Оценки вирулентности и патогенез Aeromonas инфекции в Caenorhabditis elegans модели

Summary

Здесь мы представляем три различных экспериментов для изучения Aeromonas инфекции в C. elegans. Используя эти удобные методы, это легко для оценки токсичности между и внутри Aeromonas видов.

Abstract

Человеческий патоген Aeromonas было клинически показано, чтобы причинить гастроэнтерита, раневые инфекции, сепсис и мочевыводящих путей. Большинство человеческих заболеваний, как сообщается, быть связаны с четырьмя видами бактерий: Aeromonas dhakensis, аэромонадами hydrophila, Aeromonas veroniiи Aeromonas caviae. Модельный организм Caenorhabditis elegans является bacterivore, который обеспечивает отличную инфекции модель изучить бактериальных патогенеза Aeromonas. Здесь мы представляем три различных экспериментов для изучения Aeromonas инфекции с использованием модели C. elegans , включая выживание, жидкие токсичности и анализов некроз мышц. Результаты трех методов определения вирулентности Aeromonas согласуются. A. dhakensis , было показано, что наиболее токсичных среди 4 основных вида Aeromonas , вызывая клинической инфекции. Эти методы представлены быть удобным способом для оценки токсичности между и внутри Aeromonas видов и способствовать нашему пониманию патогенеза Aeromonas инфекции.

Introduction

Клинически доказано человеческий патоген, Aeromonas, причинить гастроэнтерита, раневые инфекции, сепсис и мочевых инфекций^1,2. Ассоциироваться с четырех бактериальных видов были зарегистрированы наиболее ассоциированных заболеваний человека: Aeromonas dhakensis, аэромонадами hydrophila, Aeromonas veroniiи Aeromonas caviae ^{2,3 , 4 , 5}. среди Aeromonas инфекционные заболевания, инфекции мягких тканей может привести к тяжелой заболеваемости и смертности в организме человека. Следует отметить некроз мышц является наиболее тяжелой формой инфекции мягких тканей⁶. Наблюдение за выживание и некроз мышц Caenorhabditis elegans после инфекции является удобным способом спекулировать на токсичность Aeromonas.

Ученые уже разработали многочисленные модели организмов для изучения бактериальных инфекций. В предыдущих исследованиях мышей, zebrafishes и нематод использовались как животных моделей для изучения патогенеза и вирулентности Aeromonas^6,,78. Каждое животное модель имеет свой ‘ преимущества и приложений. Модельный организм, Caenorhabditis elegans, представляет нематода bacterivorous какие потребления бактерий как foodnaturally. C. elegansразработал сложный врожденной иммунной системы против бактериальной инфекции в течение его эволюции. Под напряжение, бактериальной инфекции C. elegans было доказано быть отличным инфекции модель для изучения бактериальных патогенеза Aeromonas^6,7,9 и другие патогены как гриб¹⁰ и инфекции, вызванной энтерогеморрагической кишечной палочки O157: H7¹¹. Однако есть еще не публикации, которая фокусируется на методологии использования C. elegans в качестве модели для изучения вирулентности Aeromonas.

Здесь, мы представляем три различных экспериментов для изучения Aeromonas инфекции с помощью C. elegans как животной модели: анализы для выживания, жидкие токсичности и некроз мышц. Эти методы являются удобным способом для оценки токсичности между и внутри Aeromonas видов и улучшения понимания патогенеза Aeromonas.

Protocol

1. Подготовка питательной среды Примечание: См. таблицу 1 для приготовления раствора. Подготовить M9 средних12, растворяют 1,5 г х2PO4, 5,66 g Na2HPO4и 2,5 г NaCl в 500 мл деионизованной воды. Автоклавированием при температуре 121 ° C в течение 20 минут…

Representative Results

Следуя протоколы, описанные выше, это легко различать токсичность из четырех Aeromonas штаммов. Выживание пробирного C. elegans показан на рисунке 1. C. elegans инфицированных Aeromonas видов, в порядке от высокой к низкой выживаемости были: A. caviae, A. v…

Discussion

C. elegans является bacterivorous нематод, что естественно воздухозаборники бактерий как еда и разработал сложный врожденный иммунитет к бактерии в ходе эволюционного процесса. Два главных органов, техническое обслуживание и поддержание иммунитета являются эпидермиса и кишки⁹…

Materials

Shaker incubator	YIH DER	LM-570R	Bacteria incubation
K2HPO4	J.T.Baker	MP021519455	Culture medium preparation
KH2PO4	J.T.Baker	3246-05	Culture medium preparation
Na2HPO4	J.T.Baker	MP021914405	Culture medium preparation
NaCl	SIGMA	31434	Culture medium preparation
MgSO4	SIGMA	M7506	Culture medium preparation
agar	Difco	214530	Culture medium preparation
CaCl2	SIGMA	C1016	Culture medium preparation
cholesterol	SIGMA	C8503	Culture medium preparation
ethanol	SIGMA	32205	Culture medium preparation
KOH	SIGMA	P5958	Culture medium preparation
6 cm petri plate	ALPHA PLUS	46	agar plate preparation
96-well plate	FALCON	353072	liquid assay
bacterial peptone	Affymetrix/USB	AAJ20048P2	Culture medium preparation
yeast extract	SIGMA	92144	Culture medium preparation
citric acid•H2O	SIGMA	C1909	Culture medium preparation
tri-potassium citrate•H2O	SIGMA	104956	Culture medium preparation
FudR	SIGMA	1271008	Culture medium preparation
disodium EDTA	SIGMA	E1644	Culture medium preparation
FeSO4•7 H2O	SIGMA	215422	Culture medium preparation
MnCl2•4 H2O	SIGMA	221279	Culture medium preparation
ZnSO4•7 H2O	SIGMA	204986	Culture medium preparation
CuSO4•5 H2O	SIGMA	C8027	Culture medium preparation
tryptone	SIGMA	16922	Culture medium preparation
Microscope system	Nikon	Eclipase Ti inverted	microscope imaging
Scientific CCD Camera	QImaging	Retiga-2000R Fast 1394	microscope imaging