Análisis digital de inmunomanchado de ZW10 Interacción de proteínas en tejidos pulmonares humanos
Summary
La proteína interactuable ZW10 (ZWINT) participa en el punto de control del husillo mitético y en la patogénesis del carcinoma. Aquí, introducimos una metodología de inmunomanchades de ZWINT en tejidos de cáncer de pulmón humano, seguida de la exploración digital de diapositivas enteras y análisis de imágenes. Esta metodología puede proporcionar imágenes digitales de alta calidad y resultados fiables.
Abstract
El propósito de este estudio es introducir una metodología de inmunomancha de los tejidos pulmonares humanos, seguida de un escaneo digital completo y análisis de imágenes. El escaneo digital es una forma rápida de escanear una pila de diapositivas y producir imágenes digitales con alta calidad. Puede producir resultados concordantes con la microscopía de luz convencional (CLM) por patólogos. Además, la disponibilidad de imágenes digitales hace posible que varias personas puedan observar simultáneamente la misma diapositiva. Además, las imágenes digitales de diapositivas se pueden almacenar en una base de datos, lo que significa que se evita el deterioro a largo plazo de las diapositivas de vidrio. Las limitaciones de esta técnica son las siguientes. En primer lugar, necesita tejido preparado de alta calidad y los toboganes originales de inmunohistoquímica (IHC) sin ningún daño o exceso de residuos de sellador. En segundo lugar, las áreas tumorales o no tumorales deben ser especificadas por patólogos experimentados antes del análisis utilizando software, con el fin de evitar cualquier confusión sobre el tumor o áreas no tumorales durante la puntuación. En tercer lugar, el operador necesita controlar la reproducción del color durante todo el proceso de digitalización en imágenes de diapositivas enteras.
Introduction
La proteína interactuable ZW10 (ZWINT) es un componente necesario del complejo kinetochore que participa en el punto de control del husillo mitotico1,2,3. Se ha informado de que el agotamiento de ZWINT conduce a una segregación prematura de cromosomas aberrante1,2,3. Estudios recientes han sugerido que ZWINT participa en la patogénesis de múltiples tumores promoviendo la proliferación de células tumorales4,5. Hemos informado previamente de la sobreexpresión de ZWINT en el cáncer de pulmón5. Ha sido ampliamente aceptado que el análisis de diapositivas por patólogos que utilizan CLM es lento y no cuantitativo6,7,8. Además, el deterioro de las diapositivas de vidrio almacenadas podría hacer imposible retraer las diapositivas creadas anteriormente. El método emergente de imágenes digitales basadas en computadoras (WSI) puede superar estas limitaciones6,7,8.
Con este fin, describimos una metodología de inmunomanchadeing de ZWINT en tejidos de cáncer de pulmón humano, junto con el escaneo digital de diapositivas enteras y el análisis de imágenes basado en software. La principal ventaja de esta metodología es la producción de resultados concordantes con CLM. Esta tecnología puede ser ampliamente utilizada en las áreas de puntuación patológica de la tinción de hematoxilina-eosina (H&E) e IHC, hibridación in situ de fluorescencia (FISH), microarrays de tejido (TMA), y descubrimiento y desarrollo de fármacos.
Protocol
Representative Results
Discussion
El escaneo de diapositivas enteras se está convirtiendo en un tema candente por su análisis robusto y la producción de imágenes de alta calidad con fines clínicos y de investigación11,12,13. Las imágenes pueden ser producidas por microscopios de escaneo deslizante en minutos11,12,13. Mediante la aplicación de esta metodología, …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este proyecto fue apoyado por la National Natural Foundation of China (No. 81500151, 81400121, 81270607, 81541027 y 81501352) y la Fundación Natural de la Provincia de Hubei (China) (No. 20177CFB631). Los autores expresan su agradecimiento a Guo Qin, Chang Min, Li Hui, y sus colegas de Wuhan Google Biological Technology Co., LTD por su apoyo técnico. Los autores también agradecen a Muhammad Jamal por la edición del lenguaje.
Materials
| Pannoramic MIDI | 3D HISTECH | Cat: PMIDI-040709 | An automated digital slide scanner with a remarkable feature set :12-slide capacity, fluorescence scanning, and many more. |
| QuantCenter | 3D HISTECH | Downloaded from the official website of the company | The framework for 3DHISTCH's image analysis applications. |
| LEICA RM2235 | Leica Microsystems | Cat: 14050038604 | The enhanced precision of the new accessories will add convenience to block to knife approach as well as specimen orientation. |
| Rabbit anti-human Anti-ZWINT antibody | Abcam | Cat: ab197794 | Immunohistochemical analysis of ZWINT in human lung tissue. |
| Anti-rabbit secondary antibody | Wuhan Goodbio Technology | Cat:GB23303-1 | Secondary antibody for IHC staining. |
| Phosphate-buffered saline | Wuhan Goodbio Technology | Cat:G0002 | A solution containing a phosphate buffer. |
| OLYMPUS CX23 | OLYMPUS | Cat:6M87620 | Microscope for detection of H&E or IHC slides. |
| Dimethylbenzene | Shanghai Lingfeng Chemical Reagent | Cat:1330-20-7 | A colorless, flammable fluid used as a solvent and clarifying agent in the preparation of tissue sections for microscopic study. |
| Hematoxylin Staining Solution | Wuhan Servicebio technology | Cat:G1039 | It is commonly used for histologic studies, oftern colors the nuclei of cells blue. |
| Tween 20 | Baitg | Cat:2005-64-5 | It is a polysorbate-type nonionic surfactant formed by the ethoxylation of sorbitan before the addition of lauric acid. It is used as a deterent and emulsifier in pharmacological applications. |
| Citric acid repair liquid | Wuhan Servicebio technology | Cat:G1202 | Is is used to repair antigen after fixation during IHC procedure. |
| LEICA ASP200s | Leica | Cat: 14048043626 | It was designed for routine and research histopathology of up to 200 cassettes. |
| LEICA Arcadia H | Leica | Cat: 14039354103 | It is a heated paraffin embedding station and allows for simple operation and precise control, resulting in improved quality, a smooth workflow and reliability. |
| LEICA Arcadia C | Leica | Cat: 14039354102 | It is a cold plate holding more than 60/65 cassettes on its large working surface. It was designed with an environment adaptive control module to make sure the operating temperature is always stabilized at -6°C. |
| CaseViewer Software | 3DHISTECH |
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