MALT1 Paracaspase 活動による骨髄性生得的なシグナル伝達経路制御
Summary
MALT1 免疫を調節するが、不明確のままどのようにこれが発生します。MALT1 の生得的なシグナリング Toll 様や C 型レクチン様受容体、MALT1 が骨髄性サイトカインの生産を調節することを示すの下流と下流への貢献を解明する選択的 MALT1 paracaspase 阻害剤 MLT 827 を使いました。C 型レクチン様受容体の選択的に。
Abstract
多くの研究によって対処されている、リンパ球様細胞でその機能のほか paracaspase MALT1 はまたパターン認識受容体の下流生得の細胞で重要な役割を果たしています。SYK と CARD9-依存性シグナル伝達カスケード MALT1 依存的に、NF-κ B の活性化につながるを誘発する C 型レクチン様受容体ファミリの自己免疫 1 および自己免疫-2 メンバーである最もよく研究します。一方で、Toll 様受容体 (TLR) TLR 4 など NF-κ B 活性化が MYD88/アイラック依存型カスケードを介して信号を伝達します。それにもかかわらず、MALT1 TLR 4 シグナル伝達に貢献するかもしれないかどうか明白でなく残ったが。MLT-827、MALT1 paracaspase 活動の強力かつ選択的な阻害剤を最近の証拠ことを示しますひと骨髄細胞における TLR 4 の下流 TNF 産 MALT1 TNF 産下流ではなく自己免疫-1 の独立 MALT1 であります。依存。ここでは、我々 はさらに、さまざまな人間とマウス細胞製剤と自己免疫 1、MINCLE または TLR 4 経路の刺激を使用してパターン認識における MALT1 の選択的関与に対処。サイトカイン TNF-を超えてあり、MLT 827 SYK 阻害剤 (Cpd11)、IKK 阻害剤 (AFN700) を比較することによって、我々 はまた追加の洞察力を提供しました。総称して、提供されたデータがさらに MALT1 C 型レクチン様受容体依存性の証拠-対照的に TLR シグナルをシグナリングします。
Introduction
MALT1 の paracaspase 活動 (粘膜関連リンパ組織リンパ腫転座蛋白質 1) は、2008 年1,2で明らかにされました。その後、研究の数は、リンパ球の抗原受容体応答への重要な貢献を報告しています。マウス T 細胞、T 細胞の依存の自己免疫および B 細胞リンパ腫の設定3,4薬理データが重要な役割をサポートと同様に遺伝的モデル。CARD11-BCL10-MALT1 複雑な5、抗原受容体近位伝達によってトリガーされるアセンブリに発生します MALT1 paracaspase 活性化リンパ球の T ・ B 細胞受容体の下流。また同様 CARD9 BCL10 MALT1 コンプレックスが例えば C 型レクチン様受容体 (CLLR) の下流にシグナルを伝達するために重要という十分な証拠がある,自己免疫 1、ヒトデクチン 2、骨髄性で MINCLE 細胞6,7。自己免疫 1 はこの経路は真菌感染症8,9防御の重要なので、特によく研究されています。ただし、Toll 様受容体 (TLR) 経路で MALT1 の含意は、物議を醸す10を推移しています。ひと骨髄細胞における最近の証拠は TLR 411の下流 TNF 産規制で MALT1 paracaspase 活性に直接的な役割を否定しました。
現在の仕事で特定の薬理学的ツール阻害剤、サイトカイン産生の測定に依存する生得的なシグナル伝達経路をプローブする様々 な実験的設定と人間の刺激条件マウス骨髄細胞を使いました。
Protocol
Representative Results
Discussion
この仕事で人間のシグナル伝達経路とマウス自然細胞研究し、MALT1 蛋白分解機能への依存度を調査簡単な実験設定を使用しました。以前の作業11で拡大して、我々 の研究は、MALT1 paracaspase 活動が C 型レクチン様受容体誘導サイトカイン産生、TNF α などを制御することを示した。対照的に、TLR 4 誘導性 TNF α は両草種と MALT1 の独立していた。総称して、これらのデータは、MAL…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々 は Unterreinerらから図 2 aをここで再現する彼らの承認 (ナンバー 4334770630127) のエルゼビアに感謝します。(2017 年)。
Materials
| 100 µm nylon cell strainer | Sigma | CLS431752 | |
| 14 ml Falcon tube | BD Falcon | 352057 | |
| 15 mL Falcon tube | Falcon | 352090 | |
| 50 mL Falcon tube | Falcon | 352070 | |
| 6 well plates | Costar | 3516 | |
| 96 well flat-bottom plate, with low evaporation lid | Costar | 3595 | |
| 96 well V-bottom plate | Costar | 734-1798 | |
| Ammonium Chloride – NH4Cl | Sigma | A9434 | |
| Assay diluent RD1-W ELISA | R&D | 895038 | Assay diluent |
| Cell culture microplate, 384 well, black | Greiner | 781986 | |
| Depleted Zymosan | Invivogen | tlrl-dzn | now: tlrl-zyd |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | DMSO |
| EDTA-Na2 | Sigma | E5134 | Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate |
| ELISA muTNF-α | R&D | SMTA00 | |
| Ficoll-Paque Plus | GE Healthcare | 17-1440-03 | |
| gentleMACS C tubes | MACS Miltenyi Biotec | 130-096-334 | |
| gentleMACS dissociator | MACS Miltenyi Biotec | 130-093-235 | |
| GM-CSF | Novartis | – | |
| Heat-inactivated Fetal bovine serum | Gibco | 10082 | FBS |
| HTRF hu IL-23 | CisBio | 62HIL23PEG | |
| HTRF hu TNF-α | CisBio | 62TNFPEC | |
| HTRF reconstitution buffer | CisBio | 62RB3RDE | 50mM Phosphate buffer, pH 7.0, 0.8M KF, 0.2% BSA |
| IFN-γ | R&D | L4516 | |
| IL-4 | Novartis | – | |
| Isoflurane | Abbott | Forene | |
| Lipopolysaccharides (LPS) | Sigma | L4391 | LPS used in human samples |
| Lipopolysaccharides | Sigma | L4516 | LPS used in murine samples |
| Lysis buffer | Self-made | – | 155 mM NH4Cl, 10 mM KHCO3, 1 mM EDTA, pH 7.4 |
| Magnet | Stemcell | 18001 | |
| Microplate, 384 well white | Greiner | 784075 | |
| Monocytes enrichment kit | Stemcell | 19059 | |
| Nalgene Mr. Frosty Cryo 1 °C Freezing Container | Nalgene | 5100-0001 | cooling device (containing Propanol-2) |
| PBS 1x pH 7.4 [-] CaCl2 [-] MgCl2 | Gibco | 10010 | Phosphate-buffered saline |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140 | Pen/Strep |
| Potassium bicarbonate – KHCO3 | Sigma | P9144 | |
| PrestoBlue | Invitrogen | A13262 | Resazurin solution for viability assessment |
| Propanol-2 | Merck | 1.09634 | |
| Read buffer | MesoScale Discovery | R92TC-3 | Tris-based buffer containing tripropylamine |
| Recovery cell culture freezing medium | Gibco | 12648-010 | freezing medium |
| Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) with Glutamax | Gibco | 61870 | + 10% FBS for iMoDCs + 10% FBS + 1 mM Sodium Pyruvate + 100 U/mL Pen/Strep + 5 µM β-mercaptoethanol for human PBMCs and monocytes + 10% FBS + Pen/Strep + 5 µM β-mercaptoethanol for murine splenocytes |
| Separation buffer | Self-made | – | PBS pH 7.4 + 2% FBS + 1 mM EDTA pH 8.0 |
| Sodium Pyruvate | Gibco | 11360 | |
| Trehalose-6,6-dibehenate | Invivogen | tlrl-tdb | TDB |
| Tween 20 | Sigma | P7949 | Polysorbate 20 |
| UltraPure 0.5 M EDTA pH 8.0 | Invitrogen | 15675 | Ethylenediaminetetraacetic acid |
| Viewseal sealer | Greiner BioOne | 676070 | |
| V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Human Kit | MesoScale Discovery | K15049D | electrochemiluminescent multiplex assay (IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8) |
| β-Mercaptoethanol | Gibco | 31350 |
Referências
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