Estimulação transcraniana de corrente contínua (tDCS) é uma técnica terapêutica proposta para tratar doenças psiquiátricas. Um modelo animal é essencial para entender as alterações biológicas específicas evocadas por tDCS. Este protocolo descreve um modelo do rato tDCS que utiliza um eletrodo implantado cronicamente.
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Artigo de método
Transcraniana por corrente contínua estimulação (tDCS) em ratos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Estimulação transcraniana de corrente contínua (tDCS) é uma técnica de neuromodulação não-invasiva, proposta como um tratamento alternativo ou complementar para várias doenças neuropsiquiátricas. Os efeitos biológicos das tDCS não são totalmente compreendidos, que em parte é explicado devido à dificuldade na obtenção de tecido do cérebro humano. Este protocolo descreve um modelo do rato tDCS que utiliza um eletrodo implantado cronicamente permitindo o estudo dos efeitos biológicos duradouro das tDCS. Neste modelo experimental, tDCS altera a expressão do gene cortical e oferece uma contribuição proeminente para o entendimento da justificativa para seu uso terapêutico.
Introdução
Estimulação transcraniana de corrente contínua (tDCS) é uma técnica não-invasiva, de baixo custo, terapêutica, que se centra na modulação neuronal através do uso de correntes contínuas de baixa intensidade1. Atualmente existem duas configurações (anodal e cathodal da) para tDCS. Enquanto que a estimulação anodal exerce um campo elétrico atual fraco demais para desencadear potenciais de ação, eletrofisiologia estudos têm demonstrado que este método produz alterações na plasticidade sináptica2. Por exemplo, a evidência mostra que tDCS induz os efeitos a longo prazo (LTP) de potenciação como pico maior amplitude dos potenci....
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Protocolo
Adulto masculino alojados individualmente (8-12 semanas) camundongos C57BL/6 foram utilizados neste experimento. Os animais receberam cuidados antes, durante e após procedimentos experimentais com alimentos e água ad libitum. Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de ética animal da Universidade Federal de Minas Gerais (protocolo número 59/2014).
1. colocação do eletrodo
-
Sedativo e fixando o animal para o aparelho estereotáxica
- Esterilize todos os instrumentos cirúrgicos necessários.
Romance Instrumentos cirúrgicos foram esterilizados por 3 minutos a 440 ° C. Cotonetes d....
- Esterilize todos os instrumentos cirúrgicos necessários.
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Resultados
O protocolo cirúrgico apresentou estabilidade a longo prazo do implante pelo menos um mês, sem sinais inflamatórios no local estimulado, nem qualquer outro efeito indesejado. Todos os animais sobreviveram as sessões de procedimento e tDCS cirúrgicas (n = 8). Neste experimento, tDCS implantes foram posicionados sobre os córtices M1 e M2 (+1,0 mm ântero-posterior e lateral de 0.0 mm para bregma). Uma semana depois, tDCS (n = 3-4) e sham (n = 3) ratos foram estimulados por cinco dias consecu.......
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Discussão
Nos últimos anos, técnicas de neuroestimulação tem sido entrar em prática clínica como um procedimento promissor para tratar distúrbios neuropsiquiátricos23. Para reduzir a restrição imposta pela falta de conhecimento dos mecanismos de neuroestimulação, aqui apresentamos um modelo de mouse tDCS carregando um eletrodo que pode direcionar a regiões do cérebro. Desde que o eletrodo é cronicamente implantável, este modelo animal permite a investigação de efeitos biológicos de longa duração evocada por.......
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Agradecimentos
Agradecemos o Sr. Rodrigo de Souza para assistência na manutenção de colônias de rato. L.A.V.M é um pós-doutorado da CAPES. Este trabalho foi financiado pela subvenção PRONEX (FAPEMIG: APQ-00476-14).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Seringa BD Ultra-Fine 50U | BD | 10033430026 | Para injeção intraperitoneal. |
| Barbeador (Philips Multigroom) | Philips (Brasil) | QG3340/16 | Para aparar o local cirúrgico. |
| Equipamento Cirúrgico | |||
| Modelo 940 Instrumento Estereotáxico para Pequenos Animais com Console de Display Digital | KOPF | 940 | Para restrição e posicionamento cirúrgico de animais. |
| Modelo 922 Não-ruptura barras de orelha de ponta de 60 graus | KOPF | 922 | Para restrição cirúrgica animal e posicionamento. |
| Suporte de cânula | KOPF | 1766-AP | Para posicionamento de implantes. |
| Microscópio binocular de zoom estéreo de precisão (III) no suporte de lança | WPI | PZMIII-BS | Para localização de bregma e posicionamento de implantes. |
| Sistema de Controle de Temperatura Modelo | KOPF | TCAT-2LV | Para controle térmico animal. |
| Fonte de Luz Fria | WPI | WA-12633 | Para brilho focal |
| Sistema de anestesia de animais de laboratório de mesa com Scavenging | VetEquip | 901820 | Para administração e segurança de isoflurano. |
| Filtro de Adsorção de Carvão Ativado VaporGuard | VetEquip | 931401 | Medidas de segurança do sistema de entrega. |
| KOPF | 923-B | anestesia do gás do rato do rato | Para a limitação animal e a entrega de O2 e do isoflurano. |
| Regulador de oxigênio, E-cylinder | VetEquip | 901305 | para regulação e entrega de O2. |
| Mangueira de oxigênio - verde | VetEquip | 931503 | para administração de O2 e isoflurano. |
| Esterilizador infravermelho 800 º C | Marconi | MA1201 | Para esterilização de instrumentos. |
| Instrumentos Cirúrgicos | |||
| Tesouras Finas - ToughCut | Fine Science Tools | 14058-11 | Para incisão. |
| Ganchos cirúrgicos | INJEX | 1636 | fabricados internamente - Usados para limpar o local cirúrgico da pele e do pelo. |
| Pinças ou fórceps padrão | - | Para agarrar a pele. | |
| Consumíveis Cirúrgicos | |||
| Vetbond | 3M | SC-361931 | Para fechamento de incisão. |
| KIT de Cimento e Catalisador (Duralay) | Reliance | 2OZ | Para fixação de implantes. |
| Cotonetes Estéreis (Autoclavados) | JnJ | 75U | Para antissepsia do local cirúrgico. |
| Placa de 24 poços (placa de cultura de tecidos) | SARSTEDT | 831.836 | Para preparação de cimento. |
| Aplicação Pincel | parkell | S286 | Para mistura e aplicação de cimento. |
| Farmacêutica | |||
| Xilazina (ANASEDAN 2%) | Ceva Farmacêutica (Brasil) | P10160 | Para indução anestésica. |
| Cetamina (DOPALEN 10%) | Ceva Farmacêutica (Brasil) | P30101 | Para indução anestésica. |
| Isoflurano (100%) | Cristá lia (Brasil) | 100ML | Para manutenção da anestesia. |
| Lidocaína (XYLESTESIN 5%) | Cristal | Pharma-Para | cuidados pós-cirúrgicos. |
| Cetoprofeno (PROFENID 100 mg) | Sanofi Aventis | 20ML | Para cuidados pós-cirúrgicos. |
| Solução de Lactato de Ringer | SANOBIOL LAB | 7898153652145 | Para cuidados pós-cirúrgicos. |
| TobraDex (Dexametasona 1 mg/g) | Alcon | 631 | Para lubrificação e proteção ocular. |
| Estimulação | |||
| Animal Estimulador Transcraniano | Soterix Medical | 2100 | Para a geração atual. |
| Suporte de eletrodo tipo pino (Base de suporte cilíndrico) | Suporte de eletrodo Soterix Medical | 2100 | (Implante). |
| Eletrodo tipo pino (Ag/AgCl) | Soterix Medical | 2100 | Para entrega de corrente (eletrodo). |
| Tampa de eletrodo tipo pino | Soterix Medical | 2100 | Para proteção de implantes. |
| Corpo de Eletrodo (Revestido Ag/AgCl) | Soterix Medical | 2100 | Para entrega de corrente (eletrodo). |
| Solução salina (0,9%) | FarmaX | 7896902206441 | Meio condutor para entrega de corrente. |
| Pinças ou fórceps padrão | - | Para configuração de ETCC. | |
| Reação em cadeia da polimerase em tempo real | |||
| BioRad CFX96 Sistema em tempo real | BioRad | C1000 | para qPCR |
| SsoAdvancedTM Universal SYBR Green Supermix (5 X 1mL) | BioRad | 1725271 | Para placas |
| de PCR de casca dura qPCR PCT COM 50 p/ CFX96 | BioRad | HSP9601 | Para qPCR |
| Microseal "B" selo pct c/ 100 | BioRad | MSB1001 | para qPCR |
Referências
- Filmer, H. L., Dux, P. E., Mattingley, J. B. Applications of transcranial direct current stimulation for understanding brain function. Trends in Neurosciences. 37 (12), 742-753 (2014).
- Nitsche, M. A., Paulus, W. Sustained exci....
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Reimpressões e permissões
