Härledning och differentiering av hundarnas cystor mesenkymala stamceller
Summary
Häri, beskriver vi en metod för isolering, expansion och differentiering av mesenkymala stamceller från Hundarnas äggstocksvävnad.
Abstract
Intresset mesenkymala stamceller (MSC) har ökat under det senaste decenniet på grund av sin användarvänlighet isolering, expansion och kultur. Studier har nyligen visat brett differentiering kapacitet som dessa celler besitter. Äggstocken representerar en lovande kandidat för cellbaserade terapier på grund av att den är rik på MSCs och som det ofta slängs efter ovariektomi operationer som biologiskt avfall. Denna artikel beskriver förfaranden för isolering, expansion, och differentiering av MSCs härrör från Hundarnas äggstocken, utan nödvändigheten av cell-sortering tekniker. Detta protokoll utgör ett viktigt verktyg för regenerativ medicin på grund av bred tillämpligheten av dessa mycket deriverbar celler i kliniska och terapeutiska använder.
Introduction
Antalet publicerade studier som fokuserar på stamceller har ökat avsevärt under det senaste decenniet, en forskningsinsats som har förstärkts av den kollektiva mål att upptäcka kraftfulla regenerativ medicin terapier. Stamceller har två primära definierande markörer: self – renovering och differentiering. Mesenkymala stamceller ansvarar för regelbunden vävnad omsättning och har en mer begränsad kapacitet av differentiering jämfört med embryonala stamceller1. Nyligen många studier har visat ett brett utbud av differentiering av MSCs, och ett ämne som diskuteras är huruvida det finns skillnader mellan embryonala och vuxna stamceller på alla2.
Ovarium ytan epitelet är en obekräftad lager av celler, relativt mindre differentierade, som uttrycker både epitelial och mesenkymala markörer3, behålla förmåga att differentieras till olika typer av celler som svar på Miljösignaler4. Den exakta placeringen av stamceller i äggstocken är inte känt; Det har dock föreslagits att bipotential stamfäder i tunica albuginea ger upphov till könsceller5. Immunologiska studier har hypotesen att dessa celler har en stromal ursprung6 eller befinner dig i eller proximala till äggstocken yta7. Eftersom mesenkymala stamceller express många receptorer som spelar en viktig roll i cell adhesion8, var ett experiment avsedd att testa hypotesen att välja en population av celler med snabb vidhäftning skulle isolera en population av celler klart characterizable som mesenkymala i naturen. Nyligen rapporterade vår grupp härledningen av MSCs från äggstocksvävnad utifrån deras kapacitet av vidhäftning till plast ytan av kultur skålen i första 3 h kultur, för att erhålla en renad population av celler uppvisar snabb vidhäftning9. Här beskriver vi den utvecklade metoden för mesenkymala stamceller isolering från äggstocksvävnad.
Protocol
Representative Results
Discussion
Häri bevisa vi att MSCs kan isoleras från Hundarnas äggstocksvävnad, som anses biologiskt avfall efter ovariektomi. På grund av att många celltyper kan hittas i äggstockarna, föreslog vi ett protokoll Markera MSCs baserat på deras snabba adherence till plast, som framgångsrikt markerade celler som växte i en enskiktslager med en fibroblast-liknande morfologi.
Den första rapporten från härledningen av MSCs från benmärg baserades på MSCs plast vidhäftning kapacitet under de fö…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Författarna erkänner hund sterilisering programmet vid UNESP-FCAV för vänligt att ge äggstockarna. Detta arbete stöds av bidrag från FAPESP (process nr 2013/14293-0) och uddar.
Materials
| DPBS | Thermo Fisher | 14190144 | |
| Collagenase I | Thermo Fisher | 17100017 | |
| Tissue flask | Corning | CLS3056 | |
| DMEM low glucose | Thermo Fisher | 11054020 | |
| FBS | Thermo Fisher | 12484-010 | |
| TrypLE express | Thermo Fisher | 12604021 | |
| StemPro Adipogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007001 | |
| StemPro Chondrogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007101 | |
| StemPro Osteogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007201 | |
| STEMdiff Definitive Endoderm Kit | StemCell | 5110 | |
| Penicillin-Streptomycin | Thermo Fisher | 15070063 | |
| CD45 | AbD Serotec | MCA 2035S | |
| CD34 | AbD Serotec | MCA 2411GA | |
| CD90 | AbD Serotec | MCA 1036G | |
| CD44 | AbD Serotec | MCA 1041 | |
| Nestin | Milipore | MAB353 | |
| β-Tubulin | Milipore | MAB1637 | |
| DDX4 | Invitrogen | PA5 -23378 | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR80F | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR120F |
Referências
- Gazit, Z., Pelled, G., Sheyn, D., Kimelman, N., Gazit, D., Atala, A., Lanza, R. Mesenchymal stem cells. Handbook of Stem Cells (2nd Edition). , 513-527 (2013).
- Zipori, D. The nature of stem cells: state rather than entity. Nature Reviews Genetics. 5 (11), 873-878 (2004).
- Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology. Endocrine Reviews. 22 (2), 255-288 (2001).
- Ahmed, N., Thompson, E. W., Quinn, M. A. Epithelial-mesenchymal interconversions in normal ovarian surface epithelium and ovarian carcinomas: an exception to the norm. Journal of Cellular Physiology. 213 (3), 581-588 (2007).
- Bukovsky, A., Svetlikova, M., Caudle, M. R. Oogenesis in cultures derived from adult human ovaries. Reproductive Biology and Endocrinology. 3 (1), 17 (2005).
- Gong, S. P., et al. Embryonic stem cell-like cells established by culture of adult ovarian cells in mice. Fertility and Sterility. 93 (8), 2594-2601 (2010).
- Johnson, J., Canning, J., Kaneko, T., Pru, J. K., Tilly, J. L. Germline stem cells and follicular renewal in the postnatal mammalian ovary. Nature. 428 (6979), 145 (2004).
- Deans, R. J., Moseley, A. B. Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses. Experimental Hematology. 28 (8), 875-884 (2000).
- Trinda Hill, A. B. T., Therrien, J., Garcia, J. M., Smith, L. C. Mesenchymal-like stem cells in canine ovary show high differentiation potential. Cell Proliferation. 50 (6), 12391 (2017).
- Dominici, M. L. B. K., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8, 4315-4317 (2006).
- Friedenstein, A. J., Piatetzky-Shapiro, I. I., Petrakova, K. V. Osteogenesis in transplants of bone marrow cells. Development. 16 (3), 381-390 (1966).
- Kuznetsov, S. A., et al. Single-colony derived strains of human marrow stromal fibroblasts form bone after transplantation in vivo. Journal of Bone and Mineral Research. 12 (9), 1335-1347 (1997).
