Caenorhabditis Peneira: Um instrumento de baixa tecnologia e metodologia para classificação de pequenos organismos multicelulares

Summary

O protocolo atual inclui uma metodologia para a classificação e a limpeza das populações de idade-combinadas de elegans de Caenorhabditis. Ele usa um simples, barato e eficiente ferramenta sob medida para obter uma grande população experimental de nematoides para pesquisa.

Abstract

Caenorhabditis elegans (C. elegans) é um organismo de bem-estabelecida modelo usado em toda uma gama de pesquisas básicas e biomédica. Dentro da comunidade de pesquisa nematoide, há uma necessidade de uma maneira acessível e eficaz para manter as populações grandes, idade-combinadas de c. elegans. Aqui, apresentamos uma metodologia para mecanicamente classificação e limpeza c. elegans. O nosso objectivo é fornecer um processo econômico, eficiente, rápido e simples para obter animais de tamanhos uniformes e estágios de vida para a sua utilização em experiências. Esta ferramenta, o crivo de Caenorhabditis , usa um sistema de tampa custom-built que tópicos para tubos comuns de laboratório cónico e classifica c. elegans com base no tamanho do corpo. Também demonstramos que a peneira Caenorhabditis efetivamente transfere animais de placa de uma cultura para outra que permite uma classificação rápida, sincronizando e limpeza sem afetar marcadores de saúde, incluindo a motilidade e stress-inducible repórteres do gene. Esta ferramenta acessível e inovadora é uma opção rápida, eficiente e não estressante para manter as populações de c. elegans .

Introduction

O verme nematoide, Caenorhabditis elegans, é um organismo modelo premier. Além da natureza simples e controlada do seu cultivo em laboratório, todo o seu genoma é sequenciado¹ e o destino do desenvolvimento de cada célula é conhecido². Devido a estas características, c. elegans é um organismo modelo amplamente usado para estudos genéticos. No entanto, juntamente com estas características benéficas vem alguns desafios para os pesquisadores. Devido ao seu tempo de geração rápida, as populações de c. elegans rapidamente podem ficar sem comida e/ou se misturam as populações com várias gerações e es....

Protocol

1. Caenorhabditis peneira construção e uso

1. Protocolo de construção
   1. Adquira 2 tampas de tubos de Erlenmeyer de 50 mL (figura 1A).
   2. Remover a área do centro dentro do lábio interior das tampas (quando visto de baixo, figura 1B) usando um bico de Bunsen e uma sonda de metal quente ou um ferro de solda ou pisar a broca.
      Nota: Usando o calor para cortar a tampa de plástico é preferível uma lâmina, porque há menos risco de lesão.
   3. Limpar e lixar as bordas cortadas e cubra a superfície com um arquivo curvado ou um rotativo moer ferramenta (por....

Results

A peneira de Caenorhabditis consiste de 2 tampas de rosca, protegendo uma área de malha de monofilamento de nylon tecido menor que o diâmetro do corpo da época do desenvolvimento desejado, usado para extrair ao vivo populações de organismos usando uma técnica simples lavagem. Ele atribui aos tubos cónicos padrão e usa a tela de engranzamento mecanicamente classificar animais pelo diâmetro do corpo, deixando os animais desejados no tubo pronto para mais manutenção e experimentação.......

Discussion

Aqui, apresentamos o projeto e uso da peneira Caenorhabditis acessível, eficaz como uma ferramenta para classificação e mantendo o c. elegans. Esta ferramenta tem várias vantagens para escolher manualmente a animais individuais, lavando as populações, tratamentos químicos (por exemplo, FUDR) e métodos mais caros dos animais segregam. Primeiro, o Caenorhabditis peneira eficientemente e rapidamente (menos de 20 min) classifica a descendência de grandes populações mistas de animais (

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Óculos de segurança	Uline	S-21076
Luva protetora resistente ao calor	Grainger	Item # 3AT17 Mfr. Modelo # 3AT17 Página do catálogo # 1703
Tubo cônico de 50 mL	Falcon	14-432-22
Malha de nylon sintético	Dynamic Aqua-Supply Ltd	NTX20 e NTX50
Cola de cianoacrilato	Scotch Super Glue Liquid	SAD114
Alicate	Vampliers	VMPVT-001-8
Ferramenta Dremmel com arquivo circular	Item	# 525945 Modelo # 100-LG
FUDR	Sigma	F0503
M9 produtos químicos (NaCl, Na2HPO4, KH2PO4, MgSO4)	Sigma	S7653, RES20908-A7, 1551139, M7506
NGM produtos químicos para placas (Bactopeptona, Ágar, KH2PO4, K2HPO4, CaCl2, Colesterol, Estreptomicina)	BD Biosciences (bactopeptona) , Lab express (ágar), Sigma ( repouso)	BD bioscience 211677, Lab Express 1001,  Sigma 1551139, 1551128, C1016, C8667, S6501
Pluronic F-127	Sigma	P2443
Hidrato de dicloreto de paraquat	Sigma	36541
	Olympus	FSX100