Aqui, apresentamos três experimentos diferentes para estudar Aeromonas infecção em c. elegans. Usando estes métodos convenientes, é fácil avaliar a toxicidade entre e dentro de espécies de Aeromonas .
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Artigo de método
Avaliando virulência e patogênese da infecção por Aeromonas em um modelo de Caenorhabditis elegans
Neste artigo
Resumo
Resumo
O patógeno humano Aeromonas tem demonstrado clinicamente para causar gastroenterite, infecções de ferida, septicemia e infecções do trato urinário. Doenças humanas mais foram relatadas para ser associado com quatro espécies de bactérias: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veroniie Aeromonas caviae. O organismo modelo Caenorhabditis elegans é um bacterivore que fornece um modelo de infecção excelente por que estudar a patogênese bacteriana de Aeromonas. Aqui, apresentamos três experimentos diferentes para estudar Aeromonas infecção usando um modelo de c. elegans , incluindo ensaios de necrose muscular, toxicidade líquida e sobrevivência. Os resultados dos três métodos de determinar a virulência de Aeromonas foram consistentes. A. dhakensis foi mostrado para ser o mais tóxico entre as 4 espécies de Aeromonas principais causando infecções clínicas. Esses métodos são mostrados para ser uma maneira conveniente para avaliar a toxicidade entre e dentro de espécies de Aeromonas e contribuir para a nossa compreensão da patogênese da infecção por Aeromonas .
Introdução
O patógeno humano, Aeromonas, tem demonstrado clinicamente causar gastroenterite, infecções de ferida, septicemia e infecções de aparelho urinário1,2. Doenças humanas mais associadas foram relatadas para ser associado com quatro espécies bacterianas: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veroniie Aeromonas caviae 2,3 , 4 , 5. entre as doenças infecciosas Aeromonas , infecções de tecidos moles podem causar grave mor....
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Protocolo
1. preparação do meio de cultura
Nota: Consulte a tabela 1 para preparação da solução.
- Para preparar o M9 médio12, dissolva 1,5 g de KH2PO4, 5,66 g de Na2HPO4e 2,5 g de NaCl em 500 mL de água desionizada. Autoclave a 121 ° C por 20 min. espere até a temperatura de refrigeração e em seguida, adicionar 0,5 mL de 1 M MgSO4 antes da primeira utilização.
- Para preparar o nematódeo crescimento médio (NGM)12, dissolva 3 g de NaCl, peptona bacteriana 2,5 g e ágar 20 g em 1 L de água desionizada. Autoclave a 121 ° C por 20 min. e....
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Resultados
Seguindo os protocolos descritos acima, é fácil diferenciar entre as toxicidades das quatro cepas de Aeromonas . O ensaio de sobrevivência de c. elegans é mostrado na Figura 1. Foram as taxas de sobrevivência de c. elegans infectados com espécies de Aeromonas , mostrados na ordem de cima para baixo: a. caviae, a. veronii, a. hydrophila e a. dhakensis. Embora haja diversidade em termos de toxicidade entre e.......
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Discussão
C. elegans é um nematódeo bacterivorous que naturalmente bactérias aportes como alimento e desenvolveu uma complicado imunidade inata às bactérias durante o seu processo evolutivo. Dois dos principais órgãos manter e apoiar a imunidade são a epiderme e o intestino9,13. A epiderme e bandas do músculo de c. elegans assemelham-se as estruturas de tecidos moles em mamíferos e humanos6. Por causa destas características, c........
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Agradecemos o apoio da instalação de núcleo de c. elegans em Taiwan e para o diagnóstico de Microbiologia e antimicrobiana resistência laboratório de Nacional Cheng Kung University Hospital para fornecer a Aeromonas Isola. Reconhecemos também o centro de genética de Caenorhabditis (CGC) e o WormBase. Agradecemos também a Savana Moore para editar o manuscrito.
Este estudo foi parcialmente suportado por concessões do Ministério da ciência e tecnologia de Taiwan (mais 105-2628-B-006-017-MY3) e o Hospital da Universidade Nacional Cheng Kung (NCKUH-10705001) a paixao Chen.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Incubadora Shaker | YIH DER | LM-570R | Incubadora de bactérias |
| K2HPO4 | J.T.Baker | MP021519455 | Preparação do meio de cultura |
| KH2PO4 | J.T.Baker | 3246-05 | Preparação do meio de cultura |
| Na2HPO4 | J.T.Baker | MP021914405 | Preparação do meio de cultura |
| NaCl | SIGMA | 31434 | Preparação do meio de cultura |
| MgSO4 | SIGMA | M7506 | Preparação do meio de cultura |
| ágar | Difco | 214530 | Preparação de meio de cultura |
| CaCl2 | SIGMA | C1016 | Preparação do meio de cultura |
| colesterol | SIGMA | C8503 | Meio de cultura preparado |
| etanol | SIGMA | 32205 | Preparação do meio de cultura |
| KOH | SIGMA | P5958 | Preparação do meio de cultura |
| Placa de Petri de 6 cm | ALPHA PLUS | 46 | preparação de placa de ágar |
| Placa de 96 poços | FALCON | 353072 | ensaio líquido |
| peptona bacteriana | Affymetrix/USB | AAJ20048P2 | Preparação do meio de cultura |
| extrato de levedura | SIGMA | 92144 | Meio de cultura de preparação |
| ácido cítrico• H2O | SIGMA | C1909 | Preparação do meio de cultura |
| citrato de tri-potássio• H2O | SIGMA | 104956 | Preparação do meio de cultura |
| FudR | SIGMA | 1271008 | Preparação do meio de cultura |
| EDTA dissódico | SIGMA | E1644 | Preparação do meio de cultura |
| FeSO4• 7 H2O | SIGMA | 215422 | Preparação do meio de cultura |
| MnCl2• 4 H2O | SIGMA | 221279 | Preparação do meio de cultura |
| ZnSO4• 7 H2O | SIGMA | 204986 | Preparação do meio de cultura |
| CuSO4• 5 H2O | SIGMA | C8027 | Preparação do meio de cultura |
| triptona | SIGMA | 16922 | Preparação do meio de cultura |
| Sistema de microscópio | Nikon | Eclipase Ti invertida | Imagem microscópica |
| Câmera CCD Científica | QImaging | Retiga-2000R Fast 1394 | Imagem microscópica |
Referências
- Parker, J. L., Shaw, J. G. Aeromonas spp. clinical microbiology and disease. Journal of Infection. 62 (2), 109-118 (2011).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Skin and soft-tissue infections caused by Aeromonas species.....
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Reimpressões e permissões
