Este manuscrito descreve um método simples para medir o stress comportamentalmente no zebrafish adulto. A abordagem tira proveito da tendência inata que zebrafish preferem a metade inferior de um tanque quando em um estado estressante. Nós igualmente descrevemos métodos para acoplando o ensaio com farmacologia.
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Artigo de método
Abordagens comportamentais para estudar estresse inato em zebrafish
Neste artigo
Resumo
Resumo
Responder apropriadamente a estímulos estressores é essencial para a sobrevivência de um organismo. A pesquisa extensiva foi feita em um espectro largo de doenças stress-related e de desordens psiquiátricas, contudo uns estudos mais adicionais na regulação genética e neuronal do stress são exigidos ainda para desenvolver uma terapêutica melhor. O zebrafish fornece um modelo genético poderoso para investigar os fundamentos neural do stress, porque existe uma grande coleção de linhas mutantes e transgénicas. Além disso, a farmacologia pode ser facilmente aplicada ao zebrafish, pois a maioria das drogas pode ser adicionada diretamente à água. Nós descrevemos aqui o uso do "teste novo do tanque" como um método para estudar respostas inatas do esforço no zebrafish, e demonstramos como os fármacos ansiolíticos potenciais podem ser validados usando o ensaio. O método pode facilmente ser acoplado com as linhas do zebrafish que abrigando mutações genéticas, ou aquelas em que as aproximações transgénicas para manipular circuitos neural precisos são usadas. O ensaio também pode ser usado em outros modelos de peixes. Juntos, o protocolo descrito deve facilitar a adoção deste ensaio simples para outros laboratórios.
Introdução
As respostas ao estresse são Estados comportamentais e fisiológicos alterados resultantes de estímulos potencialmente prejudiciais ou aversivos. As respostas ao estresse são conservadas em todo o reino animal e são críticas para a sobrevivência de um organismo1. Décadas de pesquisa expandiram enormemente nosso conhecimento de alguns dos mecanismos genéticos e neuronais subjacentes aos Estados de estresse. Hoje, as áreas do cérebro, como a amígdala e o estriado2, e fatores genéticos como o hormônio liberador de corticotropina (CRH), e os receptores de glicocorticóide (gr) e Mineralo....
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Protocolo
O protocolo foi aprovado pela instituição de cuidados institucionais de animais e uso Committeeat Florida Atlantic University.
1. preparação
- Designe um quarto isolado para executar estudos comportáveis, ou feche fora de uma seção de um quarto de modo que seja isolado.
Nota: o quarto deve ser imperturbável e ter tráfego baixo para evitar interromper o comportamento normal dos peixes. - Mova os seguintes materiais e equipamentos para a sala comportamental: (i) uma câmera e lente, (II) um filtro infravermelho que pode ser anexado à lente, (III) um suporte de câmera, (IV) um computador com software de aquisição de câmera, (....
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Resultados
Examinando o stress no zebrafish
Para examinar o comportamento de estresse ao longo do tempo em zebrafish tipo selvagem, testamos peixes adultos da cepa AB24 no teste de tanque novo. Os adultos do AB foram submetidos ao protocolo como descrito acima. Momentaneamente, os peixes foram dados um período da Aclimação 1-h em um tanque na sala do comportamento. Um indivíduo foi colocado em um copo para 10-min, e depois colocado suavemente em um tanque desconhe.......
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Discussão
Zebrafish exibem uma resposta de stress robusta em um novo tanque
Aqui, nós descrevemos uma aproximação comportável simples para examinar respostas do esforço no zebrafish adulto, e validamos a aproximação como uma medida simples do stress usando a farmacologia.
O novo teste do tanque é um teste amplamente utilizado para examinar o estresse inato em zebrafish e outras espécies de peixes12,14,21<.......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses concorrentes ou financeiros.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo financiamento da iniciativa de ciência da vida de Júpiter na Universidade Atlântica da Flórida para ERD e ACK. Este trabalho também foi apoiado por subsídios R21NS105071 (concedido a ACK e ERD) e R15MH118625 (concedido ao ERD) dos institutos nacionais de saúde.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Câmera | Usamos a câmera USB Point Grey Grasshopper3 com lente da Edmund Optics. | ||
| Filtro infravermelho | |||
| Use programas como Virtualdub ou FlyCapture porque a taxa de quadros de aquisição pode ser definida. | |||
| LED infravermelhas | |||
| Aquaneering | Tanque de ensaio Número da peça ZT180 | Tamanho: M3 1,8 litro | |
| Suporte e braçadeira, ou tripé padrão para câmera | |||
| 250mL | |||
| Software | Usamos Ethovision XT 13 da Noldus Information Technology | ||
| Cloreto de buspirona | Sigma-Aldrich | B7148 | |
| ensaios randomizados | Usamos a função RANDBETWEEN no Microsoft Excel |
Referências
- McEwen, B. S. Stress, adaptation, and disease. Allostasis and allostatic load. Annals of the New York Academy of Sciences. 840, 33-44 (1998).
- Tovote, P., Fadok, J. P., Lüthi, A. Neuronal circuits for fear and anxiety. Nature Reviews Neuroscience.
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Reimpressões e permissões
