Afleiding en differentiatie van Canine ovariële mesenchymale stamcellen
Summary
Hierin beschrijven we een methode voor de isolatie, de uitbreiding en de differentiatie van mesenchymale stamcellen van canine eierstokweefsel.
Abstract
Belangstelling voor mesenchymale stamcellen (MSCs) is toegenomen in de afgelopen tien jaar vanwege hun gemak van isolatie, uitbreiding en cultuur. Onlangs, hebben studies aangetoond de brede differentiatie capaciteit die deze cellen bezitten. De eierstok vertegenwoordigt een veelbelovende kandidaat voor cel-gebaseerde therapieën wijten aan het feit dat het is rijk aan MSCs en dat het is vaak weggegooid na ovariotomie chirurgie als biologisch afval. Dit artikel beschrijft de procedures voor de isolatie, de uitbreiding, en differentiatie van MSCs afgeleid van de Hoektand eierstok, zonder de noodzaak voor het sorteren van de cel technieken. Dit protocol vormt een belangrijk instrument voor regeneratieve geneeskunde vanwege de brede toepasbaarheid van deze zeer differentieerbare cellen in klinische proeven en therapeutisch gebruikt.
Introduction
Het aantal gepubliceerde studies die focus op stamcellen sterk toegenomen in het afgelopen decennium, een onderzoek dat heeft zijn aangewakkerd door het gezamenlijke doel om krachtige regeneratieve geneeskunde therapie te ontdekken. Stamcellen hebben twee primaire definiërende Markeringen: zelf – vernieuwing en differentiatie. Mesenchymale stamcellen zijn verantwoordelijk voor regelmatige weefsel omzet en hebben een beperktere capaciteit van differentiatie in vergelijking met embryonale stamcellen1. Onlangs veel studies hebben aangetoond een breed scala van differentiatie van MSCs, en een onderwerp onder discussie is nagegaan of verschillen tussen embryonale en volwassen stamcellen bestaat bij alle2.
Het ovarium oppervlakte-epitheel is een niet-doorgevoerde laag van cellen, relatief minder gedifferentieerd, die spreekt van beide markeringen epitheliale en mesenchymale3, behoud van het vermogen om te differentiëren in verschillende soorten cellen in reactie op Milieusignalen4. De exacte locatie van stamcellen in het vruchtbeginsel is niet goed bekend; echter wordt er geopperd dat de vermelding van de bipotential in de tunica albuginea aanleiding tot kiemcellen5 geven. Immunologische studies hebben veronderstelde dat deze cellen een stromale oorsprong6 hebben of gevestigd in of proximale naar de oppervlakte van de eierstok7 zijn. Aangezien mesenchymale stamcellen express talrijke receptoren die een belangrijke rol in cel adhesie8 spelen, was een experiment ontworpen voor het testen van de hypothese dat het selecteren van een bevolking van cellen met snelle hechting duidelijk een bevolking van cellen wilt isoleren characterizable als Mesenchyme in de natuur. Onze fractie rapporteerde onlangs, de afleiding van MSCs van eierstokweefsel op basis van hun capaciteit van hechting op het kunststof oppervlak van de schotel van de cultuur in de eerste 3 h van cultuur, met het oog op een gezuiverde bevolking van cellen exposeren snelle hechting9. Hier beschrijven we de ontwikkelde methode om mesenchymale stamcellen te isoleren van de eierstokweefsel.
Protocol
Representative Results
Discussion
We bieden hierin blijkt dat MSCs geïsoleerd van canine ovariaal weefsel, die wordt beschouwd als biologisch afval na ovariotomie kunnen zijn. Wijten aan het feit dat vele celtypes worden in de eierstok gevonden kunnen, voorgesteld hebben wij een protocol om te selecteren op basis van hun snelle naleving van kunststof, die met succes cellen selecteren die groeide in een enkelgelaagde met een fibroblast-achtige morfologie MSCs.
Het eerste verslag van de afleiding van MSCs uit beenmerg was gebas…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
De auteurs erkennen het canine sterilisatie programma op UNESP-FCAV voor het vriendelijk het verstrekken van de eierstokken. Dit werk werd gesteund door subsidies van het FAPESP (proces nr. 2013/14293-0) en CAPES.
Materials
| DPBS | Thermo Fisher | 14190144 | |
| Collagenase I | Thermo Fisher | 17100017 | |
| Tissue flask | Corning | CLS3056 | |
| DMEM low glucose | Thermo Fisher | 11054020 | |
| FBS | Thermo Fisher | 12484-010 | |
| TrypLE express | Thermo Fisher | 12604021 | |
| StemPro Adipogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007001 | |
| StemPro Chondrogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007101 | |
| StemPro Osteogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007201 | |
| STEMdiff Definitive Endoderm Kit | StemCell | 5110 | |
| Penicillin-Streptomycin | Thermo Fisher | 15070063 | |
| CD45 | AbD Serotec | MCA 2035S | |
| CD34 | AbD Serotec | MCA 2411GA | |
| CD90 | AbD Serotec | MCA 1036G | |
| CD44 | AbD Serotec | MCA 1041 | |
| Nestin | Milipore | MAB353 | |
| β-Tubulin | Milipore | MAB1637 | |
| DDX4 | Invitrogen | PA5 -23378 | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR80F | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR120F |
Referências
- Gazit, Z., Pelled, G., Sheyn, D., Kimelman, N., Gazit, D., Atala, A., Lanza, R. Mesenchymal stem cells. Handbook of Stem Cells (2nd Edition). , 513-527 (2013).
- Zipori, D. The nature of stem cells: state rather than entity. Nature Reviews Genetics. 5 (11), 873-878 (2004).
- Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology. Endocrine Reviews. 22 (2), 255-288 (2001).
- Ahmed, N., Thompson, E. W., Quinn, M. A. Epithelial-mesenchymal interconversions in normal ovarian surface epithelium and ovarian carcinomas: an exception to the norm. Journal of Cellular Physiology. 213 (3), 581-588 (2007).
- Bukovsky, A., Svetlikova, M., Caudle, M. R. Oogenesis in cultures derived from adult human ovaries. Reproductive Biology and Endocrinology. 3 (1), 17 (2005).
- Gong, S. P., et al. Embryonic stem cell-like cells established by culture of adult ovarian cells in mice. Fertility and Sterility. 93 (8), 2594-2601 (2010).
- Johnson, J., Canning, J., Kaneko, T., Pru, J. K., Tilly, J. L. Germline stem cells and follicular renewal in the postnatal mammalian ovary. Nature. 428 (6979), 145 (2004).
- Deans, R. J., Moseley, A. B. Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses. Experimental Hematology. 28 (8), 875-884 (2000).
- Trinda Hill, A. B. T., Therrien, J., Garcia, J. M., Smith, L. C. Mesenchymal-like stem cells in canine ovary show high differentiation potential. Cell Proliferation. 50 (6), 12391 (2017).
- Dominici, M. L. B. K., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8, 4315-4317 (2006).
- Friedenstein, A. J., Piatetzky-Shapiro, I. I., Petrakova, K. V. Osteogenesis in transplants of bone marrow cells. Development. 16 (3), 381-390 (1966).
- Kuznetsov, S. A., et al. Single-colony derived strains of human marrow stromal fibroblasts form bone after transplantation in vivo. Journal of Bone and Mineral Research. 12 (9), 1335-1347 (1997).
