Cell-baserad analys är en allmänt använd metod för att upptäcka serum anti-akvaporin-4 immunglobulin G. Denna metod skulle kunna tillämpas på klinisk diagnos och vetenskapliga undersökningar av neuromyelitis optiska spektrum störningar.
Anti-akvaporin-4 (AQP4) immunglobulin G (IgG) är den kärna diagnostisk biomarkören för neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). Cell-baserad analysen (CBA) är en allmänt använd metod för att upptäcka anti-AQP4 IgG i humant serum med hög känslighet och specificitet. Kort, serum IgG anti-AQP4 fångas av AQP4-transfekterade cell som är fast på biochip sedan upptäcks av en fluorescein-märkt sekundär antikropp. Fluorescensmikroskopi används för att visualisera fluorescensen och intensiteten av fluorescens bedöms av minst två erfarna kliniker. En slutlig diagnos av NMOSD kan göras utifrån kombinationen av anti-AQP4 IgG upptäckt resultat, kliniska manifestationer och neuroradiological fynd. Enligt tidigare studier, CBA är mer känslig och specifik än andra anti-AQP4 metoder för detektion av IgG, och det kan tillämpas på både klinisk diagnos och studier av NMOSD. Metoden har begränsningar; exempelvis saknas fortfarande internationellt att utvärdera serum anti-AQP4 IgG-titrar. Här beskrivs ett detaljerat protokoll för humant serum anti-AQP4 IgG detektering med CBA.
Serum AQP4 IgG är en core diagnostisk biomarkör för neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD)1. Cell-baserad analysen (CBA) är en allmänt använd anti-AQP4 IgG detektionsmetod med hög känslighet och specificitet. Här, introduceras ett detaljerat protokoll för CBA.
AQP4, ett vatten kanal protein, har sex membran-spänner enheter och två spiralformade domäner kring en vattenlösning pore2. Anti-AQP4 IgG är involverade i patogenesen av NMOSD genom bindning till sitt mål AQP4, som ligger främst på endfeet av astrocyter3. Det har visat att anti-AQP4 IgG är positivt i ungefär två tredjedelar av NMOSD patienter4. I de senaste internationella diagnostiska kriterierna för NMOSD anses anti-AQP4 IgG vara en core diagnostisk biomarkör5. I detta sammanhang är det viktigt att upprätta ett pålitligt protokoll för att upptäcka humant serum IgG anti-AQP4 och underlätta klinisk diagnos av NMOSD.
Olika metoder för detektion av anti-AQP4 IgG för närvarande tillgängliga, såsom CBA, tissue-baserade assay, enzymkopplad immunadsorberande analys och flöde flödescytometri6,7. CBA sysselsätter EU90 celler, som är transfekterade med mänskliga AQP4, att fånga anti-AQP4 IgG. Fångade anti-AQP4 IgG upptäcks av fluorescerande sekundära antikroppar och därefter visualiseras av mikroskopi. Ackumulerande bevis har visat att CBA är mer känsliga och specifika än andra anti-AQP4 IgG upptäckt metoder6,7. Enligt en meta-analys, sensitivitet och specificitet av CBA visade sig vara 76% och 99%, vilket var högre än tissue-baserade och glykoproteinenzymkopplad immunadsorberande analyser6. Dessutom var en multicenter jämförelse av diagnostiska analyser av anti-AQP4 IgG bedrivs7. Totalt 193 studien ämnen från 15 europeiska diagnostiska centra var inskrivna7. Fyra olika metoder utnyttjades för att upptäcka serum anti-AQP4 IgG7. Det visades att CBA var mer känsliga och specifika än andra metoder7. Som AQP4 uttrycks som två viktigaste isoformerna (AQP4-M1 och AQP4-M23), är anti-AQP4 IgG fånga cell transfekterade med antingen AQP4-M1 eller AQP4-M23. Vilken typ av fånga cell är dock bättre förblir kontroversiell. En utredning har stött AQP4-M1 baserat CBA8, medan andra har visat att AQP4-M23 baserat CBA är bättre7,9,10. AQP4-M23-baserade CBA kan dock ge falskt positiva resultat på grund av ospecifika IgG bindande8. Jarius et al. 11 rapporterade att det fanns ingen signifikant skillnad i anti-AQP4 IgG upptäcktstakt mellan AQP4-M1 och AQP4-M23-baserade SFA.
I Sammanfattning, serum anti-AQP4 IgG är en core biomarkör för NMOSD. CBA har högre specificitet och känslighet än andra anti-AQP4 metoder för detektion av IgG. Det fortfarande kontroversiellt huruvida AQP4-M1 – eller AQP4-M23-baserade CBA är bättre. I den här artikeln beskrivs ett detaljerat protokoll för AQP4-M1-baserade CBA, som kan gälla klinisk diagnos och studier av NMOSD.
Vi har beskrivit en lättillgänglig metod för att upptäcka anti-AQP4 IgG i humant serum. Anti-AQP4 IgG är nära besläktad med NMOSD, och att upprätta en pålitlig anti-AQP4 metod för detektion av IgG är avgörande för klinisk diagnos av NMOSD. Första är anti-AQP4 IgG specifika för NMOSD. Multipel skleros är också en immunmedierad sjukdom i centrala nervsystemet och delar många likheter med NMOSD12. Anti-AQP4 IgG är dock bara positivt i NMOSD13. Andra är ant…
The authors have nothing to disclose.
Författarna är tacksam för stödet från bidrag från National Science Foundation Kina (nr. 31600820), The hälsa och familjeplanering kommissionen i Jilin-provinsen (nr 2016Q036), och The Science och teknik planering projektet i Jilin-provinsen (nr. 20180520110JH).
Anti-aquaporin-4 IIFT | Euroimmun | FA 1128-2005-50 | Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. |
CellSens Dimension | OLYMPUS | N/A | photograph software |
Gel & clot activator tube | Improve medical | 623040202 | From a local Chinese company |