7. Fluxo de corrente através das membranas neuronais constitui a maior parte da LFP ....
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Protocolo
Todos os métodos que envolvam animais vivos foram aprovados pelo Regierungspräsidium Freiburg em conformidade com o alemão Animal Welfare Act.
1. preparações
- Projetar e construir uma ferramenta de inserção adequada, transitoriamente, carregando a sonda de silicone e o conector do eletrodo durante o processo de implantação. Veja a Figura 1 para uma ferramenta de inserção construído personalizado de exemplo.
- Solte cuidadosamente o conector de sonda e eletrodo de silicone da embalagem usando pinça com ponta de cerâmica.
- Levante a placa de ligação e corrigi-lo firmemente com uma pinça ....
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Resultados
A Figura 1 ilustra a ferramenta de inserção utilizada para a implantação de sondas de silicone. Gravações de silício implantado cronicamente sondas segmentação da área CA1 e a camada de células grânulo de giro do pectínea são mostrados na Figura 2. Nós gravamos LFPs de Souza a sonda durante a livre circulação no homecage. Para minimizar o efeito de condução de volume, os sinais obtidos foram convertidos para CDs ao longo de cada .......
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Discussão
Evidências crescentes indicam que oscilações de cérebro em circuitos neuronais hippocampal ocorrem em domínios espaciais discretas10,11,16. Análise CSD reduz drasticamente a influência da condução de volume, um pré-requisito crucial para o estudo dos eventos de oscilação local. Com este vídeo, nós fornecemos um guia para implantar silicone sondas do hipocampo de rato para a análise de dados CSD. Mostramos exemplos representativo.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Estamos gratos a Karin Winterhalter e Kerstin Semmler para assistência técnica. Este trabalho foi apoiado pelo cluster de excelência BrainLinks - BrainTools (EXC. 1086), da Fundação de pesquisa alemã.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Grampo de crocodilo com suporte | Reichelt Elektronik | HALTER ZD-10D | |
| Sonda de silicone | Cambridge Neurotech | P-series 32 | |
| Estereoscópio | Olympus | SZ51 | |
| Fio de cobre isolado com verniz | Bü rklin Elektronik | 89 F 232 | |
| Parafusos de aterramento | Parafusos e Mais GmbH (screwsandmore.de) | DIN 84 A2 M1x2 | |
| Flux | Stannol | 114018 | |
| Pinça com ponta de cerâmica | Fine Science Tools | 11210-60 | |
| Paraffine Wax | Sigma-Aldrich | 327204 | |
| Cauterizer | Fine Science Tools | 18010-00 | |
| Ferro de solda | Kurtz Ersa | OIC1300 | |
| Multímetro | Uni-T | UT61C | |
| Etanol | Carl Roth | 9065.1 | |
| Pipetas Pasteur | Carl Roth | EA65.1 | |
| Esterilizador térmico | Fine Science Tools | 18000-45 | |
| Quadro estereotáxico | David Kopf | Modelo 1900 | |
| Suporte de eletrodo estereotáxico | David Kopf | Modelo 1900 | |
| Isoflurano | Abbvie | B506 | |
| Concentrador de oxigênio | Respironix | 1020007 | |
| Buprenorfina | Indivior UK Limited | ||
| Barbeador elétrico | Tondeo | Eco-XS | |
| Almofada de aquecimento | Thermolux | 463265/-67 | |
| Braçadeiras cirúrgicas | Ferramentas de ciências finas | 18050-28 | |
| Peróxido de hidrogênio | Sigma-Aldrich | H1009 | |
| Lenços de algodão estéreis | Carl Roth | EH12.1 | |
| Broca | Proxxon | Micromot 230 / E | |
| 21G agulha de injeção | B. Braun | 4657527 | |
| Tampão fosfato / solução | |||
| Atlas estereotáxico | Elsevier | 9.78012E +12 | |
| Tesouras cirúrgicas | Fine Science Tools | 14094-11 | |
| Pinças cirúrgicas | Fine Science Tools | 11272-40 | |
| Agulhas de injeção 27G | B. Braun | 4657705 | |
| Vaselina | |||
| Cimento dental | Sun Medical | SuperBond T & M | |
| Carprofeno | Zoetis | Rimadyl 50mg/ml | |
| Amplificador de gravação | Intan Technologies | C3323 | |
| Placa de aquisição USB | Intan Technologies | C3004 | |
| Cabos de gravação | Intan Technologies | C3216 | |
| Comutador elétrico | Lentes dóricas | HRJ-OE_FC_12_HARW | |
| Software de aquisição | OpenEphys (www.open-ephys.org) | GUI | permite a aquisição de dados independente de plataforma |
| Computador para aquisição | |||
| de dados Ambiente de análise | Python (www.python.org) | permite análise de dados independente de plataforma | |
| Uretano | Sigma-Aldrich | ||
| Vibratome | Leica | VT1000 | |
| Lâminas de microscópio | Carl Roth | H868.1 | |
| Lamínulas | Carl Roth | H878.2 | |
| Meio de embutir | Sigma-Aldrich | 81381-50G | |
| Água destilada | Millipore | Milli Q | Máquina de mesa para a produção de água destilada |
| Tergazyme | Alconox | Tergazyme |
Referências
- Buzsáki, G., Draguhn, A. Neuronal oscillations in cortical networks. Science. 304 (5679), 1926-1929 (2004).
- Keefe, J., Recce, M. L. Phase relationship between hippocampal place units and the EEG theta rhythm. Hippocampus. 3 (3), 317-330 (1993).
- Benchenane, K., et....
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Reimpressões e permissões
