Summary

Criação de uma anastomose colônica em ratos

Published: January 17, 2019
doi:

Summary

Fuga anastomótica ou avaria após a cirurgia é das principais causas de mortalidade e morbidade pós-operatória. A cirurgia para a criação de uma anastomose colônica é um método confiável e reprodutível para estudar os mecanismos de cicatrização de anastomoses.

Abstract

Anastomose intestinal é comumente realizada em operações eletivas e emergentes. Mesmo assim, anastomótica vazamentos são um altamente temida complicações de cirurgias do cólon e podem ocorrer em até 26% de anastomose cirúrgica, com mortalidade sendo até 39% para pacientes com tal um vazamento. Atualmente, ainda há uma escassez de dados, detalhando os mecanismos celulares de cura anastomótica. Elaboração de estratégias preventivas e modalidades de tratamento para fuga anastomótica poderia ser grandemente potencializado por uma melhor compreensão da cura anastomótica apropriado.

Um modelo murino é ideal como estudos anteriores mostraram que a anastomose murino é o mais clìnica semelhante ao caso humano em comparação com outros modelos animais. Oferecemos um modelo murino facilmente reproduzível de anastomose colônica em ratos que permitirá mais exemplo de cura anastomótica.

Introduction

Uma altamente temida complicação da anastomose cirúrgica do intestino é anastomótica avaria ou vazamento. Fuga anastomótica, o que provoca o derrame do conteúdo intraluminal na cavidade abdominal, é fatal e pode levar rapidamente a sepse abdominal; taxas de choque variam de 0,3% para 5,5% após a anastomose de intestino e subir para entre 0,5% e 26% para anastomose colônica1,2. Taxas de mortalidade após vazamentos podem ser tão elevadas como 39% devido ao rápido início da sepse e rápida progressão para morte seguindo intraabdominal contaminação3. Estratégias preventivas e as modalidades de tratamento baseiam-se atualmente na fisiopatologia que não é totalmente compreendida.

Atualmente, anastomótica cura é muitas vezes comparada com a cicatrização de feridas cutâneas mais amplamente estudados, que está provando para ser um fac-símile relativamente pobre. Cicatrização ocorre em uma série de fases sobrepostas, começando com a fase de retardo inicial. Durante dias 0-4 após a criação da anastomose intestinal, a fase de retardo é definida por uma resposta inflamatória aguda que limpa a ferida de restos celulares. Em seguida, nos dias 3-4, proliferação fibroblástica e produção de colágeno tipifica a fase fibrophasia. Finalmente, dia 10, depois de um período prolongado de remodelação do colágeno é conhecido como a fase de maturação. É importante notar que força anastomótica é baixa e depende do apoio extrínseco de grampos colocados cirurgicamente ou sutura até que o colágeno é depositado4. Compreender o papel e sincronismo cada camada da parede intestinal desempenha na cicatrização de feridas anastomótica e o envolvimento em tipos de células inflamatória mediada como macrófagos, bem como elucidar marcadores de substituto para prever anastomótica falha ou sucesso poderia reduza significativamente a morbilidade, mortalidade e despesas de saúde do cólon operações5a seguir.

O modelo murino tem demonstrado em estudos anteriores para ser útil em imitando anastomose humana6. Enquanto existem exemplos populares, comprovados e bem estudados o modelo murino Colônico anastomótica, particularmente o método descrito por Komen et al 7, estes modelos favorecem ileocecal ou ascendente colocolonic anastomótica técnicas8. Estudos anteriores de pacientes humanos demonstraram diferença significativa nas taxas de vazamento entre ileocecal, colocolonic e anastomose colorretal, destacando a necessidade de mais modelos experimentais em diferentes localizações anatômicas. Métodos adicionais, popularmente usados visam desenvolver um modelo que intencionalmente cria uma fuga anastomótica, ao invés de elucidar os mecanismos celulares necessários para normal anastomótica ferida cura9. Modelos do rato tem sido tentados no passado, mas têm taxas de deiscência anastomótica e/ou sinais de vazamento (ou seja, formação de abscesso) significativamente mais baixo do que os seres humanos e ratos6,7. Além disso, linhas experimentais mais geneticamente modificadas estão disponíveis em ratos do que ratos. Isto torna o modelo de rato menos útil para um modelo anastomótica. Além disso, suínos e caninos modelos tiveram investigação clínica menos do que o modelo murino6,7.

Propomos um procedimento seguro, tecnicamente simples e rapidamente e facilmente reproduzível para a criação de uma anastomose colônica em um modelo murino que deveria facilitar mais investigação sobre o mecanismo underreported de ferida anastomótica cura10 .

Protocol

O seguinte protocolo foi aprovado pela Universidade de Oklahoma Ciências centro institucional Animal cuidados de saúde e Comissão usar (IACUC) e está em conformidade com todas as orientações éticas institucionais relativas à utilização de animais de pesquisa. Além disso, todos os experimentos foram realizados em conformidade com os regulamentos institucionais, estaduais e federais sobre pesquisas com animais experimentais. Nota: Para este protocolo, usamos congenic feminino e mascul…

Representative Results

7 dias após a cirurgia, a anastomose deve ser bem curada. A anastomose pode ser colhida em pontos de tempo antes e depois de sete dias para melhor ilustrar as fases da cicatrização anastomótica. Na Figura 9, a análise histológica mostra um fibrótico (colágeno visualizado pela coloração tricromo) resposta mediada por músculo liso alfa-actina myofibroblasts positivo. No entanto, achamos que os resultados das análises histológicas variar entre ratos…

Discussion

Existem várias etapas-chave para assegurar o sucesso e minimizar a morbidade/mortalidade associada com este procedimento. Primeiro, certifique-se de tratamento cuidadoso do tecido intestinal e tome cuidado para evitar lesão de tração quando as vísceras para expor os dois pontos de giro. Uma tensão indevida sobre o intestino ou mesentério podem lesão a necrose intestinal intestino ou vasculatura e causa longe do local da anastomose. Além disso, Pinças afiadas ou fórceps com dentes não deve ser usado para lidar…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Nenhum

Materials

C57BL6/J mice Jackson Labs #00664 
Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24" Fisher Scientific 14-206-62
Polylined Sterile Field, 18" x 24" Busse Hospital Disposables 696 Cut a rectangular hole 
Isothesia isoflurane Henry Schein  50033
Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4" Fisher Scientific 22-415-469
Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube Dechra Veterinary Products NDC 17033-211-38
Nair depilatory cream Church & Dwight Co. 22339-05
Buprenex buprenorphine  0.3 mg/ml Reckitt Benckiser Pharma Inc NDC 12496-0757-5
1 cc insulin syringe, 27 G Becton Dickinson 329412
Chloraprep Shampoo Medline APL82287
Webcol alcohol prep swabs Covidien 6818
BioGel PI surgical gloves Mölnlycke Health Care ALA42675Z
Micro Forceps with teeth Roboz RS-5150
Fine scissors- sharp Fine Science Tools 14060-09
Straight serrated forceps Fine Science Tools 11050-10
Castro-Viejo needle driver Fine Science Tools 12565-14
0.9% Sodium Chloride Irrigation Baxter BHL2F7121 Warm to 37 °C prior to use
10 ml syringe Becton Dickinson 309604
4-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", PS-2 needle Henry Schein  6546037
Blue monofilament suture 24” BV-1 needle Henry Schein  8305H Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures.
Cole-Parmer Microscissors, Standard Grade, Straight, 4". Cole- Parmer EW-10818-06
Medline Sterile lubricating jelly Medline MDS032273H

Referências

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Citar este artigo
McCarthy, C. K., McGaha, P. K., Rozich, N. S., Yokell, N. A., Lees, J. S., Berry, W. L. Creation of Colonic Anastomosis in Mice. J. Vis. Exp. (143), e58742, doi:10.3791/58742 (2019).

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