Zebrafish एक प्राकृतिक Vibrio हैजा मेजबान है और दोहराऊंगा और औपनिवेशीकरण से संचरण के लिए पूरे संक्रामक चक्र का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । यहां, हम प्रदर्शन कैसे V. हैजा औपनिवेशीकरण स्तर और zebrafish में दस्तों का आकलन करने के लिए ।
Vibrio हैजा को संक्रामक एजेंट के रूप में जाना जाता है जो मानव रोग हैजा का कारण बनता है । मानव की मेजबानी के बाहर, V. हैजा मुख्य रूप से जलीय वातावरण में मौजूद है, जहां यह उच्च जलीय प्रजातियों की एक किस्म के साथ बातचीत । हड्डीवाला मछली एक पर्यावरणीय मेजबान होने के लिए जाना जाता है और प्रकृति में एक संभावित V. हैजा जलाशय हैं । दोनों V. हैजा और teleost मछली प्रजातियों ढाणियो rerio, सामांयतः zebrafish के रूप में जाना जाता है, भारतीय उपमहाद्वीप से उत्पंन, जलीय वातावरण में एक लंबे समय से बातचीत का सुझाव । Zebrafish जीव विज्ञान के कई पहलुओं, संक्रामक रोगों सहित अध्ययन के लिए एक आदर्श मॉडल जीव हैं । Zebrafish आसानी से हो सकता है और तेजी से पानी में निवेश के बाद V. हैजा द्वारा बृहदांत्र । v. हैजा द्वारा आंत्र औपनिवेशीकरण दस्त के उत्पादन और दोहराया V. हैजाके उत्सर्जन की ओर जाता है । इन उत्सर्जित बैक्टीरिया तो नई मछली मेजबान उपनिवेश पर जा सकते हैं । यहां, हम प्रदर्शन कैसे v. हैजाका आकलन करने के लिए-zebrafish में आंत्र औपनिवेशीकरण और कैसे मात्रा v. हैजा-प्रेरित zebrafish दस्त । औपनिवेशीकरण मॉडल शोधकर्ताओं जो अध्ययन कर रहे है कि ब्याज की जीन मेजबान औपनिवेशीकरण के लिए महत्वपूर्ण हो सकता है और के लिए उपयोगी होना चाहिए/ zebrafish दस्त के ठहराव किसी भी आंत्र रोगज़नक़ जो एक मॉडल प्रणाली के रूप में zebrafish की खोज में रुचि रखते है अध्ययन शोधकर्ताओं के लिए उपयोगी होना चाहिए ।
Vibrio हैजा एक जलीय, ग्राम-नकारात्मक जीवाणु है जो मानव रोग हैजा के साथ ही छिटपुट दस्त1,2का कारण बनता है । वि. हैजे के कारण प्रायः अन्य जलीय जीवों से सम्बद्ध विश्व के अनेक क्षेत्रों में वातावरण में पाया जाता है. इन जीवों को जोड़ प्लवक, कीट अंडा जनता, शंख, और हड्डीवाला मछली प्रजातियों3,4,5,6,7शामिल हैं । कई अध्ययनों से अलग भौगोलिक क्षेत्रों7,8,9,10में मछली के आंत्र पथ से V. हैजा अलग है । मछली में V. हैजे की उपस्थिति इंगित करता है कि मछली एक पर्यावरण जलाशय के रूप में कार्य कर सकते हैं । मछली भी मनुष्यों को रोग संचारित करने में और V. हैजा उपभेदों6के भौगोलिक प्रसार में फंसाया जा सकता है ।
बेहतर समझने के लिए कैसे v. हैजा मछली के साथ बातचीत, ढाणियो rerio, बेहतर zebrafish के रूप में जाना जाता है, v. हैजाई11की पढ़ाई के लिए एक मॉडल प्रणाली के रूप में विकसित किया गया था । Zebrafish बंगाल क्षेत्र की खाड़ी सहित दक्षिणी एशिया के मूल निवासी हैं, जो वि. हैजाका शीघ्रातिशीघ्र जलाशय बनने लगा है. पहले हैजा महामारी १८१७ में शुरुआत करने से पहले, हैजा क्या अब भारत और बांग्लादेश है के बाहर नहीं बताया गया था । इसलिए, zebrafish और V. हैजा लगभग निश्चित रूप से विकासवादी समय तराजू पर एक दूसरे के साथ जुड़े, सुझाव है कि zebrafish प्राकृतिक वातावरण12में एक V. हैजे की मेजबानी कर रहे हैं ।
v. हैजे के लिए zebrafish मॉडल पर अमल सरल है और पूरे रोगजनक वि. हैजा जीवन चक्र का अध्ययन किया जा सकता है. मत्स्य वि. हैजे के संपर्क में आने से पानी में स्नान करके जो वि. हैजेकी ज्ञात संख्या के साथ inoculated गया है. कुछ ही घंटों के भीतर, आंत्र औपनिवेशीकरण जगह लेता है, दस्त के उत्पादन के बाद । दस्त mucin, प्रोटीन, उत्सर्जित बैक्टीरिया, और अन्य आंत्र सामग्री के होते हैं । दस्त की डिग्री कुछ सरल माप13का उपयोग कर quantified जा सकता है । V. हैजे कि संक्रमित मछलियों द्वारा उत्सर्जित किया गया है तो, के लिए पर जा सकते हैं भोली मछली संक्रमित, संक्रामक चक्र को पूरा करने. इसलिए zebrafish मॉडल recapitulates में वि. हैजे की मानव रोग प्रक्रिया१२,१४.
सबसे अक्सर इस्तेमाल किया V. हैजा पशु मॉडल ऐतिहासिक चूहों और खरगोश14,15,16,17,18है । इन मॉडलों में वि. हैजे रोगजनन के हमारे ज्ञान को जोड़ने में महत्वपूर्ण भूमिका रही है. तथापि, क्योंकि चूहों और खरगोशों के प्राकृतिक v. हैजे की मेजबानी नहीं कर रहे हैं, वहां v. हैजा जीवन चक्र के किन पहलुओं की सीमाओं का अध्ययन किया जा सकता है । V. चूहों और खरगोशों के हैजे औपनिवेशीकरण आमतौर पर आंत्र microbiota के अभाव या एंटीबायोटिक दवाओं के साथ एक उपचार आंत्र microbiota को नुकसान की आवश्यकता है । दोनों मॉडलों को या तो gavage पाचन तंत्र या शल्य हेरफेर करने के लिए बैक्टीरिया शुरू करने के लिए सीधे आंतों में बैक्टीरिया इंजेक्षन की आवश्यकता होती है । Zebrafish एक बरकरार आंत्र microbiota के साथ कि वयस्क मछली में एक फायदा है आसानी से और बृहदांत्र संक्रामक प्रक्रिया स्वाभाविक रूप से होता है, किसी भी हेरफेर के बिना आवश्यक है ।
वर्तमान काम V. हैजा संक्रमण में एक मॉडल के रूप में zebrafish के उपयोग को दर्शाता है । संक्रमण, विच्छेदन, बस्तियां v. हैजेकी गणना, तथा वि. हैजे की वजह से दस्त की ठहराव१२,१३बताई जाएगी. यह मॉडल दोनों v. हैजा रोग प्रक्रिया में और v. हैजा पर्यावरण जीवन शैली में रुचि वैज्ञानिकों के लिए उपयोगी होने की संभावना है ।
zebrafish v. हैजे की पढ़ाई के लिए एक अपेक्षाकृत नए मॉडल है, लेकिन v. हैजा जीव विज्ञान और रोगजनन11,12,13 के पहले से अज्ञात पहलुओं की भविष्य की खोज के लिए बहुत वादा रखती है . वयस?…
The authors have nothing to disclose.
मेलोडी Neely, जॉन एलन, बेसल Abuaita, और डोना Runft को zebrafish मॉडल विकसित करने में मदद करने में उनके प्रयासों के लिए धंयवाद । यहां बताया गया अनुसंधान पुरस्कार संख्या R21AI095520 और R01AI127390 (Jeffrey एच. Withey) के तहत स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों के राष्ट्रीय एलर्जी और संक्रामक रोगों के संस्थान द्वारा समर्थित किया गया था । सामग्री पूरी तरह से लेखकों की जिंमेदारी है और जरूरी नहीं कि स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों के सरकारी विचारों का प्रतिनिधित्व करते हैं ।
Instrument | |||
Shaker incubator | New Brunswick Scientific, Edison, NJ | Excella E25 | |
Incubator | NUAIRE, Plymouth, MN | Auto Flow | |
Spectrophotometer | Thermo, Waltham, MA | Geaesys 6 | |
Vortex homogenizer | Minibeadbeater24 | 112011 | |
Weighing Machine | Ohaus, Columbia, MD | Adventurer Pro | |
Heat Stirer | Corning, Corning, NY | PC-420D | |
Burner | |||
automated colony counter | REVSCI | 120417B | |
Materials | |||
400 ml glass beakers | Pyrex | ||
perforated lids | Microtip holder with holes from tip box | ||
disposable plastic spoons | Office Depot, Boca Raton, FL | D15-25-7008 | |
Fish Tank System | Aquaneering, San Diego, CA | ||
RO Water Purifier | Aqua FX | TK001 | |
Fish net | Marina | ||
fish food | Tetra fin | ||
Brine Shrimp | Red jungle brand | O.S.I. pro 80 | |
Styrofoam board | |||
Pins | |||
Scalpels | Fine Scientific tools, Foster City, CA | 10000-10 | |
Forceps | Fine Scientific tools, Foster City, CA | 11223-20 | |
Vannas scissors | Fine Scientific tools, Foster City, CA | 15000-11 | |
2 ml screw cap tubes | Fisher Scientific, Hampton, NH | 02-681-375 | |
1 mm glass beads | Bio Spec | 11079110 | |
Glass beads for spreading | Sigma, St. Louis, MO | 18406-500G | |
Petri plate | Fisher Brand, Hampton, NH | FB0875713 | |
1.5 ml centrifuge tube | Midsci, Valley Park, MO | AVSS1700 | |
50 ml centrifuge tube | Corning Falcon, Corning, NY | 352098 | |
Test tubes | Pyrex | 9820 | |
Glass Pipette | Fisher Brand, Hampton, NH | 13675K | |
Micro pipettes | Sartorius Biohit, Göttingen, Germany | m1000/m200/m20 | |
Tips | Genesee Scientific, San Diego, CA | 24-150RS/24-412 | |
Chemicals | |||
Instant Ocean salts | |||
phosphate buffered saline | VWR Life Science, Radnor, PA | K813-500ml | |
Tricaine (ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt | Sigma, St. Louis, MO | A5040 | |
5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside | Sigma, St. Louis, MO | 10651745001 | |
Schiff’s reagent | Sigma, St. Louis, MO | 84655-250 mL | |
periodic acid | Fisher Scientific, Hampton, NH | 10450-60-9 | |
Mucin from porcine stomach | Sigma, St. Louis, MO | M2378-100G | |
Bovine serum albumin | Fisher Scientific, Hampton, NH | 9046-46-8 | |
Pierce 660nm Protein Assay Reagent | Thermo, Waltham, MA | 22660 | |
LB medium | |||
Trypton | BD Biosciences, San Jose, CA | 211705 | |
Teast Extract | BD Biosciences, San Jose, CA | 212750 | |
NACL | Fisher Scientific, Hampton, NH | BP358-212 | |
Agar | BD Biosciences, San Jose, CA | 214010 | |
TCBS Agar | BD Biosciences, San Jose, CA | 265020 | |
DCLS Agar | Sigma, St. Louis, MO | 70135-500gm | |
Software | |||
Microsoft office | |||
Prism 5 |