ブレオマイシンの気管内注射によるマウス肺損傷の誘導
Summary
ここでは、C57BLにおけるブレオマイシンの気管内注射による肺損傷の誘導後に臍帯全体から得られた静脈内注入ヒト間葉間質間質細胞の抗線維活性を調べるための有効な方法を提示する。/6マウス。このプロトコルは、他の治療薬の前臨床試験に容易に拡張することができる。
Abstract
肺線維症は、異なる病因を持ついくつかのヒト肺疾患の特徴である。現在の治療法はかなり限られているので、マウスモデルは新しい抗線維性戦略を開発するために不可欠なツールであり続けています。ここでは、ブレオマイシン誘発性肺損傷の減衰において臍帯全体(hUC-MSC)から得られたヒト間葉間質間質細胞の生体内抗線維化活性を調べるための有効な方法を提供する。C57BL/6マウスは、ブレオマイシン(1.5U/kg体重)の単一の気管注射を受け、続いて、末静脈にhUC-MSC(2.5 x10 5)を二重注入し、ブレオマイシン投与後24時間および7日後に投与した。8日目、14日目、または21日目に犠牲を起こすと、炎症性および線維性変化、コラーゲン含有量、および移植された肺組織におけるhUC-MSCの存在が分析される。マウス気管へのブレオマイシンの注入は、肺の直接的な標的化を可能にし、広範な肺炎症および線維症を引き起こす。hUC-MSCの二重用量の全身投与は、ブレオマイシン誘発性肺損傷の早期鈍化をもたらす。静脈内注入されたhUC-MSCは、マウス肺に一時的に生着し、そこで抗炎症および抗線維芽生活性を発揮する。結論として、このプロトコルは、ヒト肺線維症の実験マウスモデルにおけるhUC-MSCの前臨床試験に正常に適用された。しかし、この技術は、肺の病態生理学に対する異なる気管内投与物質の効果を研究し、新しい抗炎症および抗線維性全身療法を検証するために、両方とも容易に拡張することができる。
Introduction
肺線維症は、細胞外マトリックス成分の過剰な沈着を特徴とする進行性病理学的プロセスであり、主にI型コラーゲン、肺間質において、肺機能障害を引き起こしうる。これは、異なる病因を持ついくつかのヒト肺疾患の特徴であり、貧弱な臨床予後因子を表す。現在の治療法はかなり限られているので、マウスモデルは、疾患の発症と進行に影響を与える病原性メカニズムのさらなる調査と新しい抗線維性の開発の両方に不可欠なツールであり続ける戦略2,3.
今日まで、ブレオマイシンの投与は、実験的に誘発された肺線維症4の最も一般的に適用されたモデルであった。複数の送達方法(静脈内、皮内、皮下、および吸入を含む)のほかに、ブレオマイシンの気管内注射または気管内注射は、最も頻繁に使用される経路4、5として出現している。我々がここで説明する方法は、気管粘膜に対するブレオマイシンのスケーリング効果を回避するために開発された。実際には、気管を外装し、作動顕微鏡を介して可視化することにより、上気道にこぼれることなく、ブレオマイシン溶液の全容積を直接下部気道に注入することが可能です。必要な外科的専門知識および器械使用が利用できる場合、この方法は以下に報告される肺の炎症および線維症の安全で、強く、再生可能な誘導を可能にする。
Protocol
Representative Results
Discussion
気管内投与は、外因性薬剤を肺に送り込む優遇経路である。数年以来、気管へのブレオマイシンの直接注入は、肺線維症13を誘導するために広く使用され、最近では、より高度な、非侵襲的な技術は、この14、15を達成するために開発されています 、16.
ここで説明する方法は、いくつ…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この仕事は、大臣イタリアン・デッラ・サルーテ(アルマンド・ガブリエリへの)からの助成金RF-2011-02352331によってサポートされました。
Materials
| C57BL/6 mice | Charles River | Jax Mice Stock n. 000664 | |
| 2,2,2-Tribromoethanol (Avertin) | Sigma-Aldrich | T48402 | |
| Barraquer Micro Needle Holder | Lawton | 62-3755 | |
| Bleomycin sulfate | Sigma-Aldrich | B1141000 | |
| Bürker chamber | Brand | 718905 | |
| Culture Flasks | EuroClone | ET7076 | |
| Disposable razors | Unigloves | 4080 | |
| Dissecting Forceps | Aesculap Surgical Instruments | BD311R | |
| DPBS | Gibco | 14190-144 | |
| Heating pad | 2Biological Instruments | 557023 | |
| Isoflurane Vet | Merial Italia | N01AB06 | |
| Operating Microscope | Carl Zeiss | Model OPM 16 | |
| TrypLE Select Enzyme | Gibco | 12563-029 | |
| Vannas Micro Scissors | Aesculap Surgical Instruments | OC498R | |
| Vicryl Plus 4/0 Absorbable Suture, FS-2 needle 19 mm | Ethicon | VCP392ZH |
Referências
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