세포 기반 분석 결과 의해 인간의 혈 청 안티-aquaporin-4 면역 글로불린 G 검출

Summary

세포 기반 분석 결과 세럼 안티-aquaporin-4 면역 글로불린 g.를 검출 하기 위하여 널리 사용 방법은 이 메서드는 임상 진단 및 neuromyelitis 광학 스펙트럼 장애의 과학적 연구에 적용할 수 있습니다.

Abstract

안티-aquaporin-4 (AQP4) 면역 글로불린 G (IgG) neuromyelitis optica 스펙트럼 장애 (NMOSD)에 대 한 핵심 진단 바이오 마커 이다. 세포 기반 분석 결과 (CBA) 높은 감도와 특이성 인간 혈 청에 안티 AQP4 IgG를 감지 하는 널리 사용 되는 방법 이다. 간단히, 세럼 안티 AQP4 IgG AQP4 페 셀은 바이오 칩에 고정 후 fluorescein 붙인 이차 항 체에 의해 감지에 의해 캡처됩니다. 형광 현미경 검사 법은 형광, 시각화를 활용 하 고 형광의 강도 두 개 이상의 경험이 풍부한 임상에서 평가. NMOSD의 최종 진단 안티 AQP4 IgG 검출 결과, 임상 발현 및 neuroradiological 발견의 조합에 따라 만들 수 있습니다. 이전 연구에 따르면 CBA는 더 과민 하 고 특정 다른 안티 AQP4 IgG 탐지 방법 보다 그리고 임상 진단 및 NMOSD의 연구에 적용할 수 있습니다. 메서드는 제한; 예를 들어 세럼 안티 AQP4 IgG titers를 평가 하는 국제 규모는 여전히 부족 합니다. 여기, 인간 혈 청 안티 AQP4 IgG 감지 CBA를 사용 하 여 상세한 프로토콜을 설명 합니다.

Introduction

혈 청 AQP4 IgG neuromyelitis optica 스펙트럼 장애 (NMOSD)¹코어 진단 바이오 마커 이다. 세포 기반 분석 결과 (CBA)은 높은 감도와 특이성 널리 안티-AQP4 IgG 감지 방법입니다. 여기, CBA에 대 한 상세한 프로토콜 소개 된다.

AQP4, 물 채널 단백질 막에 걸친 6 단위 있으며 수성 하나를 둘러싼 두 개의 헬리컬 도메인²기 공. 안티 AQP4 IgG를 대상 주로 이다³의 endfeet에 있는 AQP4 바인딩을 통해 NMOSD의 병 인에서 포함 된다. 그것은 안티-AQP4 IgG는 긍정적인 NMOSD 환자⁴의 약 2/3에 표시 되었습니다. NMOSD에 대 한 가장 최근의 국제 진단 기준, 안티-AQP4 IgG 코어 진단 바이오 마커⁵간주 됩니다. 이와 관련, 그것은 인간의 혈 청을 감지 하는 신뢰할 수 있는 프로토콜을 설정 하는 중요 한 안티-AQP4 IgG NMOSD의 임상 진단을 용이 하 게 하 고.

현재, 다양 한 안티-AQP4 IgG 탐지 방법 CBA, 조직 기반 분석 결과, 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과, 흐름 cytometry^6,7등 사용할 수 있습니다. CBA 안티 AQP4 IgG를 잡으려고 인간의 AQP4와 페 EU90 셀을 사용 합니다. 캡처된 안티-AQP4 IgG 형광 이차 항 체에 의해 감지 하 고 이후에 현미경 검사 법에 의해 시각. 증거를 축적 하는 것은 CBA는 더 과민 하 고 다른 안티 AQP4 IgG 감지 방법^6,7보다 구체적인 것을 보이고 있다. 메타 분석에 따르면 민감도 특이성 CBA의 76%와 99%, 조직 기반 보다 높은 표시 했다 하 고 효소 연결 된 immunosorbent 분석 실험⁶. 또한, 안티 AQP4 IgG의 진단 분석 실험의 되 비교가 했다 실시⁷. 15 유럽 진단 센터에서 과목은 193 연구 총 등록⁷. 4 가지 방법은 세럼 안티 AQP4 IgG⁷검색을 활용 했다. 그것은 CBA는 더 과민 하 고 특정 다른 방법⁷보다 시연 했다. AQP4 (AQP4-m 1과 AQP4-M23) 두 주요 isoforms로 표현 이다, 안티-AQP4 IgG 캡처 셀 AQP4 M1 또는 AQP4-M23 페입니다. 그러나, 어떤 유형의 캡처 셀 더 남아 논란입니다. 한 조사는 AQP4-M1 기반의 지원 CBA⁸, 다른 AQP4-M23 CBA를 기반으로 표명 하는 동안은 더 나은^7,,910. 그러나, AQP4-M23 기반 CBA 난다 IgG 바인딩⁸거짓 긍정적인 결과 얻을 수 있습니다. Jarius 외입니다. ¹¹ AQP4-m 1와 AQP4-M23 기반 CBAs 안티 AQP4 IgG 검출 률에 큰 차이 보도 했다.

요약, 세럼 안티-AQP4에 IgG는 NMOSD에 대 한 핵심 바이오 마커. CBA는 높은 특이성 및 다른 안티 AQP4 IgG 탐지 방법 보다 감도 있습니다. AQP4-M1-또는 AQP4-M23-CBA는 더 나은 여부 논란이 남아 있다. 이 문서에서는, CBA AQP4-M1-기반에 대 한 상세한 프로토콜 설명, 임상 진단 및 NMOSD의 연구에 적용할 수 있는 합니다.

Protocol

이 절차의 첫 번째 병원 길 림 대학 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 고 약 1500 과목에서 수행 되었다. 1. 환자 등록 및 혈액 샘플 컬렉션 아래 열거 된 수석 불만과 증상 병원 환자에 게 안티 AQP4 IgG 혈 청의 실험실 탐지를 적용 합니다. 또한 검 진을 수행 합니다.광학 신경 염: 환자 시각 필드의 손실 및 시력의 감소와 같은 시각적인 적자와 고통을.급성 척 수염: …

Representative Results

여기에 설명 된 절차를 사용 하 여, 혈 청 igg가 특정 안티-AQP4 감지입니다. 절차 동안, 미리 희석된 샘플, 긍정적인 통제 및 부정적인 제어 transfected untransfected 영역 (그림 2)를 포함 하는 반응 필드에 추가 되었습니다. Transfected 지역에 부정적인 컨트롤의 형광은 주로 봄에는 (그림 3)에 transfected 세포에 이차 항 체의 불특정 바인딩 …

Discussion

우리는 안티-AQP4 IgG 인간의 혈 청에서 검출 하는 광범위 하 게 액세스할 수 방법을 설명 했습니다. 안티 AQP4 IgG는 밀접 하 게 관련이 NMOSD, 그리고 신뢰할 수 있는 안티-AQP4 IgG 탐지 방법을 구축 하는 것는 NMOSD의 임상 진단에 대 한 중요 한. 첫째, 안티-AQP4 IgG NMOSD에 대 한 특정 이다. 다 발성 경화 증 또한 중앙 신경의 면역 중재 하는 질병 이며, NMOSD¹²와 많은 유사점을 공유. 그러나, ?…

Materials

Anti-aquaporin-4 IIFT	Euroimmun	FA 1128-2005-50	Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium.
CellSens Dimension	OLYMPUS	N/A	photograph software
Gel & clot activator tube	Improve medical	623040202	From a local Chinese company