Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie mit Draht Myographie
Summary
Myograph Leitertechnik dient zur vaskulären glatten Muskelzellen Funktionen und Bildschirm neue Drogen zu untersuchen. Wir berichten über ein detailliertes Protokoll zur Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie und für das screening von neuen Muskelrelaxantien von vaskulären glatten Muskelzellen.
Abstract
Myograph Leitertechnik dient zur Bewertung der Kontraktilität der vaskulären glatten Muskeln in Reaktion auf depolarization, GPCR-Agonisten/Inhibitoren und Drogen. Es ist in vielen Studien über die physiologischen Funktionen von vaskulären glatten Muskelzellen, die Pathogenese der vaskulären Erkrankungen wie Bluthochdruck und die Entwicklung der Glattmuskel Beruhigungsmittel Drogen verbreitet. Die Maus ist ein weit verbreitetes Modell Tier mit einem großen Pool von Krankheitsmodellen und gentechnisch veränderte Sorten. Wir haben diese Methode zur Messung der isometrischen Kontraktion der Maus mesenterialen Arterie im Detail eingeführt. Ein 1,4-mm-Segment der Maus mesenterialen Widerstand Arterie war isoliert und durch die Übergabe von zwei Drähten durch seine Lumen auf eine Myograph Kammer montiert. Nach Gleichgewichtherstellung und Normalisierung Schritten wurde das Schiff Segment durch eine High-K+ -Lösung zweimal vor der Kontraktion Assay potenzierte. Als ein Beispiel für die Anwendung dieser Methode in der Medikamentenentwicklung wir die entspannende Wirkung einer neuartigen natürlichen Substanz, Neoliensinine, isoliert aus ein chinesisches Kraut, Embryonen von Samen der Lotus (Nelumbo Nucifera Gaertn.) auf Maus mesenterialen gemessen. Arterien. Die Schiff-Segmente auf der Myograph Kammer montiert wurden mit einer High-K+ -Lösung stimuliert. Wenn die Kraft-Spannung eine stabile anhaltende Phase erreicht, wurden die Kammer kumulativen Dosen von Neoliensinine hinzugefügt. Wir fanden, dass Neoliensinine hatte eine dosisabhängige muskelrelaxierende Wirkung auf Kontraktion der glatten Muskulatur, hindeutet, dass es möglichen Aktivität gegen Bluthochdruck trägt. Darüber hinaus wie das Schiff-Segment kann mindestens 4 Stunden nach der Montage überleben und Kontraktilität induziert durch die High-K+ -Lösung für viele Male, wir empfehlen pflegen kann Myograph drahtsystem für die zeitraubende Drogen-Screening verwendet werden.
Introduction
Das kleine Schiff Myograph System hier verwendet wurde zur Messung die isometrische Kontraktion der kleinen Widerstand Schiffe mit Innendurchmesser von 100 bis 400 µm. isolierte kleine Schiffe (etwa 2 mm lang) durch zwei 40 µm Durchmesser Drähte eingefügt wurden und waren dann nacheinander montiert auf den Mikrometer und Wandler-Side backen. Diese Myograph Technik wurde erstmals im Jahr 19721 vorgeschlagen und dann in erster Linie durch Mulvany und seine Kollegen2,3,4,5,6entwickelt. Es ist jetzt eine ausgereifte Technik mit Stalleinrichtungen, einfach Leistung und ein standard Normalisierung Verfahren7,8,9. Wir nutzten diese Methode mit einigen Modifikationen für Messungen in der Maus mesenterialen Arterie.
Vaskulären glatten Muskelzellen Linien die Wände fast alle Blutgefäße. Ihre grundlegende Funktion ist es, Kräfte durch Kontraktion in Reaktion auf verschiedene Reize erzeugen. Die normalen Kontraktilität von vaskulären glatten Muskelzellen ist unerlässlich für die Blutdruckregulation und Ernährung zu ergänzen10. Abnorme Regulation des Blutdrucks führt zu einer Vielzahl von Erkrankungen wie Bluthochdruck, Herzinsuffizienz und Ischämie. Mehrere Studien haben vorgeschlagen, dass abnorme Blutdruck immer dysfunktionalen vaskulären glatten Muskelzellen Kontraktilität7,11,12,13zugeordnet ist. Die Myograph-Methode erlaubt die Untersuchung von isometrischen Kontraktilität der Maus Schiffe durch verschiedene Reize wie vasokonstriktoren, Inhibitoren und Drogen induziert. Erfolgreiche Messungen der Kontraktion hilft uns zu verstehen, die Mechanismen der Blutdruck Wartung und die Pathogenese der vaskulären glatten Muskelzellen-assoziierten Erkrankungen und neue therapeutische Ansätze zu erkunden.
Viele chinesische Kräuter sind weit verbreitet für die klinische Behandlung von Gefäßerkrankungen benutzt worden; Ihre wirksamen Bestandteile sind jedoch in der Regel unbekannt. Somit, Isolierung und Identifizierung der wirksamen Komponenten ist sehr wichtig für die Entwicklung neuartiger Medikamente. Mehradrigen Myograph Technologie bietet eine einfache Methode für das screening von aktiver Komponenten in Kräutern. Wir haben mehrere Studien mit dem kleinen Schiff Myograph System um zu untersuchen, Maus mesenterialen Arterie Kontraktion berichtet und Naturstoffe mit Anti-Hypertonie Aktivität12,13,14gekennzeichnet. Hier beschreiben wir das ausführliche Protokoll für die Myograph-Methode und die entspannende Wirkung der Neoliensinine isoliert von Embryonen von Lotus Samen (Nelumbo Nucifera Gaertn.) 14.
Protocol
Representative Results
Discussion
Hypertonie ist eine weit verbreitete gesundheitspolitische Herausforderung aufgrund seiner schweren Komplikationen, einschließlich Herz-Kreislauf- und Nieren-Erkrankungen-16. Verständnis der Pathogenese der Hypertonie und mehr blutdrucksenkende Medikamenten zu erkunden ist eine dringende Aufgabe auf diesem Gebiet geworden. Blutdruck wird erstellt und gepflegt von peripheren Widerstand der Zirkulation. Nach dem Poiseuille Gesetz relativ kleinen Arterien erzeugen einen Großteil der Kreislauf Wide…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir danken Dr. Wei Qi He (Soochow University, Suzhou, China) und Dr. Yan Ning Qiao (Shaanxi Normal University, Xi ‘ an, China) für die technische Unterstützung. Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (Grant 31272311, 81373295 und 81473420) und das Projekt finanziert die Priorität akademischen Programm Entwicklung von Jiangsu Hochschuleinrichtungen (Grant Nr. unterstützt. Ysxk-2016).
Materials
| Multi wire myograph system | DMT | 610-M | |
| Stainless steel wire | DMT | 400447 | |
| Geuder dissection scissor | DMT | 400431 | |
| Dumont forceps | DMT | 300413 | |
| PowerLab/8SP | ADInstruments | ML785 | |
| Software | ADInstruments | LabChart 5 | |
| NaCl | SigmaAldrich | S5886 | |
| KCl | SigmaAldrich | P5405 | |
| CaCl2 | SigmaAldrich | C4901 | |
| MgCl2·6H2O | SigmaAldrich | M2393 | |
| D-Glucose | SigmaAldrich | G6152 | |
| HEPES | Sangon Biotech | A100511-0250 | |
| NaOH | SigmaAldrich | S8045 | |
| DMSO | SigmaAldrich | D2650 |
Referências
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