साल्मोनेला एसपीपी की स्क्रीनिंग के लिए एक उच्च प्रवाह मंच./शिगेला एसपीपी.
Summary
साल्मोनेला एसपीपी./शिगेला एसपीपी. आम रोगज़नक़ों दस्त के लिए जिंमेदार ठहराया है । यहां, हम साल्मोनेला एसपीपी की स्क्रीनिंग के लिए एक उच्च प्रवाह मंच का वर्णन ।/शिगेला एसपीपी. निर्देशित संस्कृति के साथ संयुक्त वास्तविक समय पीसीआर का उपयोग करना ।
Abstract
मल-मौखिक संचरण तीव्र आंत्रशोथ का समय-समय पर होता है, खासकर जब लोग जो भोजन और पानी संभाला साल्मोनेला एसपीपी./Shigella एसपीपी द्वारा संक्रमित हैं । साल्मोनेला एसपीपी./Shigella एसपीपी. का पता लगाने के लिए स्वर्ण मानक विधि प्रत्यक्ष संस्कृति है, लेकिन यह श्रम प्रधान और समय लेने वाली है । यहां, हम साल्मोनेला एसपीपी./Shigella एसपीपी. स्क्रीनिंग के लिए एक उच्च प्रवाह मंच का वर्णन, निर्देशित संस्कृति के साथ संयुक्त वास्तविक समय पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया (पीसीआर) का उपयोग कर । वहां दो प्रमुख चरणों: वास्तविक समय पीसीआर और निर्देशित संस्कृति हैं । नमूना संग्रह, पूर्व संवर्धन, डीएनए निष्कर्षण और वास्तविक समय पीसीआर: पहले चरण (रीयल-टाइम पीसीआर) के लिए, हम विधि के प्रत्येक कदम की व्याख्या । यदि वास्तविक समय पीसीआर परिणाम सकारात्मक है, तो दूसरा चरण (निर्देशित संस्कृति) किया जाता है: चयनात्मक संस्कृति, जैव रासायनिक पहचान और सीरम वैज्ञानिक लक्षण वर्णन । हम इसे से उत्पंन प्रतिनिधि परिणामों को भी वर्णन करते हैं । यहां वर्णित प्रोटोकॉल साल्मोनेला एसपीपी की तीव्र, विशिष्ट, संवेदनशील और उच्च प्रवाह स्क्रीनिंग के लिए एक मूल्यवान मंच होगा ।/शिगेला एसपीपी.
Introduction
दस्त अभी भी एक उच्च घटना दर दुनिया भर में1,2के साथ एक आम स्वास्थ्य समस्या है । हालांकि मृत्यु दर अपेक्षाकृत कम है, कुछ रोगियों (जैसे ढीले और पानी मल, बाथरूम में जाने के लिए एक तात्कालिकता) है, जो सामाजिक प्रभाव बहुत उच्च3,4बनाने के लिए सप्ताह के लिए विभिन्न लक्षण दिखाते हैं । अधिक गंभीरता से, कुछ रोगियों को भी चिड़चिड़ा आंत्र सिंड्रोम विकसित हो सकता है अगर अनुपचारित5छोड़ दिया है । वहां बैक्टीरिया, वायरस और परजीवी है कि6दस्त पैदा कर सकता है के विभिंन प्रकार हैं । साल्मोनेला एसपीपी./शिगेला एसपीपी. तीव्र आंत्रशोथ7,8,9,10,11के संचरण के लिए सबसे आम बैक्टीरिया के बीच में हैं । इसलिए, कई काउंटियों को नियमित साल्मोनेला एसपीपी के लिए कानून या विनियम जारी किए गए हैं./शिगेला एसपीपी. जो लोग भोजन और पानी संभाल जाएगा के बीच स्क्रीनिंग । उदाहरण के लिए, चीनी सरकार ने अनिवार्य साल्मोनेला एसपीपी के लिए कानून जारी किए हैं ।/शिगेला एसपीपी. स्क्रीनिंग साल में एक बार ।
साल्मोनेला एसपीपी के लिए स्वर्ण मानक पद्धति./शिगेला एसपीपी. डिटेक्शन बैक्टीरिया कल्चर है । बैक्टीरिया संस्कृति और लगातार जैव रासायनिक पहचान और सीरम वैज्ञानिक लक्षण वर्णन के माध्यम से, हम बैक्टीरिया की प्रजातियों की पहचान कर सकते हैं, जो रोगियों के उपचार के लिए सहायता के लिए रोग प्रकोप प्रबंधन और रोगाणुरोधी रूपरेखा की सुविधा सकता है 12. यह भी साल्मोनेला एसपीपी के दौरान संक्रमण के स्रोत का पता लगाने में मदद कर सकता है ।/शिगेला एसपीपी. प्रकोप13. हालांकि, इस विधि श्रम गहन है (मैनुअल आपरेशन की आवश्यकता होती है) और समय लेने वाली (कई दिन लेने), विशेष रूप से नमूनों की बड़ी संख्या के परीक्षण के लिए7. इसके अलावा, व्यवहार्य लेकिन गैर culturable (VBNC) साल्मोनेला एसपीपी./शिगेला एसपीपीकुछ स्टूल नमूने 14 में मौजूद हो सकताहै । इन कमियों को ध्यान में रखते हुए कई प्रयोगशालाओं ने साल्मोनेला एसपीपी का पता लगाने के लिए नई तकनीक विकसित करने की कोशिश की है ।/शिगेला एसपीपी.15,16,17,18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25. इन सभी पद्धतियों में नाभिकीय अम्ल प्रवर्धन परीक्षण (NAAT) का प्रयोग होता है, जिसके बीच में पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) सबसे आम है । इन NAAT आधारित तरीकों में से एक प्रमुख सीमा है कि मृत बैक्टीरिया, भी बैक्टीरियल अपूर्ण जीनोमिक डीएनए युक्त मलबे, सकारात्मक परिणाम26दिखा सकता है, जो काफी हद तक रोग के सही निदान को प्रभावित कर सकता है । Blanco एट अल. ने दिखाया है कि आणविक परख अत्यधिक संवेदनशील है, न केवल संस्कृतियों में व्यवहार्य साल्मोनेला के लिए, लेकिन यह भी आंशिक जीनोम और मृत या व्यवहार्य बैक्टीरिया को पिछले संक्रमण या26प्रदूषण से । इसलिए नई तकनीक विकसित की जानी चाहिए ।
यहाँ, हम एक उपंयास विधि है कि NAAT आधारित विधि और संवर्धन को जोड़ती है वर्णित है । जैसा चित्र 1में दिखाया गया है, यह नई विधि पहले रीयल-टाइम पीसीआर स्क्रीनिंग लागू करती है और फिर बैक्टीरिया कल्चर और पहचान के लिए पॉजिटिव नमूने भेजे जाते हैं ।
Protocol
Representative Results
Discussion
जबसे साल्मोनेला एसपीपी./शिगेला एसपीपी. अक्सर खाद्य विषाक्तता के साथ जुड़े रहे हैं और तीव्र आंत्रशोथ के मल-मौखिक संचरण28,29 और नित्य विधि या तो श्रम-प्रधान या समय लेने वाली है <s…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम Zhuhai के विज्ञान और प्रौद्योगिकी कार्यक्रम, चीन (अनुदान संख्या 20171009E030064), गुआंग्डोंग, चीन (अनुदान संख्या 2015A020211004) के विज्ञान और प्रौद्योगिकी कार्यक्रम और सामान्य प्रशासन के विज्ञान और प्रौद्योगिकी कार्यक्रम का समर्थन किया गया था की गुणवत्ता पर्यवेक्षण, निरीक्षण और संगरोध के पीपुल्स रिपब्लिक ऑफ चाइना (अनुदान संख्या 2016IK302, 2017IK224).
Materials
| Tris | Sigma | 10708976001 | |
| EDTA | Sigma | 798681 | |
| NP40 | Sigma | 11332473001 | |
| ddH2O | Takara | 9012 | |
| PrimeSTAR HS (Premix) | Takara | R040Q | |
| Nutrient Broth | LandBridge | CM106 | |
| Nutrient agar | LandBridge | CM107 | |
| Selenite Cystine medium | LandBridge | CM225 | |
| XLD | LandBridge | CM219 | |
| MAC | LandBridge | CM908 | |
| Salmonella chromogenic agar | CHROMagar | SA130 | |
| Salmonella diagnostic serum | Tianrun | SAL60 | |
| Shigella diagnostic serum | Tianrun | SHI54 | |
| anal swab (collecting tube plus) | Huachenyang | ||
| slide | Mingsheng | 7102 | |
| micro-loop | Weierkang | W511 | |
| incubator | Jinghong | DNP-9082 | |
| autoclave | AUL | SS-325 | |
| dry bath | Jinghong | KB-20 | |
| automated microbial identification system | bioMérieux | VITEK2 | other equivalent system could be used |
| fluorescent real-time PCR machine | ThermoFisher | ABI7500 | other equivalent machine could be used |
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