여기 astrocytic 네트워크의 조직 평가 프로토콜 선물이. 설명된 방법 셀 수, 크기, 지역, 및 핵 내의 위치 등이 네트워크의 기술적인 조치를 제공 하는 바이어스를 최소화 합니다. 이방성 vectorial 분석 평가 이다.
그것은 이다 네트워크 수준에서 뿐만 아니라 시 냅 스 및 단일 세포 수준에서 뿐만 아니라 신경 기능 조절 점점 더 분명 되었다. 이다는 강력 하 게 서로 연결 간격 접속 점을 통해 이며 커플링이이 접합을 통해 역동적이 고 높은 규제. 새로운 개념은 astrocytic 함수는 전문화 하 고 그들은 연결 하는 신경 회로의 기능에 맞게. 따라서, 더 나은 그들의 통신을 제어 하 고 커플링 규칙을 설명 하 고 그들의 기능을 더욱 이해 하 astrocytic 네트워크의 다양 한 매개 변수를 측정 하는 방법이 필요 합니다.
여기, 이미지 분석 소프트웨어를 사용 하 여 (예., ImageJFIJI), 염료 커플링 공개 astrocytic 네트워크의 공초점 이미지를 분석 하는 방법을 설명. 이러한 방법은 허용 1)는 자동화 되 고 편견 검색 레이블이 지정 된 셀의 2) 3) 염료는 네트워크 내에서 확산과 4) 관심의 영역 내에서 네트워크의 위치에의 우선 방향 계산 네트워크의 크기의 계산 .
이 분석은 특정 영역의 astrocytic 네트워크 특성, 비교 다른 기능에 관련 된 다른 분야의 네트워크 또는 네트워크 연결에 서로 다른 영향을 서로 다른 조건 하에서 얻은 비교를 사용할 수 있습니다. 이러한 관측 기능 중요 한 고려 사항이 될 수 있습니다. 예를 들어, 우리가 어디 우리가 이전 나타났습니다 astrocytic 커플링 리듬 붕괴1토 닉에서 그들의 발사 패턴을 전환 하는 뉴런의 기능을 위해 필수적 이다 trigeminal 핵의 astrocytic 네트워크 분석. 크기, 감 금, 그리고이 핵에서 astrocytic 네트워크의 우선 방향을 측정, 우리 그들은 등 기능 도메인에 대 한 가설을 구축할 수 있습니다. 여러 연구 결과 시상 및 몇 가지 이름으로, 시각 피 질에 신 피 질, 측면 우수한 올리브, 후 각 glomeruli, 및 감각 핵을 포함 하 여 다른 몇몇 두뇌 지역 유사한 분석 으로부터 혜택을 받을 수는 것이 좋습니다.
많은 연구는 어떻게 하위 셀룰러 또는 시 냅 스 수준에서 신경-사이토 대화 신경 기능 및 시 냅 스 전송에 영향을 가질 수 있습니다 설명 했습니다. 그것은 잘 이다 주변 신경 활동에 민감합니다 설립 사실, 그들은 많은 신경 전달 물질 등 조미료, GABA, 아 세 틸 콜린, ATP (이전에 게시 리뷰2,,34참조)에 대 한 수용 체가 있다. 반환에서는, astrocytic 처리 ensheath 시 냅 스 요소와 영향 신경 활동 거기와 extrasynaptic 사이트에 extracellular 이온 항상성 조절 하 고 여러 요인 또는 송신기 조미료, D-떠들고, ATP 등을 발표 하 여 5 , 6 , 7.
Astrocytic 커플링은 공간적으로 통제 되 고 취소 해 부 특징 영역에서 신경 세그먼트에 해당 하는 증거 이다 네트워크 수준에서 신경 기능 조절 또한 수 아이디어가 나왔다 (같은 감각 표현 영역), 구획 이다 보다는 그냥 그 근처는 같은 기능을 제공 하는 다른 이다에 커플 것입니다 나타냅니다. 측면 우수한 올리브에서 예를 들어, 가장 astrocytic 네트워크는8tonotopic 축 직교 방향 신 피 질 또는 olfactoty glomeruli 이다 간의 통신 배럴 또는 glomeruli 훨씬 더 강한 반면 그리고 인접 한 것 들9,10사이 약한. 두 경우 모두, astrocytic 네트워크는 glomerule 또는 배럴9,10의 중심을 향해 지향.
우리는 최근 astrocytic 활동의 extracellular 캘리포니아2 + 농도 감소 시켜 신경 발포 변조 보였다 ([캘리포니아2 +]e), S100β, 캘리포니아2 +의 출시를 통해 아마도-바인딩 단백질11. 감각 trigeminal 메인의 등 쪽 부분에 trigeminal rhythmogenic 뉴런의 인구에서 시연 되었다는 사실에서 유래한 다 핵 (NVsnpr, masticatory의 생성에 중요 한 역할을 생각),이 효과 이러한 뉴런에 리듬 발사는 영구 나+ 현재 [캘리포니아2 +]e11,12의 감소에 의해 추진에 따라 달라 집니다. 이러한 뉴런에 리듬 발사 그들의 입력의 자극 또는 인공 감소 [캘리포니아2 +]e의 “순수” elicited 수 있습니다. 우리는 더 astrocytic 커플링 신경 리듬 발사1필요 이었다는 것을 보여주었다. 이 astrocytic 네트워크 신경 활동을 동기화 할 수 및 조정 circumscribed 기능 도메인을 형성 수 있습니다 가능성 제기. 이 가설을 평가 하기 위해 우리가 먼저를 엄격 하 게 NVsnpr 내에서 이러한 네트워크의 조직 방법을 개발 필요 합니다.
Astrocytic 네트워크에 대 한 이전 연구 대부분 휴대폰 번호와 밀도 및 영역 결합의 정도 설명 했습니다. Astrocytic 네트워크의 형태와 염료-커플링의 방향 평가 하려고 했다 주로 배럴 피9, 마13,14, 두 개의 축 (x와 y)에 따라 네트워크의 크기를 비교 하 여 수행 15, barreloid 분야 시상16, 측면 우수한 올리브8, 후 각 glomeruli10, 피 질14의. 여기에 설명 된 메서드는 네트워크에 있는 레이블된 셀의 편견된 수와 그들이 커버 영역의 추정 가능 우리는 또한 네트워크 내에서 연결의 기본 설정된 방향을 정의 하 고 핵의 또는 다른 방향에서 중심으로 원하는 방향 인지 평가 도구를 개발 했다. 이전에 사용한 방법에 비해이 프로토콜 조직 및 알려진 취소 해 부가 없는 지 trigeminal 주 감각 핵 같은 구조에 astrocytic 네트워크의 방향을 설명 하는 수단 제공 서입니다. 위의 연구에서 네트워크 방향으로 이미 문서화 구조 자체의 모양에 관계 설명 (예., 시상, 피 질, 배럴에에서 barreloid 해 마와 피 질,에서 glomeruli 레이어 후 각 전구, 등입니다.)입니다. 또한, vectorial 분석 방향 밝혀 다른 조건 하에서 커플링의 비교에 대 한 수 있습니다. 이러한 매개 변수는 핵 내에서 네트워크의 위치에 따라 변경 여부 분석, 우리는 또한 핵의 경계에 관하여 각 네트워크를 대체 하는 방법을 개발. 이러한 도구는 연결 된 셀의 조사 네트워크에 대 한 다른 지역에 쉽게 적응 될 수 있다.
Electrophysiological 방법의 수 이다23,24사이 결합 기능을 평가 하기 위해 존재 한다. 그러나,이 메서드는 astrocytic 네트워크의 해부학 적 배열에 대 한 정보를 제공 하지 않습니다. 많은 연구를 이미 그 “염료 또는 추적 프로그램-커플링”, 다 여기, 발생의 일부분에만 electrophysiological 방법25,26,27<…
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 건강 연구의 캐나다 학회, 부여/보너스 번호에 의해 투자: 14392.
NaCl | Fisher Chemicals | S671-3 | |
KCl | Fisher Chemicals | P217-500 | |
KH2PO4 | Fisher Chemicals | P285-500 | |
MgSO4 | Fisher Chemicals | M65-500 | |
NaHCO3 | Fisher Chemicals | S233-500 | |
C6H12O6 Dextrose anhydrous | Fisher Chemicals | D16-500 | |
CaCl2 dihydrated | Sigma | C70-500 | |
Sucrose | Sigma | S9378 | |
D-gluconic acid potassium salt | Sigma | G45001 | |
MgCl2 anhydrous | Sigma | M8266 | |
HEPES | Sigma | H3375 | |
EGTA | Sigma | E4378 | |
ATPTris Salt | Sigma | A9062 | |
GTPTris Salt | Sigma | G9002 | |
Biocytin | Sigma | B4261 | |
Carbenoxolone disodium salt | Sigma | C4790 | |
avidin-biotin complex : ABC kit | Vestor laboratories | PK-4000 | |
Streptavidine-alexa 594 | Molecular Probes | S11227 | |
Triton | Fisher Chemicals | BP151-500 | |
Xylene | Fisher Chemicals | X5-1 | |
Aqueous mounting medium 1 : Fluoromount-G | SouthernBiotech | 0100-01 | |
Toluen-based synthetic resin mounting medium : Permount | Fisher Chemicals | SP15-100 | |
Slide Drying Bench | Fisherbrand | 11-474-470 | |
Vibratome | Leica | VT 1000S | |
Microscope cover glass | Fisherbrand | 12-544A | |
Microscope slide ColorFrost | Fisherbrand | 12-550-413 | |
PFA | Fisherchemicals | 04042-500 | |
Olympus FluoView FV 1000 Confocal microscope | Olympus | ||
40X water-immersion lens | Olympus | LUMPLFLN40XW | |
20X water-immersion lens | Olympus | XLUMPLFL20XW | |
4X water-immersion lens | Olympus | XLFLUOR4X/340 | |
Micropipette puller | Sutter Instrument | P97 | |
Micromanipulator | Sutter Instrument | MP 225 | |
Camera CCD | Sony | CX-ST50 | |
Black and white monitor | Sony | SSM-125 | |
Digidata | Molecular devices | 1322A | |
Patch Clamp amplifier | Axon instrument | Mulitclamp 700A | |
Electrophysiology acquisition software | Molecular devices | pClamp 8 | |
Electrophysiology analysis software | Molecular devices | Clampfit 8 | |
Imaging analysis software | ImageJFIJI | Open source software. FIJI version including plug in package. | |
Vector image editor | Adobe | Illustrator CS4 | |
Spreadsheet application | Microsoft Office | Excel 2010 |