Coloração elástica em lâminas de parafina-Embedded de pT3N0M0 tecido de câncer gástrico

Summary

Aqui, nós apresentamos um protocolo da mancha elástica para identificar fibras elásticas em tecidos pT3N0M0 do cancro gastric em seções formalin-fixadas, parafina-encaixadas. Subseqüentemente, nós descrevemos um método para determinar se as pilhas do tumor invadem além do lamina elástico.

Abstract

O lamina elástico, que é localizado geralmente na camada secundário-Mesothelial, adjacente às pilhas Mesothelial do peritônio, é anfifílico na coloração do hematoxilina e do eosina (H & e) mas pode ser visualizado com a mancha elástica. Um dos benefícios importantes da mancha elástica é que faz fácil determinar se as pilhas do tumor invadiram além do lamina elástico. Isto ajuda em examinar a extensão da invasão peritonealny da superfície, assim distinguindo os estágios de pT3 e de pT4 no cancro gastrintestinal. Neste estudo, nós apresentamos um protocolo para identificar fibras elásticas nas seções formalin-fixadas, parafina-encaixadas pT3N0M0 do tecido do cancro gastric. Nós preparamos seções de parafina de 5 μm fixadas em lâminas e, em seguida, todas as lâminas são desparaffinadas e rehidratados durante o procedimento de coloração. Posteriormente, todas as secções são oxidadas por permanganato de potássio, branqueada por ácido oxálico, manchada por coloração elástica, e contracorada por Van Gieson. Finalmente, examinamos o efeito da coloração; a lâmina elástica é manchada azul-preto e as fibras do colagénio são manchadas vermelhas, quando as pilhas cancerosas forem manchadas em máscaras de variação do amarelo. Também descrevemos detalhadamente os métodos utilizados para determinar a relação posicional entre as células cancerosas e a lâmina elástica. Este método é simples, de baixo custo, e amplamente aplicável na identificação da invasão de superfície peritoneal no cancro gastrintestinal por causa de sua seletividade proeminente para fibras elásticas e resultados autênticos.

Introduction

De acordo com o sistema de estadiamento do câncer de tumor, linfonodo e metástase (TNM), o prognóstico do câncer gástrico no estágio patológico pT4 é significativamente pior do que no pT3 (8º UICC/AJCC)¹. Com o câncer gástrico, a classificação do tumor primário (pT) geralmente depende da profundidade da invasão tumoral². O cancro gastric do pT3 do estágio patológico é definido como o cancro que invade através do própria dos muscularis em tecidos subserosal, visto que pT4 o cancro gastric é definido como o cancro que penetra à superfície do peritoneum visceral. A presença da invasividade da superfície peritoneal é a chave para distinguir os dois estágios². No entanto, como a camada celular Mesothelial peritoneal é muito fina, pode ser danificada durante a cirurgia, o tratamento pós-operatório e a fixação³. Além disso, alterações inflamatórias relacionadas ao tumor e fibrose podem prejudicar a anatomia normal do peritônio, o que torna muito difícil julgar com precisão a invasão da superfície peritoneal usando apenas a coloração de H & E⁴. Os métodos auxiliares atuais do diagnóstico tais como a citologia e immunohistochemistry são do valor diagnóstico limitado^5,6 porque são falso-positivos ou têm um baixo cost-efetividade.

A membrana serosal inclui o peritônio, a pleura e o pericárdio, e é composta pelo mesothelium, uma membrana basal e uma camada submesothelial⁷. Uma característica histológica comum da membrana serosal é a presença de uma lâmina elástica na camada submesotelial, adjacente às células mesotheliais^8,9. O lamina elástico tem uma habilidade antiprejudicial forte e pode serir como um marcador prognóstico alternativo se as pilhas Mesothelial são destruídas pela inflamação ou pela fibrose tumor-relacionada severa³. A lâmina elástica compreende principalmente do elastina e do Microfibril¹⁰, que pode ser visualizado pela mancha elástica. A principal razão por trás do uso da coloração elástica é que a elastina forma uma ligação de hidrogênio com o grupo fenólico de resorcinol na solução de elastina, fazendo com que as fibras elásticas sejam manchadas de cor azul-preta. Após a coloração contrastante de Van Gieson (VG), as fibras colágenas podem ser manchadas de vermelho e as fibras musculares e glóbulos vermelhos podem ser manchadas de amarelo^8,11,12,13.

A oitava edição do estadiamento TNM do câncer de pulmão define a invasão pleural visceral (T2) como uma invasão tumoral além da lâmina elástica ou uma invasão na superfície da pleura visceral². Estudos sobre o cancro colorretal demonstraram que a invasão da lâmina elástica no cancro colorretal pT3 pode ser a razão para prognoses pobres. A taxa de sobrevida total e livre de doença de 5 anos do câncer colorretal também foi comprovada como pT4a^,13,14,15. Baseado em nossos estudos precedentes na mancha elástica, a invasão elástica do lamina foi encontrada para ter uma influência negativa significativa no prognóstico do cancro gastric de pT3 e deve ser tratada a mesma maneira que o cancro gastric pT4a¹². Assim, este método simples e rentável pode ajudar a eliminar a incerteza nos resultados obtidos através da coloração de H & E, e outras limitações comuns associadas a outros métodos auxiliares de diagnóstico, incluindo citologia e imunoistoquímica, entre Outros. Este método pode ser usado eficientemente para diagnosticar invasões de superfície peritonealny do cancro gastrintestinal, especial em alguns casos ambíguos. É conveniente desde que a mancha de H & e e outras manchas fazem geralmente difícil identificar tais invasões. Este método também garante uma confiabilidade dos resultados, uma vez que é muito seletivo, especialmente para fibras elásticas. Aqui, nós conduzimos a mancha elástica para determinar se as pilhas do tumor invadiram a lâmina elástica em pT3N0M0 o cancro gastric¹².

Este método é usado para identificar fibras elásticas nos tecidos em formalin-fixo, seções parafina-encaixadas, e pode ser usado para seções congeladas também. Aqui, nós escolhemos seções parafina-encaixadas para a melhor manutenção da morfologia celular e do tecido. Todas as etapas deste protocolo acontecem à temperatura ambiente. Um kit de coloração comercial que inclui uma solução de permanganato de potássio, uma solução de ácido oxálico, uma solução de elastina e uma solução de Van Gieson é usada no estudo apresentado.

Protocol

Entre 1994 e 2005, as amostras de pacientes foram selecionadas por dois patologistas gastrintestinais experientes no hospital de câncer afiliado da escola de medicina de Xiangya, Universidade Central do Sul, de doentes que sofreram gastrectomia de Neoplasias do estômago, com um diagnóstico patológico postoperative do cancro gastric no estágio de pT3N0M0 (de acordo com o sétimo estadiamento de TNM). Este estudo foi aprovado pelo Comitê de ética em revisão. 1. seccionamento Co…

Representative Results

Uma coloração elástica bem sucedida revela claramente A lâmina elástica e as células cancerosas em pT3 cancro gástrico. Figura 1 -campo de baixa potência, verificado microscopicamente após coloração da solução de elastina, antes da contratura de Van Gieson de acordo com o protocolo mencionado-mostra que a lâmina elástica está próxima das células mesotheliais serosais e é manchada de cor azul-preta na forma de filamentos, e ainda há uma cer…

Discussion

Este método proposto fornece uma abordagem precisa para identificar a lâmina elástica subserosal. O método pode ser usado para avaliar se as células tumorais invadiram a lâmina elástica em pT3N0M0 câncer gástrico¹². O lamina elástico é avermelhado em seções H & e-manchadas, que não poderiam facilmente ser distinguidos das fibras do colagénio, e outros métodos auxiliares existentes do diagnóstico, tais como a citologia e Immunohistochemistry, igualmente exercida o valor diagnóstic…

Materials

Elastin-Van Gieson staining kit	Baso	BA4083B	Used for staining of elastic fibers, collagen fibers and myofibers
Permount TM Mounting Medium	MXB Biotechnologies	DAB-0033	Used for mounting
Ethanol	LMAI Bio	LM64-17-5	100%
Xylene	LMAI Bio	LX820585