Summary

मूंछ सक्रियण के दौरान चूहा बैरल प्रांतस्था में 7 टी में कार्यात्मक चुंबकीय अनुनाद स्पेक्ट्रोस्कोपी

Published: February 08, 2019
doi:

Summary

रक्त ऑक्सीजन स्तर पर निर्भर कार्यात्मक चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (बोल्ड fMRI) द्वारा जांच के बाद कि इसी somatosensory बैरल क्षेत्र प्रांतस्था क्षेत्र (S1BF कहा जाता है) सही ढंग से सक्रिय है, इस अध्ययन के मुख्य लक्ष्य को स्तनपान सामग्री मात्रा में है स्थानीयकृत प्रोटॉन चुंबकीय अनुनाद स्पेक्ट्रोस्कोपी द्वारा सक्रिय चूहे दिमाग में उतार चढ़ाव (1एच श्रीमती) 7 टी में

Abstract

नाभिकीय चुंबकीय अनुनाद (एनएमआर) स्पेक्ट्रोस्कोपी vivo में सेरेब्रल metabolite सामग्री को मापने का अवसर प्रदान करता है और इनवेसिव । पिछले दशक में तकनीकी विकास के लिए धंयवाद और चुंबकीय क्षेत्र की शक्ति में वृद्धि, यह अब संभव है कि vivo में चूहे मस्तिष्क में अच्छा संकल्प स्पेक्ट्रा प्राप्त करने के लिए । Neuroenergetics (यानी, मस्तिष्क चयापचय के अध्ययन) और, विशेष रूप से, विभिंन प्रकार के सेल के बीच चयापचय बातचीत हाल के वर्षों में अधिक से अधिक ब्याज आकर्षित किया है । इन चयापचय बातचीत के बीच, ंयूरॉंस और astrocytes के बीच एक स्तनपान शटल के अस्तित्व अभी भी बहस है । यह है, इस प्रकार, बहुत रुचि के कार्यात्मक प्रोटॉन चुंबकीय अनुनाद स्पेक्ट्रोस्कोपी (1एच-श्रीमती) मस्तिष्क सक्रियकरण और मॉनिटर स्तनपान कराने के एक चूहे मॉडल में प्रदर्शन करने के लिए । हालांकि, मिथाइल स्तनपान पीक लिपिड अनुनाद चोटियों ओवरलैप और यों तो मुश्किल है । नीचे वर्णित प्रोटोकॉल चयापचय और स्तनपान उतार चढ़ाव एक सक्रिय मस्तिष्क क्षेत्र में नजर रखने की अनुमति देता है । मस्तिष्क सक्रियकरण मूंछ उत्तेजना और 1एच द्वारा प्राप्त की है श्रीमती इसी सक्रिय बैरल प्रांतस्था, जिसका क्षेत्र रक्त ऑक्सीजन-स्तर पर निर्भर कार्यात्मक चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (बोल्ड fMRI) का उपयोग कर पता लगाया है में किया जाता है । सभी कदम पूरी तरह से वर्णित हैं: निश्चेतक की पसंद, कुंडल, और दृश्यों, सीधे चुंबक में कुशल मूंछ उत्तेजना प्राप्त करने, और डेटा प्रोसेसिंग ।

Introduction

मस्तिष्क आंतरिक तंत्र है कि अपने प्रमुख सब्सट्रेट (यानी, ग्लूकोज), दोनों अपने योगदान और इसके उपयोग के लिए, स्थानीय मस्तिष्क गतिविधि में बदलाव पर निर्भर करता है के विनियमन की अनुमति के पास । हालांकि ग्लूकोज मस्तिष्क के लिए मुख्य ऊर्जा सब्सट्रेट है, हाल के वर्षों में प्रदर्शन प्रयोगों से पता चला है कि स्तनपान, जो astrocytes द्वारा उत्पादित है, न्यूरॉन्स के लिए एक कुशल ऊर्जा सब्सट्रेट हो सकता है. यह astrocytes और1ंयूरॉंस के बीच एक स्तनपान कराने वाली शटल की परिकल्पना को जंम देती है । ANLS के रूप में जाना जाता है, astrocyte के लिए-ंयूरॉन स्तनपान कराने वाली शटल2, सिद्धांत अभी भी बहुत बहस की है लेकिन प्रस्ताव है कि ग्लूकोज, बजाय सीधे ंयूरॉंस में जाने से, astrocytes, जहां यह स्तनपान में metabolized है, एक metabolite में प्रवेश कर सकते है के नेतृत्व में है , तो, न्यूरॉन्स, जो इसे कुशल ऊर्जा सब्सट्रेट के रूप में उपयोग करने के लिए हस्तांतरित. यदि इस तरह के एक शटल vivo मेंमौजूद है, यह कई महत्वपूर्ण परिणाम होगा, दोनों कार्यात्मक सेरेब्रल इमेजिंग में बुनियादी तकनीकों की समझ के लिए (पोजीट्रान उत्सर्जन टोमोग्राफी [पीईटी]) और मनाया चयापचय परिवर्तन का गूढ़ रूप के लिए मस्तिष्क विकृतियों में ।

मस्तिष्क चयापचय और अध्ययन करने के लिए, विशेष रूप से, न्यूरॉन्स और astrocytes के बीच चयापचय बातचीत, चार मुख्य तकनीक उपलब्ध हैं (नहीं माइक्रो-/nanosensors सहित): autoradiography, पीईटी, दो-फोटॉन फ्लोरोसेंट फोकल माइक्रोस्कोप, और श्रीमती Autoradiography पहले तरीकों में से एक का प्रस्ताव किया गया था और मस्तिष्क के स्लाइस में रेडियोधर्मी 14सी-2-deoxyglucose के क्षेत्रीय संचय की छवियों को प्रदान करता है, जबकि रेडियोधर्मी 18 की क्षेत्रीय ऊपर की vivo छवियों में पीईटी पैदावार F-deoxyglucose । वे दोनों irradiative अणुओं का उपयोग करते हुए कम स्थानिक संकल्प छवियों के उत्पादन का नुकसान है । दो फोटॉन माइक्रोस्कोपी फ्लोरोसेंट जांच के सेलुलर संकल्प प्रदान करता है, लेकिन ऊतक द्वारा प्रकाश बिखरने इमेजिंग गहराई सीमा । इन तीन तकनीकों को मूंछ उत्तेजना3,4,5,6के दौरान कुतर में neuroenergetics अध्ययन करने के लिए पहले इस्तेमाल किया गया है । वीवो में श्रीमती आक्रामक और रेडियोधर्मी होने का दोहरी लाभ है, और किसी भी मस्तिष्क संरचना का पता लगाया जा सकता है । इसके अलावा, श्रीमती ंयूरॉन सक्रियण के दौरान प्रदर्शन किया जा सकता है, एक तकनीक कार्यात्मक श्रीमती (fMRS) है, जो बहुत हाल ही में7कुतर में विकसित किया गया है बुलाया । इसलिए, एक प्रोटोकॉल मस्तिष्क गतिविधि के दौरान की निगरानी करने के लिए 1एच-श्रीमती द्वारा vivo में और गैर इनवेसिव प्रस्तावित है । प्रक्रिया मस्तिष्क सक्रियण के साथ वयस्क स्वस्थ चूहों में वर्णित है एक एयर कश मूंछ से प्राप्त की उत्तेजना एक 7 टी चुंबकीय अनुनाद (MR) imager में सीधे प्रदर्शन किया, लेकिन आनुवंशिक रूप से संशोधित पशुओं में अनुकूलित किया जा सकता है, के रूप में अच्छी तरह के रूप में किसी भी रोग हालत में .

Protocol

सभी पशु प्रक्रियाओं यूरोपीय समुदाय परिषद के निर्देश के पशु प्रयोग के दिशा निर्देशों के अनुसार आयोजित किया गया नवंबर 24, १९८६ (86/609/EEC) । इस प्रोटोकॉल को फ्रांसीसी कृषि और वन मंत्रालय के नैतिक दिशानिर्देशों…

Representative Results

इस प्रोटोकॉल मस्तिष्क सक्रियण, जो सही मूंछ उत्तेजना द्वारा सीधे चुंबक में प्राप्त की है के दौरान metabolite उतार चढ़ाव के ठहराव की अनुमति देता है । इस अध्ययन में, बोल्ड fMRI के…

Discussion

बैरल प्रांतस्था भी somatosensory प्रांतस्था या बैरल क्षेत्र के लिए S1BF कहा जाता है, cortical सी cytochrome9धुंधला का उपयोग कर मनाया जा सकता है कि एक क्षेत्र है, और उसके संगठन अच्छी तरह से वर्णित किया गया है के बाद से यह…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

यह काम LabEx ट्रेल ग्रांट, संदर्भ ANR-10-LABX-५७, और एक फ्रांसीसी-स्विस ANR-FNS अनुदान संदर्भ ANR-15-CE37-0012 द्वारा समर्थित किया गया था । लेखकों Aurélien Trotier अपने तकनीकी समर्थन के लिए धंयवाद ।

Materials

0.5 mL syringe with needle Becton, Dickinson and Company, USA 2020-10 0.33 mm (29 G) x 12.7 mm
1H spectroscopy surface coil Bruker, Ettlingen, Germany T116344
7T Bruker Biospec system Bruker, Ettlingen, Germany 70/20 USR
Arduino Uno based pulsing device custom made
Atipamezole Vétoquinol, S.A., France V8335602 Antisedan, 4.28 mg
Breathing mask custom made
Eye ointment TVM laboratoire, France 40365 Ocry gel 10 g
Induction chamber custom made 30x17x15 cm
Inlet flexible pipe Gardena, Germany 1348-20 4.6-mm diameter, 3m long
Isoflurane pump, Model 100 series vaporizer, classic T3 Surgivet, Harvard Apparatus WWV90TT from OH 43017, U.S.A
Isoflurane, liquid for inhalation Vertflurane, Virbac, France QN01AB06 1000 mg/mL
KD Scientific syringe pump KD sientific, Holliston, USA Legato 110
LCModel software LCModel Inc., Ontario, Canada 6.2
Medetomidine hydrochloride Vétoquinol, S.A., France QN05CM91 Domitor, 1 mg/mL
Micropore roll of adhesive plaster 3M micropore, Minnesota, United States MI912
Micropore roll of adhesive plaster 3M micropore, Minnesota, United States MI925
Monitoring system of physiologic parameter SA Instruments, Inc, Stony Brook, NY, USA Model 1025
NaCl Fresenius Kabi, Germany B05XA03 0.9 % 250 mL
Outlet flexible pipe Gardena, Germany 1348-20 4.6-mm diameter, 4m long
Paravision software Bruker, Ettlingen, Germany 6.0.1
Peripheral intravenous catheter Terumo, Shibuya, Tokyo, Japon SP500930S 22 G x 1", 0.85×25 mm, 35 mL/min
Rat head coil Bruker, Ettlingen, Germany
Sodic heparin, injectable solution Choai, Sanofi, Paris, France B01AB01 5000 IU/mL
Solenoid control valves, plunger valve 2/2 way direct-acting Burkert, Germany 3099939 Model type 6013
Terumo 2 ml syringe Terumo, Shibuya, Tokyo, Japon SY243 with 21 g x 5/8" needle
Terumo 5 mL syringe Terumo, Shibuya, Tokyo, Japon 05SE1
Wistar RJ-Han rats Janvier Laboratories, France

Referências

  1. Pellerin, L., et al. Activity-dependent regulation of energy metabolism by astrocytes: an update. Glia. 55, 1251-1262 (2007).
  2. Pellerin, L., Magistretti, P. J. Glutamate uptake into astrocytes stimulates aerobic glycolysis: a mechanism coupling neuronal activity to glucose utilization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91, 10625-10629 (1994).
  3. Cholet, N., et al. Local injection of antisense oligonucleotides targeted to the glial glutamate transporter GLAST decreases the metabolic response to somatosensory activation. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 21, 404-412 (2001).
  4. Voutsinos-Porche, B., et al. Glial Glutamate Transporters Mediate a Functional Metabolic Crosstalk between Neurons and Astrocytes in the Mouse Developing Cortex. Neuron. 37, 275-286 (2003).
  5. Zimmer, E. R., et al. [18F]FDG PET signal is driven by astroglial glutamate transport. Nature Neuroscience. 20 (3), 393-395 (2017).
  6. Haiss, F., et al. Improved in vivo two-photon imaging after blood replacement by perfluorocarbon. The Journal of Physiology. , (2009).
  7. Mullins, P. G. Towards a theory of functional magnetic resonance spectroscopy (fMRS): A meta-analysis and discussion of using MRS to measure changes in neurotransmitters in real time. Scandinvian Journal of Psychology. 59, 91-103 (2018).
  8. Wong-Riley, M. T., Welt, C. Histochemical changes in cytochrome oxidase of cortical barrels after vibrissal removal in neonatal and adult mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 77, 2333-2337 (1980).
  9. Petersen, C. C. The functional organization of the barrel cortex. Neuron. 56, 339-355 (2007).
  10. Cox, S. B., Woolsey, T. A., Rovainen, C. M. Localized dynamic changes in cortical blood flow with whisker stimulation corresponds to matched vascular and neuronal architecture of rat barrels. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 13, 899-913 (1993).
  11. Feldmeyer, D. Excitatory neuronal connectivity in the barrel cortex. Frontiers in Neuroanatomy. 6, 24 (2012).
  12. Boussida, S., Traore, A. S., Durif, F. Mapping of the brain hemodynamic responses to sensorimotor stimulation in a rodent model: A BOLD fMRI study. PLoS One. 12, e0176512 (2017).
  13. Heinke, W., Koelsch, S. The effects of anesthetics on brain activity and cognitive function. Current Opinion in Anesthesiology. 18, 625-631 (2005).
  14. Horn, T., Klein, J. Lactate levels in the brain are elevated upon exposure to volatile anesthetics: a microdialysis study. Neurochemistry International. 57, 940-947 (2010).
  15. Boretius, S., et al. Halogenated volatile anesthetics alter brain metabolism as revealed by proton magnetic resonance spectroscopy of mice in vivo. Neuroimage. 69, 244-255 (2013).
  16. Sinclair, M. D. A review of the physiological effects of alpha2-agonists related to the clinical use of medetomidine in small animal practice. Canadian Veterinary Journal. 44, 885-897 (2003).
  17. Weber, R., et al. A fully noninvasive and robust experimental protocol for longitudinal fMRI studies in the rat. Neuroimage. 29, 1303-1310 (2006).
  18. Hartmann, M. J., Johnson, N. J., Towal, R. B., Assad, C. Mechanical characteristics of rat vibrissae: resonant frequencies and damping in isolated whiskers and in the awake behaving animal. The Journal of Neuroscience. 23, 6510-6519 (2003).
  19. Prichard, J., et al. Lactate rise detected by 1H NMR in human visual cortex during physiologic stimulation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 88, 5829-5831 (1991).
  20. Sappey-Marinier, D., et al. Effect of photic stimulation on human visual cortex lactate and phosphates using 1H and 31P magnetic resonance spectroscopy. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 12, 584-592 (1992).
  21. Mazuel, L., et al. A neuronal MCT2 knockdown in the rat somatosensory cortex reduces both the NMR lactate signal and the BOLD response during whisker stimulation. PLoS One. 12, e0174990 (2017).
  22. Castellano, G., et al. NAA and NAAG variation in neuronal activation during visual stimulation. Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 45, 1031-1036 (2012).
  23. Sarchielli, P., et al. Functional 1H-MRS findings in migraine patients with and without aura assessed interictally. Neuroimage. 24, 1025-1031 (2005).
  24. Baslow, M. H., Hrabe, J., Guilfoyle, D. N. Dynamic relationship between neurostimulation and N-acetylaspartate metabolism in the human visual cortex: evidence that NAA functions as a molecular water pump during visual stimulation. Journal of Molecular Neuroscience. 32, 235-245 (2007).
  25. Mangia, S., Tkac, I. Dynamic relationship between neurostimulation and N-acetylaspartate metabolism in the human visual cortex: evidence that NAA functions as a molecular water pump during visual stimulation. Journal of Molecular Neuroscience. 35, 245-248 (2008).
  26. Baslow, M. H., Hrabal, R., Guilfoyle, D. N. Response of the authors to the Letter by Silvia Mangia and Ivan Tkac. Journal of Molecular Neuroscience. 35, 247-248 (2008).
  27. Barros, L. F., Weber, B. CrossTalk proposal: an important astrocyte-to-neuron lactate shuttle couples neuronal activity to glucose utilisation in the brain. The Journal of Physiology. 596, 347-350 (2018).
  28. Bak, L. K., Walls, A. B. CrossTalk opposing view: lack of evidence supporting an astrocyte-to-neuron lactate shuttle coupling neuronal activity to glucose utilisation in the brain. The Journal of Physiology. 596, 351-353 (2018).
check_url/pt/58912?article_type=t

Play Video

Citar este artigo
Blanc, J., Roumes, H., Mazuel, L., Massot, P., Raffard, G., Biran, M., Bouzier-Sore, A. Functional Magnetic Resonance Spectroscopy at 7 T in the Rat Barrel Cortex During Whisker Activation. J. Vis. Exp. (144), e58912, doi:10.3791/58912 (2019).

View Video