Pontos de extremidade importantes e marcadores proliferativos para avaliar lesão intestinal pequena e adaptação usando um modelo de mouse de mucosite induzida por quimioterapia

Resumo

Aqui, nós apresentamos um protocolo para estabelecer pontos finais importantes e os marcadores proliferative da lesão intestinal pequena e da hiperproliferação compensatória usando um modelo da mucosite quimioterapia-induzida. Nós demonstramos a deteção de pilhas proliferating usando um marcador específico do ciclo de pilha e usando o peso intestinal pequeno, a profundidade da cripta, e a altura do vilosidades como valores-limite.

Resumo

A adaptação intestinal é o mecanismo compensatório natural que ocorre quando o intestino é perdido devido ao trauma. As respostas adaptativas, como a proliferação de células criptas e o aumento da absorção de nutrientes, são críticas na recuperação, porém pouco compreendidas. Compreender o mecanismo molecular por trás das respostas adaptativas é crucial para facilitar a identificação de nutrientes ou drogas para melhorar a adaptação. Diferentes abordagens e modelos têm sido descritos em toda a literatura, mas uma forma descritiva detalhada de executar os procedimentos é necessária para obter dados reprodutíveis. Aqui, nós descrevemos um método para estimar pontos finais importantes e os marcadores proliferative da lesão intestinal pequena e da hiperproliferação compensatória usando um modelo da mucosite quimioterapia-induzida nos ratos. Nós demonstramos a deteção de pilhas proliferating usando um marcador específico do ciclo de pilha, assim como usando o peso intestinal pequeno, a profundidade da cripta, e a altura do vilosidades como valores-limite. Algumas das etapas críticas dentro do método descrito são a remoção e pesagem do intestino delgado e o sistema de software bastante complexo sugerido para a mensuração desta técnica. Estes métodos têm as vantagens que não são demorados, e que eles são rentáveis e fáceis de realizar e medir.

Introdução

A adaptação intestinal é o mecanismo compensatório natural que ocorre quando o intestino é perdido devido à doença ou cirurgia^1,2. Após o trauma, o intestino sofre uma resposta adaptativa morfométrica e funcional, caracterizada por proliferação de células cripta e aumento da absorção de nutrientes³. Esta etapa é crítica na recuperação, contudo mal compreendida. Os estudos experimentais da resposta adaptativa intestinal centraram-se nas mudanças que ocorrem após o resection pequeno das entranhas nos ratos, nos ratos, e nos porcos, mas em compreender o mecanismo molecular atrás da respost....

Protocolo

Todos os métodos descritos foram conduzidos de acordo com as diretrizes da legislação dinamarquesa que regem a experimentação animal (1987). Os estudos foram realizados com a permissão da Inspetoria de experimentos com animais dinamarqueses (2013-15-2934-00833) e do Comitê de ética local.

Nota: camundongos fêmeas C57BL/6J (~ 20 − 25 g) foram obtidos e alojados oito por gaiola na luz padrão 12 h, ciclo escuro de 12 h com acesso livre à água e ração padrão. Os animais foram deixados para aclimatizar durante uma semana antes do início das experiências.

1. indução de mucosite usando 5-fluorouracil

1. Obter 5-f....

Resultados

No primeiro experimento, induzimos a mucosite em camundongos no dia 0 e sacrificamos um grupo de camundongos por dia durante 5 dias consecutivos. Ao medir o peso do SI, verificou-se que este parâmetro diminuiu do dia 2 até o 4º dia sugerindo uma perda na massa enterócito. Verificou-se, ainda, que no 5º dia, o peso do SI não foi significativamente diferente do dia 0 (camundongos não tratados) (Figura 1). A proliferação medida pela incorporação do BrdU foi quas.......

Discussão

Aqui, demonstramos um método amplamente acessível para estudar a lesão de SI e a regeneração em um modelo de mouse. Existe uma grande variedade de modelos animais pré-clínicos de lesão intestinal, mas é vital que entendemos que cada modelo é único e que os endpoints devem ser adequados para responder à pergunta de pesquisa. Este modelo é excelente para estudar a resposta adaptativa à lesão, mas os desfechos devem ser modificados quando se utiliza o modelo como modelo pré-clínico de mucosite. No entanto, a tradução de mod.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
5-Fluorouracil	Hospira Nordic AB, Suécia	137853
Ketaminol® Vet	Merck, Nova Jersey, EUA	511485
Rompun® Vet Xylazine	Rompunvet, Bayer, Leverkusen, Alemanha.
tampão formalina natral a 10%	Cell Path Ltd, Powys, Reino Unido	BAF-5000-08A
HistoClear	National Diagnostics, Reino Unido	HS-200
Pertex	HistoLab®, Suécia	840
BrdU	Sigma-Aldrich, Alemanha.	B5002
Tris/EDTA Tampão de pH 9	Thermofisher scientific, Dinamarca	TA-125-PM4X
Bloco de peróxido	Ultravision Quanto kit de mouse com mouse, Thermofisher Scientific, Dinamarca	TL-060-QHDM
Buffer de bloco de roedores	Ultravision Quanto kit de mouse com mouse, Thermofisher Scientific, Dinamarca	TL-060-QHDM
Anticorpo monoclonal de camundongo anti-BrdU	Thermofisher Scientific, Dinamarca.	MA1-81890
Diluente de anticorpos de visão de laboratório OP Quanto	Thermofisher Scientific, Dinamarca.	TA-125-ADQ
Peroxidase de rábano	Ultravision Quanto Kit de mouse sobre mouse, Thermofisher Scientific, Dinamarca	TL-060-QHDM
DAB Quanto Substrato	DAB Kit de substrato DAB, Thermofisher Scientific, Dinamarca	TA-125-QHDX
DAB Quanto Chromogen	DAB Substrate Kit, Thermofisher Scientific, Dinamarca	TA-125-QHDX
Zen Lite Software (edição azul)	Carl Zeiss A/S		https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/microscope-software/zen-lite.html
ImageJ Software	LOCI, Universidade de Wisconsin		https://imagej.nih.gov/ij/

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