Bu el yazması bir tek-duvar karbon nanotüp (SWCNT) sentezi açıklar-SWCNT güvenilir teslim ve güçlü tedavi edici etkisini gösteren MALAT1 antianlamlı gapmer DNA oligonükleotid (SWCNT-anti-MALAT1), Birleşik Anti-MALAT1 tüp bebek ve içinde vivo. Yöntemleri kullanılan sentez, değiştirme, fiil ve SWCNT-anti-MALAT1 enjeksiyon açıklanmıştır.
Tek-duvar karbon nanotüp (SWCNT) olan hücrelere, proteinler, oligonucleotides ve sentetik küçük molekül uyuşturucu gibi birden fazla çeşit uyuşturucu dağıtmak için kullanılan nanopartikül, yeni bir türüdür. SWCNT özelleştirilebilir boyutları, yüzeysel geniş bir alanı vardır ve esnek yüzeyinde farklı değişiklikler yoluyla uyuşturucu ile bağlayabilirsiniz; Bu nedenle, uyuşturucu hücreye taşımak için ideal bir sistemdir. Uzun kodlamayan RNA’ların (lncRNAs) bir küme kodlamayan RNA 200 daha uzun olan nt, protein çevrilemeyen ancak biyolojik ve patofizyolojik işlemlerinde önemli bir rol oynamaktadır. Metastaz ilişkili akciğer adenokarsinom transkript 1 (MALAT1) son derece korunmuş bir lncRNA olduğunu. Yüksek MALAT1 düzeyleri multipl miyelom (MM) de dahil olmak üzere çeşitli kanserlerin kötü prognoz ile ilgili gösterilmiştir. Biz-si olmak kâşif MALAT1 DNA tamiri ve hücre ölüm mm düzenler; Böylece, MALAT1 MM için terapötik hedef olarak kabul edilebilir. Ancak, antianlamlı oligo verimli bir şekilde teslim inhibe/nakavt vivo içinde MALAT1 için hala bir sorundur. Bu çalışmada biz PEG-2000 ile SWCNT değiştirmek ve bunu bir anti-MALAT1 oligo eşlenik, bu bileşik tüp bebek teslim test etmek, Dissemine bir MM fare modeli olarak intravenöz enjekte etmek ve MM progresyon gösteren önemli bir inhibisyon gözlemlemek o SWCNT bir ideal teslimat servisi için anti-MALAT1 gapmer DNA’sı var.
SWCNT çeşitli ilaçlar, nükleik asitler, proteinler ve küçük moleküller gibi ideal tolerabilite ve in vitro1 ve içinde vivo2en az toksisite stably ve verimli bir şekilde sunabilir bir roman nanomaterial var. Functionalized SWCNT büyük biyouyumluluk ve su çözünürlük vardır, bir mekik daha küçük moleküller için kullanılabilir ve hücre zarının3,4,5nüfuz onları taşıyabilir.
lncRNAs olan bir küme RNA’ın (> 200 nt) bu mRNA için genom transkripsiyonu ama protein çevrilemez. Kanıt artan lncRNAs gen ifade6 Yönetmelikte katılmak ve inisiyasyon ve en tip-in MM7,8,9dahil olmak üzere kanser progresyon katılmaktadırlar göstermiştir. MALAT1 olan bir nükleer zenginleştirilmiş kodlamayan transkript 2 (NEAT2) ve son derece korunmuş lncRNA10. MALAT1 başlangıçta metastatik olmayan küçük hücreli akciğer kanseri (NSCLC)11‘ kabul edilmektedir, ancak çok sayıda tümör5,12,13‘ te overexpressed; en çok ifade lncRNAs biridir ve kötü prognoz MM8,14ile ilişkilidir. MALAT1 ifade düzeyini yalnızca MM15tanısı göre ölümcül ders ekstramedullar MM hastalarda anlamlı olarak daha yüksek.
Bir önceki çalışmada, biz anti-MALAT1 oligos sağlam DNA hasarı ve MM16 apoptosis gapmer DNA antianlamlı oligonucleotides MALAT1 hedefleme kullanarak yol doğruladı (anti-MALAT1) MM hücrelerdeki. Gapmer DNA antianlamlı DNA’sı oluşur ve 2′-OMe-hangi MALAT1 bölünme RNase H bir kez bağlı etkinlik17tarafından sor RNA’ların, bağlanmıştır. Antianlamlı oligos içinde vivo teslim verimliliğini hala klinik kullanımını sınırlar.
Teslim test etmek için SWCNT etkisi için anti-MALAT1 gapmer oligos, DNA DSPE-PEG2000-Amin için Birleşik anti-MALAT1 gapmer SWCNT functionalized. SWCNT-anti-MALAT1 sonra intravenöz bir MM Dissemine fare modeli enjekte edilir; çarpıcı bir inhibisyon dört tedaviler sonra görülmektedir.
Kanıt lncRNAs kanserler, MM7,8,9dahil olmak üzere çok sayıda fizyolojik ve patofizyolojik yordamlarda yönetmelikte yer almak göstermiştir; Onlar antianlamlı oligonucleotides20,21,22tarafından gerçekleştirilebilir kanser tedavisi için hedef olma potansiyeline sahip. ABD Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) fomivirsen sitomegalovirü…
The authors have nothing to disclose.
Yazarlar Lerner Araştırma Enstitüsü proteomik, genomik ve görüntüleme göbek onların yardım için teşekkür ederiz ve destek. Fonlama: Bu eser mali NIH/ncı hibe R00 CA172292 (J.J.Z.) ve başlangıç fonlar (için J.J.Z.) ve klinik ve çevirim bilim işbirlikçi (CTSC) Case Western Reserve Üniversitesi temel kullanımı Pilot hibe (için J.J.Z.) tarafından desteklenmiştir. Bu eser Ulusal Sağlık Enstitüleri SIG grant 1S10OD019972-01 ile fon ile satın alınmış Leica SP8 confocal mikroskop kullanılmaktadır.
SWCNTs | Millipore-Sigma | 704113 | |
DSPE-PEG2000-Amine | Avanti Polar Lipids | 880128 | |
bath sonicator | VWR | 97043-992 | |
4 mL centrifugal filter | Millipore-Sigma | Z740208-8EA | |
UV/VIS spectrometer | Thermo Fisher Scientific | accuSkan GO UV/Vis Microplate Spectrophotometer | extinction coefficient of 0.0465 L/mg/cm at 808 nm |
Sulfo-LC-SPDP | ProteoChem | c1118 | |
DTT solution | Millipore-Sigma | 43815 | |
NAP-5 column | GE Healthcare | 17-0853-01 | |
in vivo imaging system | PerkinElmer | ||
NOD.CB17-Prkdcscid/J mice | Charles River lab | 250 | |
Flow cytometer | Becton Dickinso | ||
Lipofectamine | Invitrogen | 11668019 | Lipofectamine2000 |
Fetal bovine serum (FBS) | Invitrogen | 10437-028 | |
RMPI-1640 medium | Invitrogen | 11875-093 | |
MALAT1-QF: | synthesized by IDT Company | 5’- GTTCTGATCCCGCTGCTATT – 3’ | |
MALAT1-QR: | synthesized by IDT Company | 5’- TCCTCAACACTCAGCCTTTATC – 3’ | |
GAPDH-QF: | synthesized by IDT Company | 5’- CAAGAGCACAAGAGGAAGAGAG – 3’ | |
GAPDH-QR: | synthesized by IDT Company | 5’- CTACATGGCAACTGTGAGGAG – 3’ | |
Quantitative PCR using SYBR Green PCR master mix | Thermo Fisher Scientific | A25780 | |
RevertAid first-stand cDNA synthesis kit | Thermo Fisher Scientific | K1621 | |
anti-MALAT1 | synthesized by IDT Company | 5’-mC*mG*mA*mA*mA*C*A*T*T *G*G*C*A*C*A*mC*mA*mG*mC*mA-3’ |
|
Cell Viability Assay Kit | Promega Corporation | G7570 | CellTiter-GloLuminescent Cell Viability Assay Kit |
accuSkan GO UV/Vis Microplate Spectrophotometer | Thermo Fisher Scientific | ||
centrifugal filter | Millipore-Sigma | UFC910008 | |
SPSS software | IBM | version 24.0 | |
D-Luciferin | Millipore-Sigma | L9504 |