Aqui nós apresentamos um protocolo detalhado para eficientemente tornando homo - e heterografts entre melancia e cabaça, além de métodos de amostragem de tecido, geração de dados e análise de dados, para a investigação de microRNAs frio-responsivo.
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Artigo de método
Geração de Homo - e Heterografts entre melancia e cabaça para o estudo de MicroRNAs frio-responsivo
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
MicroRNAs (miRNAs) são endógenos pequeno não-codificantes RNAs de cerca 20-24 nt, conhecida por desempenhar um papel importante no desenvolvimento da planta e adaptação. Há uma acumular evidências mostrando que as expressões de determinados miRNAs são alteradas quando o enxerto, uma prática agrícola comumente utilizada pelos agricultores para melhorar a tolerância das culturas a estresses bióticos e abióticos. Cabaça é uma colheita inerentemente resistentes às alterações climáticas, em comparação com muitos outras abóboras grandes, incluindo melancia, tornando-o um dos porta-enxertos mais utilizados para o último. O recente avanço das tecnologias de sequenciamento de alto rendimento tem proporcionado grandes oportunidades para investigar os miRNAs frio-responsivo e suas contribuições para vantagens heterotópico; ainda, os procedimentos experimentais adequados são um pré-requisito para esta finalidade. Aqui, apresentamos um protocolo detalhado para a geração eficiente de homo e heterografts entre o frio-suscetíveis de melancia e a cabaça tolerante ao frio, além de métodos de amostragem de tecido, geração de dados e análise de dados. Os métodos apresentados são também úteis para outros sistemas de planta-enxerto, para interrogar miRNA regulamentos sob vários estresses ambientais, tais como calor, seca e salinidade.
Introdução
Enxertia tempo foi empregado como uma técnica agrícola para melhorar a produção agrícola e tolerância a estresses bióticos e abióticos1,2,3. Em sistemas de heterografting, porta-enxertos elite podem aumentar a absorção de água e nutrientes das plantas, reforçar a resistência a patógenos de solo e limitar os efeitos negativos da toxicidade do metal4,5, que podem conferir os enxertos uma reforçada vigor de crescimento e maior tolerância a estresses ambientais. Em muitos casos, heterografting também pode afetar as qualid....
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Protocolo
1. esterilização e germinação de sementes
- Para a esterilização de superfície, mergulhe as sementes de cabaça num copo de 500 mL com água a 58 ° C, com agitação ocasional, até que a temperatura da água cai para 40 ° C.
- Enquanto isso, coloque 3 kg de solo de turfa em um saco de nylon e, para esterilizar, autoclave em 120 ° C/0.5 MPa por 20 min.
- Continue a embeber as sementes de cabaça para 4-5 h mais com nenhuma agitação.
- Uma vez que a água atinge a temperatura ambiente, lave as sementes 2 x - 3 x com água destilada.
- Escorra o excesso de água e permitir que as sementes germinar em um saco de gaze a 28 ° C em uma câmara de....
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Resultados
Figura 2: fenótipos de vários enxertos em temperatura ambiente e condições de frio-salientou. (um) este painel mostra homo e heterografted mudas à temperatura ambiente como o controle. (b) este painel mostra homo e heterografted mudas após 48 h de tratamento pelo frio.
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Discussão
Neste protocolo, descrevemos em detalhe um método altamente eficiente e reprodutível para tornar homo e heterografts entre melancia e cabaça. Esse método, que exige nenhum equipamento específico, é muito fácil de operar e normalmente tem uma taxa de sobrevivência muito alta de enxertia. O método também pode ser usado para fazer enxertos para outras abóboras, tais como entre melancia, pepino e abóbora.
É interessante notar que o tamanho relativo (idade) do porta-enxerto e descendente é fundamen.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar. Os dados de sequenciamento de RNA pequenos são depositados no GenBank sob o número de adesão SRP136842.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de ciências naturais da China (31772191), o projeto de pesquisa para o interesse público na província de Zhejiang (2017C 32027), a chave de ciência projeto de melhoramento de plantas em Zhejiang (2016C 02051) e o programa nacional de o apoio de top-notch jovens profissionais (para lojas).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Reagente TRIzol | Invitrogen | 15596026 | |
| DNase livre de RNA I | Takara | D2270A | |
| Truseq Kit de preparação de amostra de RNA pequeno Illumina | RS-200-0012 | ||
| 2100 Bionalyser | Agilent | 5067 | |
| DNA Polimerase | Thermo Fisher Scientific | F530S | |
| UEA sRNA workbench versão 2.4-planta (software) | NA | NA | http://srna-workbench.cmp.uea.ac.uk/ |
| Banco de dados Rfam 11.0 ( website) | NA | NA | http://rfam.janelia.org |
| miRBase 22.0( website) | NA | NA | http://www.mirbase.org/ |
| MIREAP(software) | NA | NA | https://sourceforge.net/projects/mireap/ |
| TargetFinder ( software) | NA | NA | http://targetfinder.org/ |
Referências
- Schwarz, D., Rouphael, Y., Colla, G., Venema, J. H. Grafting as a tool to improve tolerance of vegetables to abiotic stresses: Thermal stress, water stress and organic pollutants. Scientia Horticulturae. 127, 162-171 (2010).
- Li, Y., et al. Mechanisms of tolerance differences in cucumber seedlings grafted on rootstocks with different tolerance to low temperature and weak light stresses. Turkish Journal of Botany. 39 (4), 606-614 (2015).<....
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Reimpressões e permissões
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