主な白血病細胞の代謝プロファイルの評価
Summary
ここでの代謝状態の白血病患者の骨髄から白血病細胞の分離と解析のためのプロトコルを提案する.主な白血病細胞の代謝プロファイルの評価は、一次電池の需要のより良い特性を助けることができるし、より個別化医療にまでつながる可能性があります。
Abstract
癌細胞の代謝の要件および治療効果の生存否定的影響」です。今日では、代謝経路の医薬品ターゲットは、多くの種類の腫瘍でテストします。したがって、がん細胞の代謝セットアップの評価は患者の全体的な結果を改善するために正しい経路をターゲットするために避けられない。残念ながら、癌の大部分は、悪性細胞がかなり高い数値で得にくい、組織生検が必要です。白血病は、白血病細胞の十分な数が骨の髄から分離することができます、例外です。ここでは、白血病患者の骨髄から白血病細胞の分離と細胞外フラックス アナライザーを使用してその代謝状態の後の分析のための詳しいプロトコルを提供します。白血病細胞は、生存に影響しない密度勾配によって分離されます。次の栽培手順を再生成することができます、このように測定代謝状態は最適な条件でセルの状態。このプロトコルは、パーソナライズされた療法に使用できるよく標準化された、一貫性のある結果を達成することができます。
Introduction
代謝プロファイル細胞の主な特徴の 1 つで、変更された生体エネルギー今がん1,2,3の特徴の 1 つであります。また、代謝のセットアップで変更される可能性があります癌の治療におけるシグナル伝達経路またはがん細胞4,5,6の酵素の機械を対象。癌細胞の代謝の体質を知ることの利点は、現在の療法を向上できます。
培養細胞の代謝活性を評価することが既に確立された方法の多くがあります。解糖作用、に関するグルコース取り込みの放射性標識を用いて測定できる 2 NBDG (2-(N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)Amino)-2-Deoxyglucose) または細胞の乳酸レベル測定酵素によって7,8です。脂肪酸酸化速度は、同位体標識パルミチン酸9,10を用いて別の代謝パラメーターです。酸素消費量はセル11,12、ミトコンドリアの膜電位評価13,14ATP/ADP (アデノシンとともにミトコンドリア活性を決定する広く使用される方法5 ‘-三リン酸/アデノシン 5’-二リン酸) 比測定15または合計細胞内 ATP 測定16。シグナル伝達経路の代謝過程を規制するため知られている蛋白質の数量ごとに決定され、代謝測定17,18,19の理解を深めることができます。
ただし、これらすべてのメソッドが 1 つだけを測定したり、最良のシナリオでは、1 つのいくつかの代謝パラメーターは同時にサンプルします。重要なは、たとえば、タツノオトシゴ XFp アナライザーによって細胞外フラックス解析による酸素消費量 (OCR) と細胞外酸性化率 (ecar と) の同時測定を実現できます。OCR はミトコンドリア呼吸のインジケーターと ecar とは主に解糖系 (我々 はおそらく高酸化的リン酸化活性と細胞の ecar とを昇降 CO2生産を無視することはできません)、20。これまでのところ、これらのアナライザー21,22,23を使用して種々 の細胞を研究されています。
ここで白血病患者から主芽球 (白血病細胞に由来する未熟造血ステージ) の細胞外フラックス解析のためのプロトコルについて述べる。我々 の知る限り、主な爆発のための特定のプロトコルはまだ利用できません。
Protocol
Representative Results
Discussion
急性リンパ芽球性白血病 (ALL) 患者から得られた主な白血病芽球の OCR と ecar と値によって評価代謝活性の測定により、上記プロトコルまたは急性骨髄性白血病 (AML)。細胞フラックス アナライザーを用いた測定の利点は、生きているセルでリアルタイムで代謝プロファイルの検出できます。基本的に、指定されたプロトコルのすべての段階は、1 つの計画研究に細胞の種類に応じて調節できま?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
チェコ小児血液学センターに感謝したいと思います。この作品は私 nr でグラントの保健省 (NV15 28848A)、厚生省の教育・青少年・ スポーツ当社、チェコ共和国、大学病院 Motol、プラハ、チェコ共和国 00064203 によってサポートされています。LO1604。
Materials
| RPMI 1640 Medium, GlutaMAX Supplement | Gibco, ThermoFisher Scientific | 61870-010 | |
| Fetal Bovine Serum | Biosera | FB-1001/100 | |
| Antibiotic-Antimycotic (100X) | Gibco, ThermoFisher Scientific | 15240-062 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761-500G | |
| D-(+) Glucose | Sigma-Aldrich | G7021-100G | |
| Oligomycin A | Sigma-Aldrich | 75351-5MG | |
| 2-Deoxy-D-glucose | Sigma-Aldrich | D8375-1G | |
| FCCP | Sigma-Aldrich | C2920-10MG | |
| DMSO | Sigma-Aldrich | D8418-100ML | |
| Rotenone | Sigma-Aldrich | R8875-1G | |
| Antimycin A from Streptomyces sp. | Sigma-Aldrich | A8674-25MG | |
| Seahorse XF Base Medium, 100 mL | Agilent Technologies | 103193-100 | |
| L-glutamine solution, 200 mM | Sigma-Aldrich | G7513-100ML | |
| HEPES solution, 1 M, pH 7.0-7.6 | Sigma-Aldrich | H0887-100ML | |
| Sodium pyruvate | Sigma-Aldrich | P5280-25G | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A2153-10G | |
| Ficoll-Paque Plus | Sigma-Aldrich | GE17-1440-02 | Density gradient medium |
| Seahorse XFp FluxPak | Agilent Technologies | 103022-100 | |
| Corning™ Cell-Tak Cell and Tissue Adhesive | ThermoFisher Scientific | CB40240 | |
| Seahorse Analyzer XFp | Agilent Technologies | S7802A | |
| Seahorse XFp Cell Culture Miniplate | Agilent Technologies | 103025-100 |
Referências
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