共同血管や脂肪組織における神経線維を染色
Summary
新しい血管の形成と交感神経支配は、脂肪組織リモデリングの極めて重要な役割を果たします。しかし、可視化と脂肪組織を定量的測定の技術的な問題が残っています。ここで正常にラベルを付け、血管や脂肪組織における神経線維の密度を定量的に比較するためのプロトコルを提案する.
Abstract
最近の研究では、血管新生、脂肪組織の肥満の開発中に改造の交感神経支配の重要な役割を強調しています。したがって、脂肪組織に動的な変更を文書化する簡単で効率的な手法の開発が必要です。ここでは、効率的に汚れ血管や脂肪組織における神経線維の共同修正蛍光アプローチについて述べる。伝統的なと最近開発された方法と比較して、我々 のアプローチは比較的わかりやすいより効率良く血管と神経線維の密度は高く、少ない背景をラベリングします。さらに、さらに画像の高解像度では、オープン ソース ソフトウェアによって血管、分岐、量、繊維の長さの領域を正確に測定することが出来ます。提案手法を用いて実証、その褐色脂肪組織 (BAT) に血管や神経線維の白色脂肪組織 (WAT) と比較してより高い金額が含まれているを示す.さらに、間で WATs、皮下ワット (sWAT) はより多くの血管や精巣上体のワット (eWAT) と比較して神経線維を見つける。本手法は、したがって脂肪組織リモデリングを調査するための便利なツールを提供します。
Introduction
脂肪組織はキー代謝と内分泌機能1。それを動的に拡大または縮小に対して異なる栄養強調2。複数の生理学的なパス/ステップ成っているプロセスを改造するアクティブな組織血管新生、線維化、ローカル炎症性微小2,3,4の形成など。いくつかの物理的な刺激、寒冷、運動などは、最終的に新しい血管の形成と脂肪組織5,6の交感神経支配につながる交感神経活性化を引き起こす可能性があります。これらの改造のプロセスは、インスリン感受性、2 型糖尿病の2型の特徴を含む全身の代謝の結果にしっかりとリンクされます。したがって、これらの病理組織学的変化の可視化は、全体の脂肪組織の健康状態を理解する大切です。
血管新生は、新しい血管の形成のプロセスです。血管新生は、さまざまなテクニック6,7,と記載されているが脂肪組織のリモデリングにおける重要なステップと考えられている血管は、酸素、栄養素、ホルモン、および組織に成長因子を提供するので8,9,10,11,12,13。 ただし、イメージの解像度、免疫染色と血管密度の定量化法の効率についての質問が残っています。新しい血管の形成に比べると、脂肪質ティッシュの神経支配は、長い時間の過小に評価されています。最近では、曽ら.14使用生体 2 光子励起顕微鏡と脂肪細胞が神経線維14の層で囲まれていることを示した。それ以来、研究者は脂肪組織の生理機能の調節に交感神経支配の重要な役割を理解し始めています。したがって、ドキュメント脂肪神経に簡単で実用的なアプローチを開発する重要です。
ここでは、血管と神経線維の私達の以前のプロトコルに基づいて共同の汚損のための最適化手法を報告する.この方法では、血管と神経線維騒々しい背景なしの鮮明な画像を実現します。さらに、我々 は、オープン ソース ソフトウェアと密度の定量的測定を実行するために十分に高い解像度を取得します。この新しいアプローチを使用して、構造体と血管と異なる脂肪拠点における神経線維の密度正常に比較できます。
Protocol
Representative Results
Discussion
肥満の開発1,2の間に代謝不全に直接リンクは脂肪組織リモデリングします。血管新生と交感神経支配は、動的な改造プロセス2,12のために不可欠です。したがって、非常に重要なは、神経線維と同様、新しい血管を可視化に適用可能なアプローチを開発します。以前の方法は、脂肪組織の血管新生を文書?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、(k. s.)、健康 (NIH) 助成金 R01DK109001 の国立研究所によって支えられました。
Materials
| Alexa Fluor 488 AffiniPure Bovine Anti-Goat IgG (H+L) | Jackson ImmunoResearch | 805-545-180 | Lot: 116969 |
| Alexa Fluor 647 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) | Jackson ImmunoResearch | 711-605-152 | Lot: 121944 |
| Amira 6.0 | Thermo Fisher Scientific | Licensed software | |
| Angio tool | National Institutes of Health | Open source software https://ccrod.cancer.gov/confluence/display/ROB2/Home |
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| Anti-mouse endomucin antibody | R&D research system | AF4666 | Lot: CAAS0115101 |
| Anti-tyrosine hydroxylase antibody | Pel Freez Biologicals | P40101-150 | Lot: aj01215y |
| Cover glasses high performance, D=0.17mm | Zeiss | 474030-9020-000 | |
| Cytoseal 280 | Thermo Fisher Scientific | 8311-4 | High-viscosity medium |
| Glycerol | Fisher | G33-500 | |
| Paraformaldehyde,16% | TED PELLA | 170215 | |
| Press-to-Seal Silicone Isolator with Adhesive, eight wells, 9 mm diameter, 1.0 mm deep | INVITROGEN | P24744 | Silicone isolator |
| ProLong Diamond Antifade Mountant | Thermo Fisher Scientific | P36965 | Mounting medium |
| SEA BLOCK Blocking Buffer | Thermo Fisher Scientific | 37527X3 | |
| Sodium azide | Sigma-Aldrich | S2002-100G | |
| Tissue Path IV Tissue Cassettes | Thermo Fisher Scientific | 22-272416 | |
| Triton Χ-100 | Sigma-Aldrich | X100 | Generic term: octoxynol-9 |
| Tube rotator and rotisseries | VWR | 10136-084 | |
| Tween-20 | Sigma-Aldrich | P1379 | Generic term: Polysorbate 20 |
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