माइलॉयड जन्मजात संकेतन मार्ग विनियमन MALT1 Paracaspase गतिविधि द्वारा
Summary
MALT1 जन्मजात प्रतिरक्षा को नियंत्रित करता है, लेकिन यह कैसे होता है बीमार परिभाषित रहता है । हम चुनिंदा MALT1 paracaspase अवरोध करनेवाला MLT-८२७ का उपयोग करने के लिए MALT1 के योगदान को सहज संकेतन के बहाव के लिए टोल की तरह या सी-प्रकार लेक्टिन रिसेप्टर्स की तरह, प्रदर्शन कि MALT1 माइलॉयड साइटोकिंस के उत्पादन को नियंत्रित करता है, और बहाव सी के प्रकार लेक्टिन रिसेप्टर्स, चुनिंदा की तरह ।
Abstract
लसीकावत् कोशिकाओं है, जो कई अध्ययनों से संबोधित किया गया है में अपने कार्य के अलावा, paracaspase MALT1 भी जन्मजात कोशिकाओं पैटर्न मांयता रिसेप्टर्स के बहाव में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है । सबसे अच्छा अध्ययन किया Dectin-1 और Dectin-2 के सदस्यों सी प्रकार लेक्टिन रिसेप्टर परिवार की तरह है कि एक SYK-और CARD9-निर्भर संकेतन झरना NF-κB सक्रियण के लिए अग्रणी, एक MALT1-निर्भर तरीके से प्रेरित कर रहे हैं । इसके विपरीत, टोल जैसे रिसेप्टर्स (TLR), जैसे TLR-4, प्रचार NF-κB सक्रियण लेकिन एक MYD88/IRAK-निर्भर झरना के माध्यम से संकेत । फिर भी, चाहे MALT1 TLR में योगदान कर सकते है-4 संकेत अस्पष्ट बनी हुई है । MLT के साथ हाल ही में सबूत-८२७, MALT1 paracaspase गतिविधि के एक शक्तिशाली और चयनात्मक अवरोध करनेवाला, इंगित करता है कि TNF-TLR के उत्पादन बहाव-मानव माइलॉयड कोशिकाओं में 4 MALT1 से स्वतंत्र है, के रूप में TNF का विरोध-उत्पादन बहाव Dectin-1 है, जो MALT1 है निर्भर. यहां, हम पैटर्न मांयता में MALT1 के चयनात्मक भागीदारी को संबोधित किया आगे संवेदन, मानव और माउस सेलुलर तैयारी की एक किस्म का उपयोग कर, और Dectin की उत्तेजना-1, MINCLE या TLR-4 रास्ते । हम भी TNF से परे साइटोकिंस की खोज के द्वारा अतिरिक्त अंतर्दृष्टि प्रदान की-, और एक SYK अवरोध करनेवाला (Cpd11) के लिए MLT-८२७ तुलना करके और एक मतान्ध अवरोध करनेवाला (AFN700) । सामूहिक रूप से, डाटा प्रदान की MALT1-निर्भरता के लिए और अधिक सबूत सी प्रकार लेक्टिन रिसेप्टर की तरह-TLR संकेत के विपरीत द्वारा संकेतन ।
Introduction
MALT1 की paracaspase गतिविधि (म्यूकोसा जुड़े लसीकावत् ऊतक लिंफोमा translocation प्रोटीन 1) २००८1,2में पता चला था । तब से, अध्ययन के एक नंबर लिम्फोसाइटों में प्रतिजन रिसेप्टर प्रतिक्रियाओं के लिए अपने महत्वपूर्ण योगदान की सूचना दी है । माउस में आनुवंशिक मॉडल के रूप में के रूप में अच्छी तरह से औषध विज्ञान डेटा टी कोशिकाओं में एक महत्वपूर्ण भूमिका, t-सेल में निर्भर उन्मुक्ति और B-सेल लिंफोमा सेटिंग्स3,4में समर्थन करते हैं । लिम्फोसाइटों में, MALT1 paracaspase सक्रियण एक CARD11-BCL10-MALT1 जटिल5, जो प्रतिजन-टी या बी-सेल रिसेप्टर के संकेतन के बहाव से शुरू हो रहा है की विधानसभा पर होता है । वहां भी पर्याप्त सबूत है कि एक समान CARD9-BCL10-MALT1 जटिल सी के बहाव संकेत-प्रकार लेक्टिन रिसेप्टर्स की तरह (CLLR), जैसे, Dectin-1, Dectin-2 और माइलॉयड कोशिकाओं में MINCLE6,7के प्रवाह का प्रचार के लिए महत्वपूर्ण है । Dectin-1 विशेष रूप से अच्छी तरह से अध्ययन किया गया है क्योंकि इस मार्ग कवक संक्रमण8,9के खिलाफ मेजबान रक्षा के लिए महत्वपूर्ण है । टोल में MALT1 के निहितार्थ-रिसेप्टर (TLR) रास्ते की तरह है, तथापि, विवादास्पद10बनी हुई है । मानव माइलॉयड कोशिकाओं में हाल ही में सबूत TLR-411के TNF-उत्पादन बहाव के विनियमन में MALT1 paracaspase गतिविधि के लिए एक सीधी भूमिका से इनकार किया ।
वर्तमान काम में, हम विभिन्न प्रयोगात्मक सेटिंग्स और मानव और माउस माइलॉयड कोशिकाओं में stimulatory शर्तों सहज संकेतन रास्ते की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया, विशिष्ट औषधीय उपकरण अवरोधकों और cytokine उत्पादन की माप पर निर्भर है ।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस काम में, हम मानव और माउस सहज कोशिकाओं में संकेत रास्ते का अध्ययन करने के लिए सरल प्रयोगात्मक सेटिंग्स का इस्तेमाल किया, और MALT1 proteolytic समारोह पर उनकी निर्भरता पूछताछ. पिछले काम11पर विस्तार, हमारे ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम उनके प्राधिकरण (लाइसेंस नंबर ४३३४७७०६३०१२७) के लिए Elsevier धंयवाद यहां Unterreiner एट अल से चित्रा 2a प्रतिलिपि । (२०१७) ।
Materials
| 100 µm nylon cell strainer | Sigma | CLS431752 | |
| 14 ml Falcon tube | BD Falcon | 352057 | |
| 15 mL Falcon tube | Falcon | 352090 | |
| 50 mL Falcon tube | Falcon | 352070 | |
| 6 well plates | Costar | 3516 | |
| 96 well flat-bottom plate, with low evaporation lid | Costar | 3595 | |
| 96 well V-bottom plate | Costar | 734-1798 | |
| Ammonium Chloride – NH4Cl | Sigma | A9434 | |
| Assay diluent RD1-W ELISA | R&D | 895038 | Assay diluent |
| Cell culture microplate, 384 well, black | Greiner | 781986 | |
| Depleted Zymosan | Invivogen | tlrl-dzn | now: tlrl-zyd |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | DMSO |
| EDTA-Na2 | Sigma | E5134 | Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate |
| ELISA muTNF-α | R&D | SMTA00 | |
| Ficoll-Paque Plus | GE Healthcare | 17-1440-03 | |
| gentleMACS C tubes | MACS Miltenyi Biotec | 130-096-334 | |
| gentleMACS dissociator | MACS Miltenyi Biotec | 130-093-235 | |
| GM-CSF | Novartis | – | |
| Heat-inactivated Fetal bovine serum | Gibco | 10082 | FBS |
| HTRF hu IL-23 | CisBio | 62HIL23PEG | |
| HTRF hu TNF-α | CisBio | 62TNFPEC | |
| HTRF reconstitution buffer | CisBio | 62RB3RDE | 50mM Phosphate buffer, pH 7.0, 0.8M KF, 0.2% BSA |
| IFN-γ | R&D | L4516 | |
| IL-4 | Novartis | – | |
| Isoflurane | Abbott | Forene | |
| Lipopolysaccharides (LPS) | Sigma | L4391 | LPS used in human samples |
| Lipopolysaccharides | Sigma | L4516 | LPS used in murine samples |
| Lysis buffer | Self-made | – | 155 mM NH4Cl, 10 mM KHCO3, 1 mM EDTA, pH 7.4 |
| Magnet | Stemcell | 18001 | |
| Microplate, 384 well white | Greiner | 784075 | |
| Monocytes enrichment kit | Stemcell | 19059 | |
| Nalgene Mr. Frosty Cryo 1 °C Freezing Container | Nalgene | 5100-0001 | cooling device (containing Propanol-2) |
| PBS 1x pH 7.4 [-] CaCl2 [-] MgCl2 | Gibco | 10010 | Phosphate-buffered saline |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140 | Pen/Strep |
| Potassium bicarbonate – KHCO3 | Sigma | P9144 | |
| PrestoBlue | Invitrogen | A13262 | Resazurin solution for viability assessment |
| Propanol-2 | Merck | 1.09634 | |
| Read buffer | MesoScale Discovery | R92TC-3 | Tris-based buffer containing tripropylamine |
| Recovery cell culture freezing medium | Gibco | 12648-010 | freezing medium |
| Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) with Glutamax | Gibco | 61870 | + 10% FBS for iMoDCs + 10% FBS + 1 mM Sodium Pyruvate + 100 U/mL Pen/Strep + 5 µM β-mercaptoethanol for human PBMCs and monocytes + 10% FBS + Pen/Strep + 5 µM β-mercaptoethanol for murine splenocytes |
| Separation buffer | Self-made | – | PBS pH 7.4 + 2% FBS + 1 mM EDTA pH 8.0 |
| Sodium Pyruvate | Gibco | 11360 | |
| Trehalose-6,6-dibehenate | Invivogen | tlrl-tdb | TDB |
| Tween 20 | Sigma | P7949 | Polysorbate 20 |
| UltraPure 0.5 M EDTA pH 8.0 | Invitrogen | 15675 | Ethylenediaminetetraacetic acid |
| Viewseal sealer | Greiner BioOne | 676070 | |
| V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Human Kit | MesoScale Discovery | K15049D | electrochemiluminescent multiplex assay (IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8) |
| β-Mercaptoethanol | Gibco | 31350 |
Referências
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