O protocolo ilustra o uso do exame histopatológico e imuno-histoquímica para perfil o macrófago de beta de receptor de folato e sua relação com a célula total imune infiltrar-se na biópsia da artéria temporal na arterite de células gigantes.
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Artigo de método
Um estudo de Immunohistopathologic de perfil o folato receptores Beta macrófago e Vascular microambiente imune na arterite de células gigantes
Neste artigo
Resumo
Resumo
Arterite de células gigantes (GCA) é uma doença crónica, imune-mediada das artérias de tamanhos médio para grande afeta adultos mais velhos. GCA manifestos com artrite e oclusivos sintomas de dores de cabeça, derrame ou perda de visão. Macrófagos e linfócitos T-helper infiltrar a parede vascular e produzem uma resposta pro-inflamatórios que levam a lesão vascular e isquemia. Até à data, não há nenhum biomarcador de GCA que pode monitorar a resposta terapêutica guia e atividade de doença.
Beta de receptor de folato (FRB) é uma proteína de glicosilfostidilinosiol que está ancorada na membrana celular e normalmente expresso na linhagem mielomonocítica e na maioria das células de leucemia mieloide, bem como no tumor e macrófagos sinoviais reumatoides, onde sua expressão se correlaciona com a severidade da doença. A capacidade de FRB vincular compostos de ácido fólico, ácido fólico-conjugados e drogas antifolate tornou um alvo druggable na pesquisa de doenças inflamatórias e câncer. Este relatório descreve os métodos de histopatológico e imuno-histoquímicos utilizados para avaliar a expressão e a distribuição de FRB em relação GCAimmunopathology.
Biópsias de artéria temporal fixada em formol e parafina do GCA e controles normais foram coradas com hematoxilina e eosina, para rever a histologia do tecido e identificar características patognomônicas. Imuno-histoquímica foi usado para detectar a expressão FRB, CD68 e CD3. Uma análise microscópica foi realizada para quantificar o número de células coradas positivamente em 10 seções selecionadas do elevado-poder-campo e seus respectivos locais na parede arterial.
Inflamação Lymphohistiocytic (LH) acompanhado por hiperplasia da íntima e lâmina elástica interrompida foi vista em GCA com nenhum encontrado nos controles. O infiltrado de LH foi composto de aproximadamente 60% macrófagos linfócitos e 40%. FRB expressão era restrito aos macrófagos, composto por 31% da população de macrófagos CD68 + total e localizado para a mídia e adventícia. Não FRB foi visto em controles.
Este protocolo demonstrou um padrão distinto de numérico e espacial do macrófago FRB em relação o microambiente imune vascular em GCA.
Introdução
Arterite de células gigantes (GCA) é uma doença inflamatória das artérias de médio a grande, visando a aorta e seus ramos e afetando adultos mais velhos. Apresenta-se com leve a graves complicações isquêmicas, tais como dores de cabeça, dor no maxilar, perda de visão, acidente vascular cerebral e tecido gangrena. O diagnóstico é confirmado pela altos marcadores inflamatórios como taxa de sedimentação de eritrócitos (ESR) e um padrão distinto de histopatológico na artéria temporal biópsia (TAB)1. GCA é a vasculite mais comum de adulta e a acessibilidade da artéria temporal obtida para o diagnóstico apresenta uma vantagem sobre outros vasculopath....
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Protocolo
Todos os métodos descritos foram aprovados pelo Conselho de revisão institucional estado de Penn.
1. histopatológica preparação, processamento e após a obtenção de biópsia da artéria Temporal
Nota: A biópsia da artéria temporal (TAB) é realizada sob anestesia local e condições estéreis por um cirurgião certificado. Depois de obter cirurgicamente uma seção arterial de 3 cm no lado mais afetado, o espécime é fixado em formalina imediatamente por 24 h, dividido em seções de 3 a 4 mm e incorporado em parafina, pagando a atenção cuidadosa para o alinhamento adequado do tecido no bloco que é então armaze....
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Resultados
Achados histopatológicos
A H & E manchas em anatomia arterial normal de espécimes normal demonstrada com células endoteliais na túnica íntima, células musculares lisas da túnica média, e uma matriz de colagénio heterogêneo incluem fibroblastos e vasos alimentador chamado vasa vasorum no adventitia túnica. Não há nenhum infiltrado inflamatório identificado. Artérias temporais positivas de GCA demonstraram mod.......
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Discussão
GCA é a vasculite mais comum em adultos, e sua marca patológica exemplifica uma potente combinação de linfócitos T helper e ativados macrófagos que também podem ser encontrados em outras doenças granulomatosas ou vasculopathies como sarcoidose e granulomatosa poliangiite2,3. Em GCA, a artéria temporal fornece uma boa representação de tamanho médio a grande artéria e a biópsia TA dá uma amostra considerável que pode ser armazenada em blocos de parafina durante ano.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi feito possível pelo suporte de Stairs de Douglas do Dr., Marianne Klinger, Ann Benko, divisão de Reumatologia/departamento de medicina e o Molecular e histopatológico de núcleo de laboratório, Estado Penn University College of Medicine, Hershey PA.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Reichert-Jung | de micrótomo | ||
| e lamínulas | Fisher Scientific | ||
| Rack vertical | Fisher Scientific | ||
| Microscópio de luz | Olympus BX60 Microscópio | ||
| de xileno | |||
| acetona em concentrações de água | 100%, 90%, 70% | ||
| Solução salina tamponada com Tris (TBS) | Dako Wash BufferS3006 | ||
| 3% de peróxido de hidrogênio em TBS | |||
| Diaminobenzidina (DAB) | Sigma Fast Tablet set | ||
| Chemical Permount Montagem Média | Fisher Scientific | SP-15-100 | |
| Harleco Gill's III Hematoxilina | Fiisher Scientific 23-750-019 | ||
| Harleco Eosina Y 1% Solução Estoque Alcoólica | Fisher Scientific | 23-749-977 | |
| 10 mM ácido cítrico monohidratado (pH 6.0) | |||
| Receptor anti-folato de coelho policlonal beta | Manohar Ratnam | otimizado em 1:800 | |
| Camundongo monoclonal anti-humano CD68 Dako | M071801 | otimizado a 1:200 | |
| Coelho policlonal anti-CD3 | Agilent Dako | A0452 | otimizado a 1:100 |
| Anticorpo secundário anti-coelho/camundongo de cabra polimérico | Dako | ||
| Tecido | para controle positivo de FRB |
Referências
- Klippel, J. H., Stone, J. H., White, P. H. Primer on the rheumatic diseases. , Springer Science & Business Media. (2008).
- Weyand, C. M., Goronzy, J. J. Immune mechanisms in medium and large-vessel vasculitis. Nature Reviews Rheumatol. 9 (12), 731-740 (2013).
- Weyand, C. M., Liao, Y. J., Goronzy, J. J.
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Reimpressões e permissões
