Modelo de Mouse de dois vasos oclusão de isquémia-reperfusão Cerebral
Summary
Para investigar a fisiopatologia do AVC, é criado um modelo do rato de isquémia-reperfusão cerebral. Nós distalmente ligate da artéria cerebral média direita e artéria carótida comum direita e restaurar o fluxo sanguíneo após 10 ou 40 min de isquemia.
Abstract
Neste estudo, um modelo de mouse de oclusão de artéria cerebral média (MCA) é empregado para estudar a isquémia-reperfusão cerebral. Um modelo do rato reprodutível e confiável é útil para investigar a fisiopatologia da isquémia-reperfusão cerebral e determinar potenciais estratégias terapêuticas para pacientes com acidente vascular cerebral. Variações na anatomia do círculo de Willis de C57BL/6 ratos afeta seu volume de infarto após lesão cerebral induzida a isquemia. Estudos têm indicado que oclusão distal do MCA (MCAO) pode superar esse problema e resultar em um tamanho de infarto estável. Neste estudo, podemos estabelecer um modelo de mouse de dois vasos oclusão de isquémia-reperfusão cerebral através da interrupção do fluxo sanguíneo para o MCA certo. Nós distalmente ligate a MCA direita e artéria carótida comum direita (CCA) e restaurar o fluxo sanguíneo após um determinado período de isquemia. Esta lesão de isquemia-reperfusão induz um infarto de tamanho estável e um déficit comportamental. Células imunitárias periféricas infiltrar o cérebro isquêmico no prazo de 24 h infiltração. Além disso, a perda neuronal na área cortical é menor por um longo período de reperfusão. Portanto, este modelo de dois vasos oclusão é apropriado para investigar a resposta imune e recuperação neuronal durante o período de reperfusão após isquemia cerebral.
Introduction
O modelo do rato de isquémia-reperfusão cerebral é uma das abordagens experimentais mais amplamente utilizadas para investigar a fisiopatologia da induzida por isquemia cerebral lesão1. Porque isquémia-reperfusão cerebral ativa o sistema imunológico periférico, células imunitárias periféricas infiltrarem no cérebro isquêmico e causam dano neuronal2. Assim, um modelo de mouse confiável e reprodutível que imita a isquémia-reperfusão cerebral é necessário para compreender a fisiopatologia do acidente vascular cerebral.
C57Bl/6J (B6) ratos são a estirpe mais comumente usada em experimentos de curso porque eles facilmente podem ser manipulados geneticamente. Estão disponíveis dois modelos comuns de MCAO/reperfusão que imitam a condição de isquémia-reperfusão cerebral. O primeiro é o modelo do filamento intraluminal de MCAO proximal, onde um filamento de silício-revestido é empregado para por via intravascular, obstruir o fluxo de sangue na MCA; o filamento de oclusão posteriormente é removido para restaurar o fluxo de sangue3. Uma duração curta de oclusão resulta em uma lesão da região subcortical, Considerando que uma maior duração da oclusão provoca infartos nas áreas corticais e subcorticais. O segundo modelo é o modelo de ligadura de MCAO distal, que envolve a ligadura extravascular do MCA e CCA para reduzir o fluxo de sangue através da MCA, após o qual o fluxo sanguíneo é restaurado através da remoção da sutura e aneurisma clip4. Neste modelo, um infarto é causado nas áreas corticais e a taxa de mortalidade é baixa. Porque a ligadura do modelo MCAO/reperfusão requer craniectomia para expor o site do MCA distal, o site pode ser facilmente confirmado, e analisar se o fluxo de sangue na MCA distal é rompido durante o procedimento é simples.
B6 ratos apresentam consideráveis variações na anatomia de seu círculo de Willis; Isto pode afetar o volume de infarto cerebral de isquémia-reperfusão5,6,7a seguir. Atualmente, este problema pode ser superado através da ligadura do distal MCA8. Neste estudo, podemos estabelecer um método para obstruindo o fluxo sanguíneo do MCA e permitindo a reperfusão após um período pré-determinado de isquemia. Dois vasos de oclusão do modelo de isquémia-reperfusão cerebral induz isquemia transitória do território MCA através da ligadura do MCA bem distal e certo CCA, com fluxo de sangue restaurado após um determinado período de isquemia. Este modelo MCAO/reperfusão induz um infarto de tamanho estável, uma massa de células do sistema imunológico cérebro infiltrando no cérebro isquêmico e um déficit comportamental após isquémia-reperfusão cerebral4.
Protocol
Representative Results
Discussion
O modelo de rato MCAO/reperfusão é um modelo animal, comumente empregado para imitar a isquemia transitória em seres humanos. Este modelo animal pode ser aplicado para as cepas de camundongos transgênicos e nocaute para investigar a fisiopatologia do acidente vascular cerebral. Várias etapas do protocolo são especialmente críticas. (1) o microdrill deve ser usado com cuidado quando criando um buraco no crânio, com ação inadequada facilmente causando sangramento do MCA. (2) o MCA não deve ser danificado, e sang…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado pelo Ministério da ciência e tecnologia, Taiwan (mais 106-2320-B-038-024, 105-2221-E-038-007-MY3 mais e mais 104-2320-B-424-001) e Taipei Medical University Hospital (107TMUH-SP-01). Este manuscrito foi editado por Wallace edição académica.
Materials
| Bone rongeur | Diener | Friedman | |
| Buprenorphine | Sigma | B-044 | |
| Cefazolin | Sigma | 1097603 | |
| Chloral hydrate | Sigma | C8383 | |
| Dissection microscope | Nikon | SMZ-745 | |
| Electric clippers | Petpro | ||
| 10% formalin | Sigma | F5304 | |
| Germinator dry bead sterilizer | Braintree Scientific | ||
| Iris Forceps | Karl Klappenecker | 10 cm | |
| Iris Scissors | Diener | 9 cm | |
| Iris Scissors STR | Karl Klappenecker | 11 cm | |
| Microdrill | Stoelting | FOREEDOM K.1070 | |
| Micro-scissors-Vannas | HEISS | H-4240 | blade 7mm, 8 cm |
| Mouse brain matrix | World Precision Instruments | ||
| Non-invasive blood pressure system | Muromachi | MK-2000ST | |
| Operating Scissors STR | Karl Klappenecker | 14 cm | |
| Physiological Monitoring System | Harvard Apparatus | ||
| Razor blades | Ever-Ready | ||
| Stoelting Rodent Warmers | Stoelting | 53810 | Heating pad |
| Suture clip | Stoelting | ||
| Tweezers | IDEALTEK | No.3 | |
| Vetbond | 3M | 15672 | Surgical glue |
| 10-0 suture | UNIK | NT0410 | |
| 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride | Sigma | T8877 |
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