É apresentado aqui um protocolo útil para a fixação do pulmão que cria uma condição estável para a avaliação histológica de espécimes do pulmão de um modelo do rato do enfisema. A vantagem principal deste modelo é que pode fixar muitos pulmões com a mesma pressão constante sem colapso ou deflação do pulmão.
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Artigo de método
Fixação pulmonar pressão constante para avaliação de enfisema em camundongos
Neste artigo
Resumo
Resumo
O enfisema é uma característica significativa da doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC). Os estudos que envolvem um modelo emphysematous do rato exigem a fixação óptima do pulmão para produzir espécimes histológicos de confiança do pulmão. Devido à natureza da composição estrutural do pulmão, que consiste em grande parte de ar e tecido, há um risco de que ela desmorona ou desestica durante o processo de fixação. Existem vários métodos de fixação pulmonar, cada um dos quais tem suas próprias vantagens e desvantagens. O método de fixação pulmonar aqui apresentado utiliza pressão constante para possibilitar a avaliação tecidual ideal para estudos utilizando um modelo de pulmão de camundongo emphysematoso. A principal vantagem é que ele pode corrigir muitos pulmões com a mesma condição de uma só vez. Os espécimes pulmonares são obtidos de camundongos crônicos expostos ao fumo do cigarro. A fixação pulmonar é realizada por meio de equipamentos especializados que possibilitam a produção de pressão constante. Esta pressão constante mantem o pulmão em um estado razoavelmente inflado. Assim, este método gera um espécime histológico do pulmão que é adequado para avaliar o enfisema leve induzido por fumaça de cigarro.
Introdução
A DPOC é uma das principais causas mundiais de óbito1. A fumaça do cigarro é a causa mais importante da DPOC, mas os mecanismos de patogênese permanecem incompletamente definidos. A DPOC demonstra duas características principais, incluindo a limitação progressiva do fluxo aéreo e uma resposta inflamatória anormal do pulmão. A desordem emphysematous ocorre freqüentemente nos pulmões de pacientes de DPOC2. Os achados patológicos do enfisema são caracterizados pela destruição da parede alveolar3. Várias espécies animais têm sido utilizadas para gerar modelos de DPOC in vivo (ou seja, cães, cobaias, m....
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Protocolo
Os seguintes métodos foram aprovados pelos comitês de cuidados e uso de animais da faculdade de medicina da Universidade Juntendo. As directrizes para a conduta apropriada de experimentos animais, Conselho da ciência de Japão, junho 1, 2006 foram seguidas. Existem três etapas principais neste método: 1) dissecção do camundongo, 2) exsanguinação pulmonar e 3) fixação de tecidos pulmonares assistidos por equipamentos especializados. Tipicamente, os espécimes do pulmão são processados ao Embebimento após 48 h da fixação12,15,16,17,
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Resultados
Conforme descrito anteriormente, o equipamento especializado, que gera pressão constante estendida, pode ser dividido em três partes (Figura 3A). A parte inferior é o ponto no qual se insere a amostra pulmonar (Figura 4a). O pulmão é conectado através de uma cânula (20 G) à ponta do fluxo de formalina usando um galo de parada de três vias (Figura 4B). A pressão é gerada a partir dos.......
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Discussão
O procedimento de fixação para os pulmões de roedores aqui apresentados não é novidade; no entanto, este sistema tem várias vantagens. Em primeiro lugar, pode fixar muitos pulmões (máximo de 20) com a mesma condição de uma só vez. A sociedade de patologia toxicológica afirma que a pressão para a instilação da gravidade varia de 22 – 25 cmH2O22. Notavelmente, vários estudos têm realizado fixação pulmonar a uma pressão de 25 cmH2O13,
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Divulgações
Os autores não têm interesses concorrentes para declarar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado em parte pelo JSPS KAKENHI Grant Number 26461199 (T. Sato) e pelo Instituto de medicina ambiental e de gênero, faculdade de medicina da Universidade de Juntendo, Grant Number E2920 (T. Sato). O financiador não teve nenhum papel no desenho dos métodos atuais e na escrita do manuscrito.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 10% de formalina (solução tampão neutro de formalina) | Wako | 060-01667 | |
| Pinça dobrada | Hammacher | HSC187-11 | |
| Cânula, tamanho 20G | Terumo | SR-FS2032 | |
| Cânula, tamanho 22G | Terumo | SR-OT2225C | Cânula para exsanguinar o pulmão |
| Fórceps | Hammacher | HSC184-10 | |
| Kimtowel | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 61000 | |
| Kimwipe | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 62011 | |
| Recipiente inferior (material de vidro acrílico) | Tokyo Science | Custom-made | Componente de equipamento de pressão |
| Bomba de rolo | Nissin Scientific Corp | NRP-75 | Máquina de bomba para exsanguinar pulmão |
| Bomba de rolo RP-2000 | Eyela (Tóquio Rikakikai Co. Ltd) | 160200 | Bomba de equipamento de pressão |
| Tubo de silicone Ø 9 mm | Sansyo | 94-0479 | Componente do equipamento de pressão |
| Somnopentyl (64,8 mg / mL) | Kyoritsu Seiyaku | SOM02-YA1312 | Pentobarbital Tesoura cirúrgica de sódio |
| Hammacher | HSB014-11 | ||
| Fio de sutura, tamanho 0 | Nescosuture | GA01SW | |
| Seringa, 1 mL | Terumo | SS-01T | |
| Seringa, 1 ml com agulha | Terumo | SS-01T2613S | |
| Seringa, 10 mL | Terumo | SS-10ESZ | |
| Torneira de três vias | Terumo | TS-TR1K01 | |
| Recipiente superior (material de vidro acrílico) | Tokyo Science | Componente de equipamento de pressão feito sob medida |
Referências
- Vogelmeier, C. F., et al. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive lung disease 2017 report. GOLD Executive Summary. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 195 (5), 557-582 (2017).
- Pauwels, R. A., Rabe, K. F.
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Reimpressões e permissões
