मानव सीरम विरोधी aquaporin-सेल द्वारा 4 Immunoglobulin जी पता लगाने आधारित परख
Summary
सेल आधारित परख एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया विधि सीरम विरोधी का पता लगाने के लिए है aquaporin-4 इम्युनस्टोबुलिन जी । इस विधि नैदानिक निदान और neuromyelitis ऑप्टिकल स्पेक्ट्रम विकारों के वैज्ञानिक शोध करने के लिए लागू किया जा सकता है ।
Abstract
एंटी-एक्पोराइन-4 (AQP4) इम्युनोग्ब्युलिन जी (IgG) न्यूरोमाइलाइटिस ऑप्टिका स्पेक्ट्रम विकारों (NMOSD) के लिए कोर डायग्नोस्टिक बायोमरकर है । सेल आधारित परख (CBA) एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया विधि उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता के साथ मानव सीरम में विरोधी AQP4 IgG का पता लगाने के लिए है । संक्षेप में, सीरम विरोधी AQP4 IgG AQP4 द्वारा कब्जा कर लिया है-transfected कोशिका है कि biochip पर तय की है तो एक fluorescein-लेबल माध्यमिक एंटीबॉडी द्वारा पता लगाया । प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग प्रतिदीप्ति की कल्पना करने के लिए किया जाता है, और प्रतिदीप्ति की तीव्रता का मूल्यांकन कम से दो अनुभवी चिकित्सकों द्वारा होता है । NMOSD का एक अंतिम निदान विरोधी के संयोजन के आधार पर बनाया जा सकता है-AQP4 IgG का पता लगाने के परिणाम, नैदानिक अभिव्यक्तियाँ, और neuroradiological निष्कर्षों. पिछले अध्ययनों के अनुसार, CBA अधिक संवेदनशील और अंय विरोधी AQP4 IgG पता लगाने के तरीकों की तुलना में विशिष्ट है, और यह दोनों नैदानिक निदान और NMOSD के अध्ययन के लिए लागू किया जा सकता है । विधि की सीमाएं हैं; उदाहरण के लिए, एक अंतरराष्ट्रीय पैमाने पर सीरम विरोधी AQP4 IgG titers का मूल्यांकन करने के लिए अभी भी कमी है । यहां, मानव सीरम विरोधी के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल-AQP4 IgG जांच CBA का उपयोग कर वर्णित है ।
Introduction
सीरम AQP4 igg न्यूरोमाइलाइटिस optica स्पेक्ट्रम विकारों (nmosd)1के लिए एक कोर नैदानिक बायोमार्कर है । सेल आधारित परख (CBA) एक व्यापक रूप से इस्तेमाल विरोधी उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता के साथ AQP4 IgG खोज विधि है । यहां, CBA के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल पेश किया है ।
AQP4, एक पानी चैनल प्रोटीन, छह झिल्ली-फैले इकाइयों और दो कुंडलिनी एक जलीय पोरे2आसपास के डोमेन है । Anti-AQP4 IgG अपने लक्ष्य AQP4 है, जो मुख्य रूप से3astrocytes के endfeet पर स्थित है के लिए बाध्यकारी के माध्यम से NMOSD के रोगजनन में शामिल है । यह दिखाया गया है कि विरोधी AQP4 IgG NMOSD रोगियों के लगभग दो तिहाई में सकारात्मक है4. Nmosd के लिए सबसे हाल ही में अंतरराष्ट्रीय नैदानिक मानदंडों में, विरोधी AQP4 igg एक कोर नैदानिक बायोमार्कर5माना जाता है. इस संबंध में, यह मानव सीरम विरोधी AQP4 IgG का पता लगाने और NMOSD के नैदानिक निदान की सुविधा के लिए एक विश्वसनीय प्रोटोकॉल स्थापित करने के लिए महत्वपूर्ण है ।
वर्तमान में, विभिंन विरोधी AQP4 igg का पता लगाने के तरीकों ऐसे cba, ऊतक के रूप में उपलब्ध हैं, परख आधारित, एंजाइम से जुड़े immunosorbent परख, और प्रवाह cytometry6,7। CBA EU90 कोशिकाओं को रोजगार, जो मानव AQP4 के साथ transfected हैं, विरोधी AQP4 IgG कब्जा करने के लिए । कब्जा कर लिया anti-AQP4 igg प्रतिदीप्त माध्यमिक एंटीबॉडी द्वारा पता लगाया है और बाद में माइक्रोस्कोपी द्वारा कल्पना । सबूत जमा पता चला है कि cba और अधिक संवेदनशील है और अंय विरोधी से विशिष्ट AQP4 igg जांच विधियों6,7। एक मेटा-विश्लेषण के अनुसार, CBA की संवेदनशीलता और विशिष्टता को ७६% और ९९% दर्शाया गया था, जो ऊतक आधारित और एंजाइम से जुड़े इम्योनोसोरंट असेस6से अधिक थे । इसके अलावा, एंटी-AQP4 IgG के नैदानिक assays की एक मल्टीसेंटर तुलना7आयोजित किया गया था । 15 यूरोपीय नैदानिक केंद्रों से कुल १९३ अध्ययन विषयों में से7दाखिल किए गए । चार विभिंन तरीकों सीरम विरोधी का पता लगाने के लिए उपयोग किया गया AQP4 IgG7। यह प्रदर्शन किया गया था कि CBA और अधिक संवेदनशील और अंय विधियों7से विशिष्ट था । AQP4 के रूप में दो प्रमुख isoforms (AQP4-M1 और AQP4-M23) के रूप में व्यक्त की है, विरोधी AQP4 IgG कैप्चर सेल या तो AQP4-M1 या AQP4-M23 के साथ transfected है । हालांकि, कब्जा सेल के किस प्रकार के बेहतर है विवादास्पद रहता है । एक जांच AQP4-M1 आधारित cba8का समर्थन किया है, जबकि अंय संकेत दिया है कि AQP4-M23 आधारित cba बेहतर है7,9,10। हालांकि, AQP4-M23-आधारित CBA गलत सकारात्मक परिणाम अविशिष्ट IgG बाइंडिंग8के कारण उपज सकता है । जरीअस एट अल. 11 ने बताया कि AQP4-M1 और AQP4-M23-आधारित cbas के बीच एंटी-AQP4 igg डिटेक्शन दरों में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था ।
सारांश में, सीरम विरोधी AQP4 igg nmosd के लिए एक कोर बायोमार्कर है. CBA उच्च विशिष्टता और अंय विरोधी AQP4 IgG पता लगाने के तरीकों की तुलना में संवेदनशीलता है । यह विवादास्पद रहता है कि AQP4-M1-या AQP4-M23-आधारित CBA बेहतर है । इस आलेख में, AQP4-M1-आधारित CBA के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल वर्णित है, जो नैदानिक निदान और NMOSD के अध्ययनों पर लागू कर सकते हैं ।
Protocol
Representative Results
Discussion
हम मानव सीरम में विरोधी AQP4 IgG का पता लगाने के लिए एक व्यापक रूप से सुलभ विधि का वर्णन किया है । Anti-AQP4 IgG बारीकी से NMOSD से संबंधित है, और एक विश्वसनीय विरोधी AQP4 IgG डिटेक्शन विधि की स्थापना NMOSD के नैदानिक निदान के लिए ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक चीन के राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (no. ३१६००८२०), जिलइन प्रांत के स्वास्थ्य और परिवार नियोजन आयोग (no. 2016Q036) से अनुदान से सहायता के लिए आभारी हैं, और जिलइन प्रांत के विज्ञान और प्रौद्योगिकी योजना परियोजना (सं. 20180520110JH) ।
Materials
| Anti-aquaporin-4 IIFT | Euroimmun | FA 1128-2005-50 | Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. |
| CellSens Dimension | OLYMPUS | N/A | photograph software |
| Gel & clot activator tube | Improve medical | 623040202 | From a local Chinese company |
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