Cicatrização de feridas abrasão epitelial da córnea com Burr Ocular como um modelo para córnea

Resumo

Este protocolo descreve um método para infligir uma abrasão na superfície ocular do mouse e a seguir a ferida que daí em diante o processo de cura. O protocolo se aproveita de uma rebarba ocular para remover parcialmente o epitélio superficial do olho em camundongos anestesiados.

Resumo

A córnea murino fornece um excelente modelo para estudar a cicatrização de feridas. A córnea é a camada mais externa do olho e, portanto, é a primeira defesa de lesão. Na verdade, o tipo mais comum de lesão ocular encontrado na clínica é uma abrasão da córnea. Aqui, nós utilizamos uma rebarba ocular para induzir uma abrasão, resultando na remoção do epitélio corneano na vivo em ratos anestesiados. Este método permite a interrupção epitelial visada e reprodutível, deixando outras áreas intactas. Além disso, descrevemos a visualização do epitélio com fluoresceína mancha abradado e fornecer aconselhamento concreto sobre como visualizar a abrasão da córnea. Então, seguimos a linha do tempo da ferida cura 0, 18 e 72 h após a abrasão, até que a ferida é re-epithelialized. O modelo de abrasão epitelial de lesão corneana é ideal para estudos sobre a proliferação de células epiteliais, migração e re-epitelização das camadas da córnea. No entanto, esse método não é ideal para estudar a ativação do estroma durante a cicatrização de feridas, porque a rebarba ocular não penetra nas camadas de células do estroma. Esse método também é apropriado para aplicações clínicas, por exemplo, pré-clínicos teste de eficácia de drogas.

Introdução

Epitelial de inúmeros órgãos está expostos a lesões. No entanto, eles também contêm a capacidade de compensar a perda de tecido através da cicatrização da ferida. A córnea oferece um excelente modelo para estudar a cicatrização de feridas. Forma a superfície externa do olho e fornece uma camada protetora para a maquinaria ocular sensível. Assim, a córnea funciona como uma barreira física para patógenos e perda de água. É composto de três camadas; epitélio, estroma e endotélio. O epitélio da córnea torna-se a camada mais externa da córnea. Células epiteliais mantêm a função de barreira da córnea aderindo estritamente ao outro através de junções apertadas

Protocolo

Todas as experiências são aprovadas pelo Conselho Nacional de experimento animal.

1. preparações

1. Preparar todas as soluções e manter em temperatura ambiente, salvo indicação em contrário. Siga os regulamentos de eliminação de resíduos para dispose utilizado materiais e soluções.
2. Uso NMRI e ICR consanguíneo ações, entre as idades de 4 a 12 semanas e ambos os sexos. Se usando a linhagem C57BL/6, siga o método de preparação de cetamina-medetomidina na etapa 1.3.2. Para outras etapas, siga as instruções descritas em 1.3.3.-1.3.5.
3. Prepare o medicamento veterinário fresco e no tempo, antes de iniciar a operação. Carp....

Resultados

Este protocolo descreve um modelo para infligir um dano de abrasão ao cornea de rato e sugere como seguir e visualizar o processo de cicatrização após a abrasão. Recentemente, utilizamos este método para estudar o papel das células progenitoras epiteliais da córnea durante⁶de cicatrização de feridas. O uso de ferramentas estabelecidas é a chave para uma experiência bem sucedida de abrasão. Nós e outros, têm usado as rebarbas ocular Algerbrush II (

Discussão

Ferindo métodos são ferramentas populares para estudar diferentes aspectos da homeostase da córnea e patologias. O modelo de abrasão oferece um método bem controlado para resolver problemas relevantes em oftalmologia. No entanto, determinados pontos críticos no protocolo são vale a pena enfatizar. Notavelmente, os detalhes descritos em matéria de medicina veterinária, ferida cura cronograma e resultado são otimizados para uso com estoques NMRI e ICR outbreds, mas podem variar entre cepas de ratos²⁶

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Camundongo NMRI	Envigo	275
0,9% NaCl			usa
medetomidina	Vetmedic	Vnr087896	Nome do mercado: Cepetor Vet
Ketamine	Intervet	Vnr511485	Nome do mercado: Ketaminol Vet
Buprenorfin	Invidior	3015248	Nome do mercado: Temgesic
Atipamezol	Orion Pharma	Vnr471953	Nome do mercado: Antisedan Vet
Carprofeno	Norbrook	Vnr027579	Nome do mercado: Norocarp Vet
1% fucidin pomada ocular ácida	Dechra	Vnr080899	Nome do mercado: Isathal
Fluoresceína sal	Sigma-Aldrich	F6377
Solução salina			PBS
Algerbrush ii rebarba ocular ( Ponta de 0,5 mm)	Algerbrush	6.39768E+11
Caneta azul cobalto SP	Services	DE/003
Placa quente	Kunz Instruments	2007-0217
Câmera digital SLR	Nikon	D80
Braço de câmera ajustável e braçadeira	Neewer	10086132	Altura 28 cm
Candeeiro de mesa com um braço flexível e uma braçadeira	Prisma
Limpeza macia	KimtechScience	7552
Câmara
Conjunto de ferramentas de dissecação	Seringas Fine Science Tools
Seringas	Beckton Dickinson	303172
agulhas 26G	Beckton Dickinson	303800
2 mL Eppendorf tubo	Sarstedt	689
de tecido	Sakura Finetech	4118F
Máquina de processamento de tecidos ASP200S	Leica
Xileno	VWR	UN1307
Cera de parafina	Millipore	K95523361
Molde de incorporação de tecido 32 x 25 x 6 mm	Sakura Finetech	4123
Micrótomo	Microm	HM355
Banho-maria para seccionamento	Orthex	60591
Banho-maria para seccionamento	Leica	HI1210
Lâmina de micrótomo	Feather	S35
Lâmina de vidro	Th.Geyer GmbH & Co.	7.695.019
Água ultrapura	Millipore	MPGP04001	MilliQ
Paraformaldeído	Sigma-Aldrich	158127	PFA

estéril tamponada com fosfato de CO2