प्राथमिक ल्यूकेमिया कोशिकाओं के चयापचय प्रोफ़ाइल का आकलन
Summary
यहां हम ल्यूकेमिया रोगियों अस्थि मज्जा और उनके चयापचय राज्य के विश्लेषण से ल्यूकेमिया से प्रभावित कोशिकाओं के अलगाव के लिए एक प्रोटोकॉल मौजूद । प्राथमिक ल्यूकेमिया कोशिकाओं के चयापचय प्रोफ़ाइल का आकलन बेहतर प्राथमिक कोशिकाओं की मांग को चिह्नित करने में मदद कर सकता है और अधिक व्यक्तिगत दवा तक ले सकता है ।
Abstract
कैंसर कोशिकाओं की चयापचय आवश्यकता नकारात्मक अस्तित्व और उपचार प्रभावकारिता को प्रभावित कर सकते हैं । आजकल, चयापचय रास्ते की दवा लक्ष्यीकरण ट्यूमर के कई प्रकार में परीक्षण किया जाता है । इस प्रकार, कैंसर कोशिका चयापचय सेटअप के लक्षण वर्णन करने के लिए सही मार्ग लक्षित करने के लिए रोगियों के समग्र परिणाम में सुधार अपरिहार्य है । दुर्भाग्य से, कैंसर के बहुमत में, घातक कोशिकाओं को उच्च संख्या में प्राप्त करने के लिए काफी मुश्किल है और ऊतक बायोप्सी की आवश्यकता है । ल्यूकेमिया एक अपवाद है, जहां ल्यूकेमिया से प्रभावित कोशिकाओं की एक पर्याप्त संख्या अस्थि मज्जा से पृथक किया जा सकता है । यहां, हम ल्यूकेमिया रोगियों अस्थि मज्जा और उनके चयापचय राज्य extracellular फ्लक्स विश्लेषक का उपयोग कर के बाद विश्लेषण से ल्यूकेमिया से प्रभावित कोशिकाओं के अलगाव के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं । ल्यूकेमिया से प्रभावित कोशिकाओं घनत्व ढाल, जो उनकी व्यवहार्यता को प्रभावित नहीं करता है द्वारा अलग कर रहे हैं । अगली खेती कदम उंहें पुनर्जीवित करने में मदद करता है, इस प्रकार चयापचय राज्य मापा इष्टतम स्थितियों में कोशिकाओं की स्थिति है । इस प्रोटोकॉल सुसंगत, अच्छी तरह से मानकीकृत परिणाम है, जो व्यक्तिगत चिकित्सा के लिए इस्तेमाल किया जा सकता प्राप्त करने की अनुमति देता है ।
Introduction
चयापचय प्रोफ़ाइल कोशिकाओं के मुख्य विशेषताओं में से एक है और बदल-ऊर्जावान अब कैंसर1,2,3की पहचान में से एक माना जाता है । इसके अलावा, चयापचय सेटअप में परिवर्तन संकेत transduction रास्ते या कैंसर कोशिकाओं की एंजाइमी मशीनरी4,5,6लक्ष्यीकरण द्वारा कैंसर के उपचार में इस्तेमाल किया जा सकता है । कैंसर की कोशिकाओं की चयापचय गड़बड़ी को जानने के इस प्रकार एक फायदा है और वर्तमान चिकित्सा में सुधार में मदद कर सकते हैं ।
वहां पहले से ही स्थापित तरीकों जो संस्कृति में कोशिकाओं की चयापचय गतिविधि का आकलन कर सकते है की एक बहुत हैं । सादर glycolysis, ग्लूकोज अधिक रेडियोधर्मी लेबलिंग द्वारा मापा जा सकता है, का उपयोग कर 2-NBDG (2-(N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1, 3-diazol-4-yl) अमीनो) -2-Deoxyglucose) या extracellular स्तनपान का स्तर मापा enzymatically7,8. फैटी एसिड ऑक्सीकरण दर एक और चयापचय पैरामीटर palmitate9,10लेबल isotopically द्वारा मापा जाता है । ऑक्सीजन की खपत दर एक व्यापकरूप से-कोशिकाओं11,12, mitochondrial झिल्ली संभावित मूल्यांकन13,14, एटीपी/ADP (adenosine के साथ में mitochondrial गतिविधि का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया विधि है 5 ′-ट्राइफॉस्फेट/Adenosine 5 ′-diphosphate) अनुपात मापन15 या कुल intracellular एटीपी माप16. संकेत मार्ग चयापचय प्रक्रियाओं को विनियमित करने के लिए जाना जाता प्रोटीन quantifications द्वारा निर्धारित किया जा सकता है और चयापचय माप की समझ में सुधार कर सकते हैं17,18,19.
हालांकि, इन सभी विधियों को मापने केवल एक या, सबसे अच्छा परिदृश्य में, एक नमूना में कुछ चयापचय पैरामीटर एक साथ । महत्वपूर्ण बात, ऑक्सीजन खपत दर (ओसीआर) और extracellular अंलीकरण दर (ीकार) के एक साथ माप द्वारा extracellular फ्लक्स विश्लेषण द्वारा प्राप्त किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, Seahorse XFp विश्लेषक । ओसीआर mitochondrial श्वसन का एक संकेतक है और ीकार मुख्य रूप से glycolysis का परिणाम है (हम2 संभवतः उच्च ऑक्सीडेटिव फास्फारिलीकरण गतिविधि के साथ कोशिकाओं की ीकार तरक्की उत्पादन की अनदेखी नहीं कर सकते)20. अब तक, विभिंन सेल प्रकार इन विश्लेषक21,22,23का उपयोग कर अध्ययन किया गया है ।
यहां हम प्राथमिक विस्फोटों के extracellular फ्लक्स विश्लेषण के लिए प्रोटोकॉल का वर्णन (लेकिमिया कोशिकाओं अपरिपक्व टेम चरण से व्युत्पंन) ल्यूकेमिया रोगियों से । हमारे ज्ञान का सबसे अच्छा करने के लिए, प्राथमिक विस्फोटों के लिए एक विशिष्ट प्रोटोकॉल अभी तक उपलब्ध नहीं है ।
Protocol
Representative Results
Discussion
उपर्युक्त प्रोटोकॉल चयापचय गतिविधि तीव्र लिम्फोब्लासटिक ल्यूकेमिया (सभी) या गंभीर माइलॉयड ल्यूकेमिया (एएमएल) के साथ रोगियों से व्युत्पंन प्राथमिक ल्यूकेमिया से प्रभावित विस्फोटों में ओसीआर और ीका?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम चेक बाल रुधिर केंद्रों का शुक्रिया अदा करना चाहूंगा । यह काम स्वास्थ्य मंत्रालय के अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था (NV15-28848A), चेक गणराज्य के स्वास्थ्य मंत्रालय द्वारा, विश्वविद्यालय अस्पताल Motol, प्राग, चेक गणराज्य ०००६४२०३ और शिक्षा मंत्रालय द्वारा, युवा और खेल NPU मैं nr. LO1604 ।
Materials
| RPMI 1640 Medium, GlutaMAX Supplement | Gibco, ThermoFisher Scientific | 61870-010 | |
| Fetal Bovine Serum | Biosera | FB-1001/100 | |
| Antibiotic-Antimycotic (100X) | Gibco, ThermoFisher Scientific | 15240-062 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761-500G | |
| D-(+) Glucose | Sigma-Aldrich | G7021-100G | |
| Oligomycin A | Sigma-Aldrich | 75351-5MG | |
| 2-Deoxy-D-glucose | Sigma-Aldrich | D8375-1G | |
| FCCP | Sigma-Aldrich | C2920-10MG | |
| DMSO | Sigma-Aldrich | D8418-100ML | |
| Rotenone | Sigma-Aldrich | R8875-1G | |
| Antimycin A from Streptomyces sp. | Sigma-Aldrich | A8674-25MG | |
| Seahorse XF Base Medium, 100 mL | Agilent Technologies | 103193-100 | |
| L-glutamine solution, 200 mM | Sigma-Aldrich | G7513-100ML | |
| HEPES solution, 1 M, pH 7.0-7.6 | Sigma-Aldrich | H0887-100ML | |
| Sodium pyruvate | Sigma-Aldrich | P5280-25G | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A2153-10G | |
| Ficoll-Paque Plus | Sigma-Aldrich | GE17-1440-02 | Density gradient medium |
| Seahorse XFp FluxPak | Agilent Technologies | 103022-100 | |
| Corning™ Cell-Tak Cell and Tissue Adhesive | ThermoFisher Scientific | CB40240 | |
| Seahorse Analyzer XFp | Agilent Technologies | S7802A | |
| Seahorse XFp Cell Culture Miniplate | Agilent Technologies | 103025-100 |
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