Insan akciğer dokularında ZW10 etkileşim protein Immünoster dijital Analizi
Summary
ZW10 etkileşen protein (ZWıNT) mitotik mil kontrol noktasına ve karsinomun patogenezine katılır. Burada, insan akciğer kanseri dokularında zwınt immün boyama bir metodoloji tanıtmak, tüm slaytlar ve görüntü analizi dijital tarama izledi. Bu metodoloji, yüksek kaliteli dijital görüntüler ve güvenilir sonuçlar sağlayabilir.
Abstract
Bu çalışmanın amacı, insan akciğer dokularının immunoster bir metodolojisi tanıtmak, tüm slayt dijital tarama ve görüntü analizi izledi. Dijital tarama, bir slayt yığınını taramak ve yüksek kalitede dijital görüntüler üretmek için hızlı bir yoldur. Bu, patologlar tarafından konvansiyonel ışık mikroskobu (CLM) ile uyumlu sonuçlar üretebilir. Ayrıca, dijital görüntülerin kullanılabilirliği, aynı slaytın birden çok kişi tarafından aynı anda gözlemlenmesini mümkün kılar. Ayrıca, slaytların dijital görüntüleri bir veritabanında depolanabilir, bu da cam kaydırakların uzun süreli bozulmasını önlenir. Bu tekniğin sınırlamaları aşağıdaki gibidir. İlk olarak, yüksek kaliteli hazırlanmış doku ve orijinal immünhistokimya (ıHC) herhangi bir hasar veya aşırı sızdırmazlık kalıntısı olmadan slaytlar gerekir. İkinci olarak, tümör veya nontümör alanları Puanlama sırasında tümör veya nontümör alanları hakkında herhangi bir karışıklık önlemek için, yazılım kullanarak analiz önce deneyimli patologlar tarafından belirtilmelidir. Üçüncü olarak, operatör tüm slayt görüntüleme içinde dijitalleştirme işlemi boyunca renk çoğaltılması kontrol etmek gerekir.
Introduction
ZW10 etkileşime giren protein (zwint), mitotik mil kontrol noktası1,2,3‘ te yer alan kinetochore kompleksinin gerekli bir bileşenidir. Bu zwint tükenmesi anormal prematüre kromozom segregasyon1,2,3yol açmaktadır bildirilmiştir. Son çalışmalar, zwint ‘in tümör hücrelerinin proliferasyonunun yaygınlaştırılması ile multipl tümörlerin patogenezine dahil olduğunu öne sürdü4,5. Daha önce akciğer kanserinde zwınt ekspresyonu bildirdi5. CLM kullanarak patologlar tarafından slaytların Analizi zaman alıcı ve niceliksel6,7,8olduğunu yaygın olarak kabul edilmiştir. Dahası, saklanan cam slaytların bozulması daha önce oluşturulan slaytları geri çekmek imkansız hale gelebilir. Bilgisayar tabanlı, dijital tüm slayt görüntüleme (WSI) gelişmekte olan yöntem bu sınırlamalar6,7,8üstesinden gelebilir.
Bu amaçla, insan akciğer kanseri dokularında zwınt immün boyama bir metodoloji tarif, tüm slayt dijital tarama ve yazılım tabanlı görüntü analizi ile birleştiğinde. Bu metodolojinin ana avantajı, CLM ile uyumlu sonuçlar üretilmesi. Bu teknoloji, Hematoksilin-eozin lekeleme (H & E) ve IHC, floresans in situ hibridizasyon (balık), doku mikrodizileri (TMA) ve ilaç keşfi ve gelişimi gibi patolojik skorlama alanlarında yaygın olarak kullanılabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Tüm slayt tarama güçlü tarama ve klinik ve araştırma amaçlı yüksek kaliteli görüntüler üretimi için sıcak bir konu haline geliyor11,12,13. Görseller,11,12,13dakika içinde slayt tarama mikroskopları tarafından üretilebilmektedir. Bu metodolojisi uygulayarak, ZWıNT ıFC slaytları için yüksek kaliteli görüntüler …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu proje Çin ‘in ulusal doğal Vakfı (No. 81500151, 81400121, 81270607, 81541027 ve 81501352) ve Hubei eyaleti (Çin) doğal temeli (No. 2017CFB631) tarafından destekleniyordu. Yazarlar Guo Qin, Chang Min, li Hui ve Wuhan Google biyolojik teknoloji Co, LTD onların teknik destek için meslektaşları onların takdir ifade. Yazarlar da dil düzenleme için muhammed Jamal teşekkür ederiz.
Materials
| Pannoramic MIDI | 3D HISTECH | Cat: PMIDI-040709 | An automated digital slide scanner with a remarkable feature set :12-slide capacity, fluorescence scanning, and many more. |
| QuantCenter | 3D HISTECH | Downloaded from the official website of the company | The framework for 3DHISTCH's image analysis applications. |
| LEICA RM2235 | Leica Microsystems | Cat: 14050038604 | The enhanced precision of the new accessories will add convenience to block to knife approach as well as specimen orientation. |
| Rabbit anti-human Anti-ZWINT antibody | Abcam | Cat: ab197794 | Immunohistochemical analysis of ZWINT in human lung tissue. |
| Anti-rabbit secondary antibody | Wuhan Goodbio Technology | Cat:GB23303-1 | Secondary antibody for IHC staining. |
| Phosphate-buffered saline | Wuhan Goodbio Technology | Cat:G0002 | A solution containing a phosphate buffer. |
| OLYMPUS CX23 | OLYMPUS | Cat:6M87620 | Microscope for detection of H&E or IHC slides. |
| Dimethylbenzene | Shanghai Lingfeng Chemical Reagent | Cat:1330-20-7 | A colorless, flammable fluid used as a solvent and clarifying agent in the preparation of tissue sections for microscopic study. |
| Hematoxylin Staining Solution | Wuhan Servicebio technology | Cat:G1039 | It is commonly used for histologic studies, oftern colors the nuclei of cells blue. |
| Tween 20 | Baitg | Cat:2005-64-5 | It is a polysorbate-type nonionic surfactant formed by the ethoxylation of sorbitan before the addition of lauric acid. It is used as a deterent and emulsifier in pharmacological applications. |
| Citric acid repair liquid | Wuhan Servicebio technology | Cat:G1202 | Is is used to repair antigen after fixation during IHC procedure. |
| LEICA ASP200s | Leica | Cat: 14048043626 | It was designed for routine and research histopathology of up to 200 cassettes. |
| LEICA Arcadia H | Leica | Cat: 14039354103 | It is a heated paraffin embedding station and allows for simple operation and precise control, resulting in improved quality, a smooth workflow and reliability. |
| LEICA Arcadia C | Leica | Cat: 14039354102 | It is a cold plate holding more than 60/65 cassettes on its large working surface. It was designed with an environment adaptive control module to make sure the operating temperature is always stabilized at -6°C. |
| CaseViewer Software | 3DHISTECH |
Referências
- Endo, H., Ikeda, K., Urano, T., Horie-Inoue, K., Inoue, S. Terf/TRIM17 stimulates degradation of kinetochore protein ZWINT and regulates cell proliferation. The Journal of Biochemistry. 151 (2), 139-144 (2012).
- Wang, H., et al. Human Zwint-1 specifies localization of Zeste White 10 to kinetochores and is essential for mitotic checkpoint signaling. Journal of Biological Chemistry. 279 (52), 54590-54598 (2004).
- Lin, Y. T., Chen, Y., Wu, G., Lee, W. H. Hec1 sequentially recruits Zwint-1 and ZW10 to kinetochores for faithful chromosome segregation and spindle checkpoint control. Oncogene. 25 (52), 6901-6914 (2006).
- Ying, H., et al. Overexpression of Zwint predicts poor prognosis and promotes the proliferation of hepatocellular carcinoma by regulating cell-cycle-related proteins. OncoTargets and Therapy. 11, 689-702 (2018).
- Yuan, W., et al. Bioinformatic analysis of prognostic value of ZW10 interacting protein in lung cancer. OncoTargets and Therapy. 11, 1683-1695 (2018).
- Higgins, C. Applications and challenges of digital pathology and whole slide imaging. Biotechnic & Histochemistry. 90 (5), 341-347 (2015).
- Webster, J. D., Dunstan, R. W. Whole-slide imaging and automated image analysis: considerations and opportunities in the practice of pathology. Veterinary Pathology. 51 (1), 211-223 (2014).
- Al-Janabi, S., Huisman, A., van Diest, P. J. Digital pathology: current status and future perspectives. Histopathology. 61 (1), 1-9 (2012).
- Bonomi, P. D., et al. Predictive biomarkers for response to EGFR-directed monoclonal antibodies for advanced squamous cell lung cancer. Annals of Oncology. 29 (8), 1701-1709 (2018).
- Villalobos, M., et al. ERCC1 assessment in upfront treatment with and without cisplatin-based chemotherapy in stage IIIB/IV non-squamous non-small cell. Medical Oncology. 35 (7), 106 (2018).
- Griffin, J., Treanor, D. Digital pathology in clinical use: where are we now and what is holding us back?. Histopathology. 70 (1), 134-145 (2017).
- Huisman, A., Looijen, A., van den Brink, S. M., van Diest, P. J. Creation of a fully digital pathology slide archive by high-volume tissue slide scanning. Human Pathology. 41 (5), 751-775 (2010).
- Gray, A., Wright, A., Jackson, P., Hale, M., Treanor, D. Quantification of histochemical stains using whole slide imaging: development of a method and demonstration of its usefulness in laboratory quality control. Journal of Clinical Pathology. 68 (3), 192-199 (2015).
- Hofman, F. M., Taylor, C. R. Immunohistochemistry. Current Protocols in Immunology. 103, (2013).
- Ramos-Vara, J. A. Principles and Methods of Immunohistochemistry. Methods in Molecular Biology. 1641, 115-128 (2017).
- Otali, D., Fredenburgh, J., Oelschlager, D. K., Grizzle, W. E. A standard tissue as a control for histochemical and immunohistochemical staining. Biotechnic & Histochemistry. 91 (5), 309-326 (2016).
- Clarke, E. L., Treanor, D. Colour in digital pathology: a review. Histopathology. 70 (2), 153-163 (2017).
- Potts, S. J. Digital pathology in drug discovery and development: multisite integration. Drug Discovery Today. 14 (19-20), 935-941 (2009).
- Tabata, K., et al. Whole-slide imaging at primary pathological diagnosis: Validation of whole-slide imaging-based primary pathological diagnosis at twelve Japanese academic institutes. Pathology International. 67 (11), 547-554 (2017).
- Saco, A., Bombi, J. A., Garcia, A., Ramírez, J., Ordi, J. Current Status of Whole-Slide Imaging in Education. Pathobiology. 83 (2-3), 79-88 (2016).
- Griffin, J., Treanor, D. Digital pathology in clinical use: where are we now and what is holding us back?. Histopathology. 70 (1), 134-145 (2017).
