Avaliando virulência e patogênese da infecção por Aeromonas em um modelo de Caenorhabditis elegans

Summary

Aqui, apresentamos três experimentos diferentes para estudar Aeromonas infecção em c. elegans. Usando estes métodos convenientes, é fácil avaliar a toxicidade entre e dentro de espécies de Aeromonas .

Abstract

O patógeno humano Aeromonas tem demonstrado clinicamente para causar gastroenterite, infecções de ferida, septicemia e infecções do trato urinário. Doenças humanas mais foram relatadas para ser associado com quatro espécies de bactérias: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veroniie Aeromonas caviae. O organismo modelo Caenorhabditis elegans é um bacterivore que fornece um modelo de infecção excelente por que estudar a patogênese bacteriana de Aeromonas. Aqui, apresentamos três experimentos diferentes para estudar Aeromonas infecção usando um modelo de c. elegans , incluindo ensaios de necrose muscular, toxicidade líquida e sobrevivência. Os resultados dos três métodos de determinar a virulência de Aeromonas foram consistentes. A. dhakensis foi mostrado para ser o mais tóxico entre as 4 espécies de Aeromonas principais causando infecções clínicas. Esses métodos são mostrados para ser uma maneira conveniente para avaliar a toxicidade entre e dentro de espécies de Aeromonas e contribuir para a nossa compreensão da patogênese da infecção por Aeromonas .

Introduction

O patógeno humano, Aeromonas, tem demonstrado clinicamente causar gastroenterite, infecções de ferida, septicemia e infecções de aparelho urinário^1,2. Doenças humanas mais associadas foram relatadas para ser associado com quatro espécies bacterianas: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veroniie Aeromonas caviae ^{2,3 , 4 , 5}. entre as doenças infecciosas Aeromonas , infecções de tecidos moles podem causar grave morbidade e mortalidade em seres humanos. De nota, necrose muscular é a forma mais grave da infecção de tecidos moles⁶. Observação da sobrevivência e necrose muscular de Caenorhabditis elegans após a infecção são um método conveniente especular a toxicidade de Aeromonas.

Cientistas já desenvolveram numerosos organismos modelo para estudar a infecções bacterianas. Em estudos anteriores, nematoides, zebrafishes e ratos foram usados como modelos animais para estudar a patogênese e a virulência de Aeromonas^6,7,8. Cada modelo animal tem suas ‘ vantagens e aplicações. O organismo modelo, Caenorhabditis elegans, é um nematódeo bacterivorous bactérias que aportes como foodnaturally. C. elegansdesenvolveu um complexo sistema imune inato contra infecção bacteriana ao longo de sua evolução. Sob o estresse da infecção bacteriana, c. elegans tem provado para ser um modelo de infecção excelente para estudar a patogênese bacteriana de Aeromonas^6,7,9 e outros patógenos como o fungo¹⁰ e enterohemorrágicas Escherichia coli O157: H7¹¹. No entanto, não há ainda nenhuma publicação que enfoca a metodologia em usando o c. elegans como modelo para o estudo da virulência de Aeromonas.

Aqui, apresentamos três experimentos diferentes para estudar Aeromonas infecção usando c. elegans como modelo animal: ensaios para a sobrevivência, toxicidade líquida e necrose muscular. Esses métodos são uma maneira conveniente para avaliar a toxicidade entre e dentro de espécies de Aeromonas e melhorar a compreensão da patogênese de Aeromonas.

Protocol

1. preparação do meio de cultura Nota: Consulte a tabela 1 para preparação da solução. Para preparar o M9 médio12, dissolva 1,5 g de KH2PO4, 5,66 g de Na2HPO4e 2,5 g de NaCl em 500 mL de água desionizada. Autoclave a 121 ° C por 20 min. espere até a temperatura de refrigeração e em seguida, adicionar 0,5 mL de 1 M MgSO4 antes da primeira utilização. Para preparar o nematódeo cresci…

Representative Results

Seguindo os protocolos descritos acima, é fácil diferenciar entre as toxicidades das quatro cepas de Aeromonas . O ensaio de sobrevivência de c. elegans é mostrado na Figura 1. Foram as taxas de sobrevivência de c. elegans infectados com espécies de Aeromonas , mostrados na ordem de cima para baixo: a. caviae, a. veronii, a. hydrophila e a. dhakensis. Embora haja diversidade em termos de toxicidade e…

Discussion

C. elegans é um nematódeo bacterivorous que naturalmente bactérias aportes como alimento e desenvolveu uma complicado imunidade inata às bactérias durante o seu processo evolutivo. Dois dos principais órgãos manter e apoiar a imunidade são a epiderme e o intestino^9,13. A epiderme e bandas do músculo de c. elegans assemelham-se as estruturas de tecidos moles em mamíferos e humanos⁶. Por causa destas característi…

Materials

Shaker incubator	YIH DER	LM-570R	Bacteria incubation
K2HPO4	J.T.Baker	MP021519455	Culture medium preparation
KH2PO4	J.T.Baker	3246-05	Culture medium preparation
Na2HPO4	J.T.Baker	MP021914405	Culture medium preparation
NaCl	SIGMA	31434	Culture medium preparation
MgSO4	SIGMA	M7506	Culture medium preparation
agar	Difco	214530	Culture medium preparation
CaCl2	SIGMA	C1016	Culture medium preparation
cholesterol	SIGMA	C8503	Culture medium preparation
ethanol	SIGMA	32205	Culture medium preparation
KOH	SIGMA	P5958	Culture medium preparation
6 cm petri plate	ALPHA PLUS	46	agar plate preparation
96-well plate	FALCON	353072	liquid assay
bacterial peptone	Affymetrix/USB	AAJ20048P2	Culture medium preparation
yeast extract	SIGMA	92144	Culture medium preparation
citric acid•H2O	SIGMA	C1909	Culture medium preparation
tri-potassium citrate•H2O	SIGMA	104956	Culture medium preparation
FudR	SIGMA	1271008	Culture medium preparation
disodium EDTA	SIGMA	E1644	Culture medium preparation
FeSO4•7 H2O	SIGMA	215422	Culture medium preparation
MnCl2•4 H2O	SIGMA	221279	Culture medium preparation
ZnSO4•7 H2O	SIGMA	204986	Culture medium preparation
CuSO4•5 H2O	SIGMA	C8027	Culture medium preparation
tryptone	SIGMA	16922	Culture medium preparation
Microscope system	Nikon	Eclipase Ti inverted	microscope imaging
Scientific CCD Camera	QImaging	Retiga-2000R Fast 1394	microscope imaging