Миелоидных врожденной сигнальный путь регулирование MALT1 Paracaspase деятельности
Summary
MALT1 регулирует врожденного иммунитета, но как это происходит, остается нечетко. Мы использовали селективный ингибитор paracaspase MALT1 MLT-827 разгадать MALT1 вклад врожденной сигнализации вниз по течению от Толл подобные или C-типа Лектин подобные рецепторы, демонстрируя, что MALT1 регулирует производство миелоидного цитокинов и вниз по течению C-типа Лектин подобных рецепторов выборочно.
Abstract
Помимо своей функции в лимфоидных клетках, который рассматривался на многочисленные исследования, paracaspase MALT1 также играет важную роль в врожденной клеток по течению шаблон признание рецепторов. Лучше всего изучены являются Dectin-1 и Dectin-2 члены семьи Лектин подобный рецептор C-типа которые индуцируют SYK – и CARD9-зависимый сигнальный Каскад, ведущие к активации NF-κB, в зависимости от MALT1. С другой стороны, Толл подобные рецепторы (TLR), например TLR-4, распространять активацию NF-κB но сигнал через каскад MYD88/Ирак зависимых. Тем не менее ли MALT1 могли бы способствовать TLR-4 сигнализации остается неясным. Последние данные с MLT-827, мощным и селективный ингибитор MALT1 paracaspase деятельности, показывает, что TNF-производство по течению TLR-4 в миелоидных клеток человека независимо от MALT1, в отличие от TNF-производства Dectin-1, который является MALT1 зависимые. Здесь мы рассматривали избирательное участие MALT1 в распознавание зондирования дальше, используя разнообразные человека и мыши клеточных препаратов и стимуляции Dectin-1, MINCLE или TLR-4 дорожки. Мы также предоставили дополнительные идеи, исследуя цитокины ФНО-за и путем сравнения MLT-827 ингибитор SYK (Cpd11) и ингибитор IKK (AFN700). Коллективно, предоставленных данных дополнительных доказательств для MALT1-зависимость C-типа Лектин подобный рецептор — в отличие от сигнализации для TLR-сигнализации.
Introduction
Paracaspase активность MALT1 (слизистой оболочки связанных лимфоидной ткани лимфомы транслокации белка 1) было выявлено в 20081,2. С тех пор ряд исследований сообщали свой критический вклад антигена рецепторов ответы в лимфоцитах. Генетической модели в мышь также, как фармакология данных поддерживает ключевую роль в Т-клеток, Т-клеток зависит от аутоиммунных заболеваний и B-клеточной лимфомы параметры3,4. В лимфоцитах, MALT1 paracaspase Активация происходит после Ассамблеи CARD11-BCL10-MALT1 комплекс5, который инициируется антиген рецепторный проксимальной сигнализации вниз по течению от Т – и B-клеточный рецептор. Также имеется достаточно доказательств того, что подобный CARD9-BCL10-MALT1 комплекс имеет важное значение для распространения сигналов по течению C-типа Лектин подобные рецепторы (CLLR), например, Dectin-1, Dectin-2 и MINCLE в миелоидных клеток,6,7. Dectin-1 был изучен особенно хорошо, потому что этот путь имеет решающее значение для узла обороны против грибковых инфекций8,9. Последствия MALT1 в пути Толл подобный рецептор (TLR), однако, остается спорным10. Последние данные в миелоидных клеток человека исключил непосредственную роль для MALT1 paracaspase деятельность в сфере регулирования TNF-производства по течению TLR-411.
В настоящей работе мы использовали различные экспериментальные параметры и стимулирующие условия в человека и мыши миелоидных клеток зонд врожденной сигнальных путей, опираясь на конкретные фармакологические средства ингибиторы и измерение цитокиновой продукции.
Protocol
Representative Results
Discussion
В этой работе мы использовали простой экспериментальной установки для изучения сигнальных путей в человека и врожденной клетки мыши и допрашивать их зависимость MALT1 протеолитической функции. Расширение на предыдущей работе11, наши исследования показали, что MALT1 paracaspase дея?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим Elsevier для их разрешения (номер лицензии 4334770630127) воспроизвести здесь рисунок 2A от Унтеррайнер и др. (2017).
Materials
| 100 µm nylon cell strainer | Sigma | CLS431752 | |
| 14 ml Falcon tube | BD Falcon | 352057 | |
| 15 mL Falcon tube | Falcon | 352090 | |
| 50 mL Falcon tube | Falcon | 352070 | |
| 6 well plates | Costar | 3516 | |
| 96 well flat-bottom plate, with low evaporation lid | Costar | 3595 | |
| 96 well V-bottom plate | Costar | 734-1798 | |
| Ammonium Chloride – NH4Cl | Sigma | A9434 | |
| Assay diluent RD1-W ELISA | R&D | 895038 | Assay diluent |
| Cell culture microplate, 384 well, black | Greiner | 781986 | |
| Depleted Zymosan | Invivogen | tlrl-dzn | now: tlrl-zyd |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | DMSO |
| EDTA-Na2 | Sigma | E5134 | Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate |
| ELISA muTNF-α | R&D | SMTA00 | |
| Ficoll-Paque Plus | GE Healthcare | 17-1440-03 | |
| gentleMACS C tubes | MACS Miltenyi Biotec | 130-096-334 | |
| gentleMACS dissociator | MACS Miltenyi Biotec | 130-093-235 | |
| GM-CSF | Novartis | – | |
| Heat-inactivated Fetal bovine serum | Gibco | 10082 | FBS |
| HTRF hu IL-23 | CisBio | 62HIL23PEG | |
| HTRF hu TNF-α | CisBio | 62TNFPEC | |
| HTRF reconstitution buffer | CisBio | 62RB3RDE | 50mM Phosphate buffer, pH 7.0, 0.8M KF, 0.2% BSA |
| IFN-γ | R&D | L4516 | |
| IL-4 | Novartis | – | |
| Isoflurane | Abbott | Forene | |
| Lipopolysaccharides (LPS) | Sigma | L4391 | LPS used in human samples |
| Lipopolysaccharides | Sigma | L4516 | LPS used in murine samples |
| Lysis buffer | Self-made | – | 155 mM NH4Cl, 10 mM KHCO3, 1 mM EDTA, pH 7.4 |
| Magnet | Stemcell | 18001 | |
| Microplate, 384 well white | Greiner | 784075 | |
| Monocytes enrichment kit | Stemcell | 19059 | |
| Nalgene Mr. Frosty Cryo 1 °C Freezing Container | Nalgene | 5100-0001 | cooling device (containing Propanol-2) |
| PBS 1x pH 7.4 [-] CaCl2 [-] MgCl2 | Gibco | 10010 | Phosphate-buffered saline |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140 | Pen/Strep |
| Potassium bicarbonate – KHCO3 | Sigma | P9144 | |
| PrestoBlue | Invitrogen | A13262 | Resazurin solution for viability assessment |
| Propanol-2 | Merck | 1.09634 | |
| Read buffer | MesoScale Discovery | R92TC-3 | Tris-based buffer containing tripropylamine |
| Recovery cell culture freezing medium | Gibco | 12648-010 | freezing medium |
| Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) with Glutamax | Gibco | 61870 | + 10% FBS for iMoDCs + 10% FBS + 1 mM Sodium Pyruvate + 100 U/mL Pen/Strep + 5 µM β-mercaptoethanol for human PBMCs and monocytes + 10% FBS + Pen/Strep + 5 µM β-mercaptoethanol for murine splenocytes |
| Separation buffer | Self-made | – | PBS pH 7.4 + 2% FBS + 1 mM EDTA pH 8.0 |
| Sodium Pyruvate | Gibco | 11360 | |
| Trehalose-6,6-dibehenate | Invivogen | tlrl-tdb | TDB |
| Tween 20 | Sigma | P7949 | Polysorbate 20 |
| UltraPure 0.5 M EDTA pH 8.0 | Invitrogen | 15675 | Ethylenediaminetetraacetic acid |
| Viewseal sealer | Greiner BioOne | 676070 | |
| V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Human Kit | MesoScale Discovery | K15049D | electrochemiluminescent multiplex assay (IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8) |
| β-Mercaptoethanol | Gibco | 31350 |
Referências
- Coornaert, B., et al. T cell antigen receptor stimulation induces MALT1 paracaspase-mediated cleavage of the NF-kappaB inhibitor A20. Nature immunology. 9 (3), 263-271 (2008).
- Rebeaud, F., et al. The proteolytic activity of the paracaspase MALT1 is key in T cell activation. Nature immunology. 9 (3), 272-281 (2008).
- Jaworski, M., Thome, M. The paracaspase MALT1: Biological function and potential for therapeutic inhibition. Cellular and Molecular Life Sciences. 73 (3), 459-473 (2016).
- Meininger, I., Krappmann, D. Lymphocyte signaling and activation by the CARMA1-BCL10-MALT1 signalosome. Biological Chemistry. 397 (12), 1315-1333 (2016).
- Qiao, Q., et al. Structural architecture of the CARMA1/Bcl10/MALT1 signalosome: nucleation-induced filamentous assembly. Molecular cell. 51 (6), 766-779 (2013).
- Gross, O., et al. Card9 controls a non-TLR signalling pathway for innate anti-fungal immunity. Nature. 442 (7103), 651-656 (2006).
- Chiffoleau, E. C-type lectin-like receptors as emerging orchestrators of sterile inflammation represent potential therapeutic targets. Frontiers in Immunology. 9 (FEB), 1-9 (2018).
- Taylor, P. R., et al. Dectin-1 is required for beta-glucan recognition and control of fungal infection. Nature Immunology. 8 (1), 31-38 (2007).
- Lanternier, F., et al. Primary immunodeficiencies underlying fungal infections. Current opinion in pediatrics. 25 (6), 736-747 (2013).
- Thome, M. Multifunctional roles for MALT1 in T-cell activation. Nature reviews. Immunology. 8 (7), 495-500 (2008).
- Unterreiner, A., Stoehr, N., Huppertz, C., Calzascia, T., Farady, C. J., Bornancin, F. Selective MALT1 paracaspase inhibition does not block TNF-α production downstream of TLR-4 in myeloid cells. Immunology Letters. , 48-51 (2017).
- Strasser, D., et al. Syk Kinase-Coupled C-type Lectin Receptors Engage Protein Kinase C-δ to Elicit Card9 Adaptor-Mediated Innate Immunity. Immunity. 36 (1), 32-42 (2012).
- Jaworski, M., et al. Malt1 protease inactivation efficiently dampens immune responses but causes spontaneous autoimmunity. The EMBO journal. 33 (23), 2765-2781 (2014).
- Yu, J. W., et al. MALT1 protease activity is required for innate and adaptive immune responses. PLoS ONE. 10 (5), 1-20 (2015).
- Bardet, M., et al. The T-cell fingerprint of MALT1 paracaspase revealed by selective inhibition. Immunology and Cell Biology. 96 (1), 81-99 (2018).
- Thoma, G., et al. Discovery and profiling of a selective and efficacious syk inhibitor. Journal of Medicinal Chemistry. 58 (4), 1950-1963 (2015).
- Bauer, B., Steinle, A. HemITAM: A single tyrosine motif that packs a punch. Science Signaling. 10 (508), 1-10 (2017).
- Gringhuis, S. I., et al. Selective c-Rel activation via Malt1 controls anti-fungal TH-17 immunity by dectin-1 and dectin-2. PLoS Pathogens. 7 (1), (2011).
- Dufner, A., Schamel, W. W. B cell antigen receptor-induced activation of an IRAK4-dependent signaling pathway revealed by a MALT1-IRAK4 double knockout mouse model. Cell Communication and Signaling. 9 (1), 6 (2011).
- Phelan, J. D., et al. A multiprotein supercomplex controlling oncogenic signalling in lymphoma. Nature. , (2018).
