Este protocolo descreve o processo de biópsias rectal da sucção do immunomancha para o calretinin, a proteína S100, e o produto do gene da proteína 9,5. Este método diagnóstico adjuvante novo para Hirschsprung ' a doença de s tem taxas preferíveis da sensibilidade e da especificidade.
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Artigo de método
Diagnóstico de doença de Hirschsprung por biopsias de sucção retal imunocoloração para Calretinina, proteína S100 e proteína gene produto 9,5
Neste artigo
Resumo
Resumo
Hirschsprung ' a doença de s (HD) é uma doença intestinal congenital que seja manifestada clìnica como uma inabilidade passar o mecônio nos infantes ou como a constipação a longo prazo nas crianças. A biópsia rectal da sucção (RSB) para determinar a ausência de pilhas do gânglio e a hipertrofia neural é o teste o mais exato para o diagnóstico de HD no presente. A coloração tradicional da hematoxilina-eosina carece de sensibilidade e especificidade. A coloração da acetilcolinesterase não pode ser amplamente utilizada devido ao seu processo complexo. Nosso novo protocolo de imunocoloração para calretinina, proteína S100 e produto de gene de proteína 9,5 (PGP 9.5), que realizamos no RSBs, apresenta altas taxas de sensibilidade e especificidade de 96,49% (intervalo de confiança de 95%, 0,88-0,99) e 100% (95% de confiança intervalo, 0,97-1,00), respectivamente. Os segmentos afetados pela DH frequentemente apresentam-se como ausência da expressão de calretinina, proteína S100 e PGP 9.5, que são marcadores de hipertrofia neural no tecido submucoso. Este protocolo descreve o processo operacional detalhado deste método diagnóstico novo.
Introdução
Hirschsprung ' a doença de s (HD) é uma desordem intestinal congenital comum do intestino caracterizada por uma falta de pilhas do gânglio em segmentos diferentes do intervalo intestinal longe do ponto de origem1. O sistema nervoso entérico humano é formado quando a invasão das células neurais embrionárias é completada. Se há uma perturbação do processo e a invasão não termina, o intestino distal do recém-nascido torna-se aganglionic2. Esta condição potencialmente fatal é chamada de doença de Hirschsprung. Proliferação, motilidade e crescimento intestinal são os três principais componentes da colonização bem-sucedida.
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Protocolo
Este protocolo foi aprovado pelo Conselho de ética em pesquisa do hospital da União da Universidade Huazhong de ciência e tecnologia.
1. biópsia de sucção retal
- Realize a biópsia de sucção retal por um cirurgião pediátrico bem treinado e um assistente usando um sistema de biópsia retal de sucção Rbi2 após obter o consentimento informado do tutor.
- Realizar RSB em pacientes que têm as seguintes indicações: incapacidade de passar o mecônio em lactentes ou inchaço a longo prazo com ou sem constipação em crianças; crianças com constipação a longo prazo que necessitam de óleo de parafina para completar a defecação; obstrução int....
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Resultados
No total, 318 pacientes foram matriculados em nosso estudo. Todos os pacientes foram submetidos a RSB, e os tecidos foram corados para calretinina, S100 e PGP 9,5. O diagnóstico baseado em nosso protocolo novo era HD em 97 casos, non-HD em 213 casos, e em HD suspeitado em 8 casos. Entre os 132 pacientes cirúrgicos, 99 pacientes foram diagnosticados com HD por imunocoloração de espécimes de espessura total após a cirurgia. A coloração de S100 e de PGP 9.5 mostrou que 92% e 93% dos 99 pacie.......
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Discussão
Aqui nós descrevemos um procedimento usando três anticorpos immunohistochemical diferentes para manchar seções de RBS para o diagnóstico de HD. A sensibilidade de nosso protocolo de diagnóstico foi de 96,49% (95% IC, 0,88-0,99), e a especificidade foi de 100% (95% IC, 0,97-1,00).
As etapas as mais críticas do protocolo são RSB e reação do antígeno-anticorpo. O tamanho da biópsia determina a exatidão da coloração. Uma biópsia pequena não fornecerá o suficiente tecido para fazer um diagnóstico p.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Os autores agradecem a Weibing Tang por sua grande ajuda em fornecer o laboratório de filmagem. Este artigo é apoiado pela pesquisa do bem-estar público, e os fundos especiais foram recebidos do planeamento nacional da saúde e da família de China (Grant no. 201402007).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| anticorpo de calretinina | MXB Biotechnologies | MAB-0716 170416405c | anticorpo: anticorpo primário |
| S-100 anticorpo | MXB Biotechnologies | Kit-0007 | anticorpo: anticorpo primário |
| PGP9.5 anticorpo | Shanghai long island Co. Ltd | R-0457-03 | anticorpo: |
| reagente intensificador | MXB Biotechnologies | KIT-9902-A 170416405a | anticorpo: anticorpo secundário A |
| Anticorpo secundário de IgG de cabra / camundongo | MXB Biotechnologies | KIT-9902-B | anticorpo: anticorpo secundário B |
| Kit de coloração DAB (contendo reagente A, B e C) | Kit de coloração | MXB Biotechnologies | DAB-0031 |
| Incubadora de calor | Shanghai yiheng instrument Co. Ltd | DHP-9082 | instrumento |
| Rbi2 biópsia retal de sucção sistema | Aus Systems Pty Ltd, Austrália do Sul, Austrália | CP1200 HP1000 SS1000 | |
| micrótomo | Leica | leica RM2016 | tampão |
| citrato de sódio ácido cítrico (100X) | MXB Biotechnologies | MVS-0101 | tampão de recuperação de antígeno |
| desidratador de tecido patológico | wuhan junjie electronic Co. Ltd | JT-12F | instrumento |
Referências
- Tam, P. K. Hirschsprung's disease: A bridge for science and surgery. Journal of Pediatric Surgery. 51 (1), 18-22 (2016).
- Heanue, T. A., Pachnis, V. Enteric nervous system development and Hirschsprung's disease: advance....
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Reimpressões e permissões
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