JoVE Journal > Cancer Research
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Resultados
Discussion
Declarações
Acknowledgements
Materials
Referências
Tadução automática
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Pesquisa do Câncer

Retroperitoneal Lenfadenopati li Ortotopik Endometriyal Kanser Modeli In Vivo Propagated ve Kültürlü VX2 Hücrelerinden Yapılmıştır

Published: September 12, 2019
doi:
10.3791/59340
, , , , , , , , ,
1Institute of Medical Science,University of Toronto, 2Department of Obstetrics and Gynecology,University of Toronto, 3Guided Therapeutics Laboratory, TECHNA Institute,University Health Network, 4Department of Pathology, Princess Margaret Cancer Center,University Health Network, 5Department of Medical Biophysics,University of Toronto, 6Princess Margaret Cancer Center,University Health Network, 7Techna Institute,University Health Network, 8Department of Surgery,University of Toronto, 9Department of Otolaryngology, Head and Neck Surgery,University of Toronto, 10Division of Gynecologic Oncology, University of Toronto /Princess Margaret Cancer Center,University Health Network, 11Princess Margaret Cancer Center,University Health Network

Summary

Bu protokol, kültürde VX2 hücrelerini büyütmek ve tavşanlarda retroperitoneal lenf nodu metastazı olan endometriyal kanserortopik VX2 modeli oluşturmak için standart bir yöntem sunmaktadır. Ortotopik endometriyal kanser modelleri lenf nodaz metastazı tanısı için yeni görüntüleme yöntemlerinin klinik öncesi çalışması için önemlidir.

Abstract

Endometrial kanser Kuzey Amerika’da en sık görülen jinekolojik malignitedir ve görülme sıklığı dünya çapında artmaktadır. Tedavi lenfadenektomi ile belirlenen lenf nodu tutulumuna bağlı olarak adjuvan tedavi li veya adjuvan olmayan cerrahiden oluşur. Lenfadenektomi birçok hastada terapötik yararı olduğu gösterilmeyen morbid bir işlemdir ve bu nedenle lenf nodu metastazlarını teşhis etmek için yeni bir yöntem gereklidir. Yeni görüntüleme ajanlarını test etmek için retroperitoneal lenf nodazı metastazı olan endometrial kanserin güvenilir bir modeline ihtiyaç vardır. VX2 endometrial kanser modeli literatürde sık sık tanımlanmıştır; ancak model kuruluş yöntemine göre önemli farklılıklar vardır. Ayrıca, daha önce sadece in vivo yayılan hücreler olarak bu modeli oluşturmak için kültürlü VX2 hücrelerinin kullanımı hakkında hiçbir çalışma bildirilmiştir. Burada VX2 endometrial kanser modelinin oluşturulması için standart laştırılmış cerrahi yöntem ve postoperatif izleme yöntemi sunmakta ve bu modeli oluşturmak için kültürlü VX2 hücrelerinin ilk kullanımı hakkında rapor vermekteyiz.

Introduction

Endometrial kanser, ya da rahim astar kanseri, dünya çapında ikinci en yaygın jinekolojik malignite ve gelişmiş ülkelerde en sık görülen malignite1. Endometrial kanser insidansı sürekli artmıştır, 2005-2013 yılları arasında yılda% 2.3 oranında artan mortalite karşılık gelen% 2.2 artışile 1,2,3. Pozitif lenf nodlarının varlığı sağkalım güçlü bir negatif belirleyici 4 olduğu gibi lenf nodu metastazlarının tanısı çok önemlidir4,5,6,7 ve uygulanmasına rehberlik edebilir adjuvan tedavi8,9,10,11,12,13. Lenf nodazı metastazları şu anda cerrahi pelvis ve karın ana kan damarları örten lenfatik doku kaldırarak teşhis edilir. Bu prosedür, bir lenfadenektomi olarak bilinen, iki büyük çalışmalar14, 15,16,17,18 ve bilinen çelişkili sağkalım verileri nedeniyle tartışmalıdır intraoperatif15,19,20 ve postoperatif morbidite riski21,22,23. Mevcut non-invaziv görüntüleme yöntemleri lenf nodülü diseksiyonu değiştirmek için gerekli duyarlılık ve özgüllük yok gibi24, yeni tanısal görüntüleme teknikleri geliştirmek için bir itme olmuştur. Bu yeni teknikleri niçin pre-klinik ortamda test etmek için retroperitoneal lenf nodazı metastazlı güvenilir bir endometrial kanser modeli gereklidir.

Tavşan VX2 tümör modeli akciğer26dahil olmak üzere birden fazla insan katı organ tümörleri25 çalışma için yaygın olarak kullanılan iyi kurulmuş bir modeldir , baş ve boyun27,28, karaciğer29, böbrek30, kemik31,32, beyin33, pankreas34 ve rahim35,36,37. VX2 modeli ilk olarak 1940 yılında Kidd ve Rous38 tarafından 193339yılında Shope tarafından keşfedilen bir cottontail tavşan papilloma virüsü başarıyla nakledilerek geliştirilmiştir. O zamandan beri, VX2 modeli in vivo muhafaza edilmiştir, Beyaz Yeni Zelanda tavşan kuadriseps kas seri geçit gerektiren40. Daha yakın zamanda, birden fazla grup başarıyla in vitro VX2 hücreleri büyüdü40,41,42 ve kültürlü hücre hattı korunmuş tümörigenecity gösterdi31, 42,43. VX2 tümörleri histolojik olarak anaplastik skuamöz hücreli karsinomlar44 olarak tanımlanır ve adenokarsinom26’yabenzeyen glandüler özellikler içerir. Tümörler implantasyon kolaylığı ile karakterizedir, hızlı büyüme ve hiper-vaskülarite44,45 ve güvenilir metastaz, en sık bölgesel ve uzak lenf düğümleri45. Rahim vasküler ve lenfatik anatomi benzerlikler46 yanı sıra ortotopik büyüme sitesi tavşan VX2 karsinom metastatik desen insan endometriyal kanser taklit sağlamak, VX2 modeli insan eğitimi için güvenilir bir model yapma metastatik hastalık. Ayrıca, anormal mikrovasküler proliferasyon47 gibi histolojik özellikleri, yanı sıra immünolojik48 ve genetik benzerlikler49,50 insanlar ve tavşanlar arasında tümör öneririz mikroçevre insan endometrial kanser yansıtabilir.

Birden fazla grup başarı yüksek bildirilen oranı ile retroperitoneal metastazlar ile endometrial kanser modeli oluşturmak için VX2 kullanımı bildirdin36,51,52; ancak, model oluşturma yöntemi açısından mevcut literatürde önemli farklılıklar vardır. Hücre süspansiyon dozları gibi düşük 4 x 105 hücre/ rahim boynuzu51 ve yüksek 5 x 109 hücreleri / rahim boynuzu37,53 gerekli VX2 hücresel doz üzerinde standart konsensüs ile bildirilmiştir. Ayrıca, rahim miyometrium36içine tümörün mikro-cerrahi implantasyonu da dahil olmak üzere aşı yöntemleri çeşitli bildirilmiştir , VX2 hücre süspansiyon37enjeksiyonu ,44,52 , 53 ve bazı durumlarda, rahim boynuzu ekleme önce innoculation52dikiş . Son olarak, bu modeli oluşturmak için kültürlü VX2 hücrelerinin kullanıldığını bildiren hiçbir grup yoktur. Bu çalışmanın amacı, VX2 modeli oluşturmanın başarılı bir standartlaştırılmış yöntemini göstermek ve tavşanda retroperitoneal metastazlar içeren endometrial kanser modelini oluşturmak için kültürlü VX2 hücrelerinin ilk kullanımını rapor etmektir.

Protocol

Derin karın duvarı kapatma: Periton kesisini belirleyin ve periton, rektus kası ve fasyayı doku forsepsi ile tutarak tutun. Tüm hayvan çalışmaları, Üniversite Sağlık Ağı’nın hayvan salevi (ARC) onaylı tesislerinde ve onaylı hayvan kullanımı ve bakım protokollerine (AUP #3994/#4299) uygun olarak gerçekleştirilmiştir. VX2 hücre hattı, Üniversite Sağlık Ağı’ndaki Dr. Aken’s Lab’dan alındı. 1. In vitro VX2 hücre hattının oluşturulması Tavşan quadrice…

Representative Results

Endometrial kanser modelinin oluşturulmasında yirmi sekiz tavşan kullanıldı. Tavşanların deney sırasında ortalama ağırlığı 2,83 kg (2,71-3,58 kg) olarak ydı. Rahim tümörleri başarıyla% 75 genel bir model başarı oranı için 21 tavşan büyüdü. Protokole rahim dikitinin eklenmesinden önce, rahim dikitesi eklendikten sonra başarı oranı iken% 57 idi. 7. tavşandan sonra ilk düşük model başarı oranına yanıt olarak protokole rahim dikme eklendi….

Discussion

Burada, bir VX2 endometrial kanser modelinin kurulması için standart bir cerrahi yöntem bildirdik ve bu modeli oluşturmak için kültürlü VX2 hücrelerinin ilk kullanımı rapor. Tümör alma oranı% 75 daha önce literatürde bildirilen% 100 oranı dahadüşüktür 35,37,53,56; ancak patolojik olarak doğrulanmış lenf nodaz metastazlarının %90 oranı bu modelin önceki çalışmalar?…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma Terry Fox Araştırma Enstitüsü (PPG#1075), Kanada Sağlık Araştırma Enstitüsü (Vakıf Grant #154326), Kanada Kanser Derneği Araştırma Enstitüsü (704718), Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi tarafından finanse edilmiştir. Сanada Yenilik vakfı ve Prenses Margaret Kanser Vakfı.

Ben ilk VX2 modeli ve dondurulmuş VX2 tümör blokları kurulması için ilk VX2 hücreleri sağlamak için Dr Marguerite Akens teşekkür etmek istiyorum. Ben Ilk VX2 hücre kültürü deneyleri ve Lili Ding VX2 hücre kültürü ile yardımcı olmak için gerçekleştirmek için yardımcı olduğu için Marco DiGrappa teşekkür etmek istiyorum.

Materials

11-blade scalpel, Sterile, Disposible Aspen Surgical (VWR) 80094-086
22-gague ear vein catheter CDMV 14332
3-0 absorbable poly-filament suture (Polysorb) Covidien 356718
3-0 braided absorbable suture (Polysorb) Covidien 356718
70uM cell strainer, Individually wrapped, Nylon Falcon 352350
Acepromazine (Atravet) CDMV 1047
Betadine soap (Poviodone iodine 7.5%) CDMV 4363
Betadine solution (Poviodone iodine 10%) UHN Stores 457955
Buprenorphine McGill University
Cefazolin UHN in-patient pharmacy No Cat # Needed
Chlorhexidine solution CDMV 119872
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 100mm dishes Corning 354450 brand not important
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 24-well plates Corning 354408 brand not important
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 6-well plates Corning 354400 brand not important
Corning Matrigel Basement Membrane Matrix, *LDEV-free, 10 mL Corning 354234
DMEM/HAM F12 1:1 Life Technologies 11320 brand not important
DMSO Caledon Lab Chem 1/10/4100
Enrofloxacin (Baytril injectable) CDMV 11242
Falcon Tube Corning Centri-Star 430828
Fetal Bovine Serum, Qualified, Canadian Origin, 500ml Life Technologies 12483020 brand/source not important
Isoflurane UHN in-patient pharmacy No Cat # Needed
Isohexol contrast GE Healthcare 407141210
Meloxicam (Metacam 0.5%) CDMV 104674
Normal Saline House Brand (UofT Medstore) 1011
PBS Multicell or Sigma 331-010-CL or D8537-500mL
Penicillin/Streptomycin (100mL; 10000U Penicillin, 10000ug Streptomycin) Corning-Cellgro CA45000-652
Sterile Hanks Balanced Salt Solution (-Ca++, -Mg++, -Phenol Red) T.C.M.F (Dr Bristow) 28-Jan-11
Surgical Glue (Tissue Adhesive) 3M Vetbond 14695B
Trypsin (0.25%), Proteomics Grade Sigma T-6567-5X20UG
Trypsin-EDTA, 0.05%, 100ml Wisent Inc 325-542-EL brand not important
DOWNLOAD MATERIALS LIST

Referências

  1. Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. International Journal of Cancer. 136, E359-E386 (2015).
  2. Canada, S. . Canadian Cancer Statistics Special topic: Pancreatic cancer. , (2017).
  3. Siegel, R. Cáncer Statistics. Cáncer Journal. 67, 7-30 (2017).
  4. Creasman, W. T., et al. Surgical pathologic spread patterns of endometrial cancer. A Gynecologic Oncology Group Study. Cancer. 60, 2035-2041 (1987).
  5. Morrow, C. P., et al. Relationship between surgical-pathological risk factors and outcome in clinical stage I and II carcinoma of the endometrium: A gynecologic oncology group study. Gynecologic Oncology. 40, 55-65 (1991).
  6. Hicks, M., et al. The National Cancer Data Base report on Endometrial carcinoma in African-American women. Cancer. 83, 2629-2637 (1998).
  7. Barrena Medel, N. I., et al. Comparison of the prognostic significance of uterine factors and nodal status for endometrial cancer. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 204, 1-7 (2011).
  8. Randall, M. E., et al. Randomized phase III trial of whole-abdominal irradiation versus doxorubicin and cisplatin chemotherapy in advanced endometrial carcinoma: A gynecologic oncology group study. Journal of Clinical Oncology. 24, 36-44 (2006).
  9. Galaal, K., Al Moundhri, M., Bryant, A., Lopes, A. D., Lawrie, T. A. Adjuvant chemotherapy for advanced endometrial cancer. Cochrane Database of Systematic Reviews. 2014, 2-4 (2014).
  10. Orr, J. W., Holimon, J. L., Orr, P. F. Stage I corpus cancer: is teletherapy necessary?. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 176, 777-788 (1997).
  11. Ng, T. Y., Perrin, L. C., Nicklin, J. L., Cheuk, R., Crandon, A. J. Local recurrence in high-risk node-negative stage I endometrial carcinoma treated with postoperative vaginal vault brachytherapy. Gynecologic Oncology. 79, 490-494 (2000).
  12. Mohan, D. S., et al. Long-term outcomes of therapeutic pelvic lymphadenectomy for stage I endometrial adenocarcinoma. Gynecologic Oncology. 70, 165-171 (1998).
  13. Straughn, J. M., et al. Stage IC adenocarcinoma of the endometrium: Survival comparisons of surgically staged patients with and without adjuvant radiation therapy. Gynecologic Oncology. 89, 295-300 (2003).
  14. Panici, P. B., et al. Systematic pelvic lymphadenectomy vs no lymphadenectomy in early-stage endometrial carcinoma: Randomized clinical trial. Journal of the National Cancer Institute. 100, 1707-1716 (2008).
  15. ASTEC study group, ., et al. Efficacy of systematic pelvic lymphadenectomy in endometrial cancer (MRC ASTEC trial): a randomised study. The Lancet. 373, 125-126 (2009).
  16. Kilgore, L., et al. Adenocarcinoma of the Endometrium: Survival comparisons of patients with and without pelvic node sampling. Gynecologic Oncology. 56, 29-33 (1995).
  17. Trimble, E. L., Kosary, C., Park, R. C. Lymph node sampling and survival in endometrial cancer. Gynecologic Oncology. 71, 340-343 (1998).
  18. Chan, J. K., et al. The outcomes of 27,063 women with unstaged endometrioid uterine cancer. Gynecologic Oncology. 106, 282-288 (2007).
  19. Cragun, J. M., et al. Retrospective analysis of selective lymphadenectomy in apparent early-stage endometrial cancer. Journal of Clinical Oncology. 23, 3668-3675 (2005).
  20. Piovano, E., et al. Complications after the treatment of endometrial cancer: A prospective study using the French-Italian glossary. International Journal of Gynecological Cancer. 24, 418-426 (2014).
  21. Abu-Rustum, N. R., et al. The incidence of symptomatic lower-extremity lymphedema following treatment of uterine corpus malignancies: A 12-year experience at Memorial Sloan-Kettering Cancer Center. Gynecologic Oncology. , 714-718 (2006).
  22. Todo, Y., et al. Risk factors for postoperative lower-extremity lymphedema in endometrial cancer survivors who had treatment including lymphadenectomy. Gynecologic Oncology. 119, 60-64 (2010).
  23. Beesley, V., Janda, M., Eakin, E., Obermair, A., Battistutta, D. Lymphedema after gynecological cancer treatment: Prevalence, correlates, and supportive care needs. Cancer. 109, 2607-2614 (2007).
  24. Haldorsen, I. S., Salvesen, H. B. What Is the Best Preoperative Imaging for Endometrial Cancer?. Current Oncology Reports. 18, 1-11 (2016).
  25. Aravalli, R., Cressman, E. Relevance of Rabbit VX2 Tumor Model for Studies on Human Hepatocellular Carcinoma: A MicroRNA-Based Study. Journal of Clinical Medicine. 4, 1989-1997 (2015).
  26. Kreuter, K. A., et al. Development of a rabbit pleural cancer model by using VX2 tumors. Comparative Medicine. 58, 287-293 (2008).
  27. Li, S., Ren, G., Jin, W., Guo, W. Establishment and characterization of a rabbit oral squamous cell carcinoma cell line as a model for in vivo studies. Oral Oncology. 47, 39-44 (2011).
  28. Muhanna, N., et al. Multimodal Nanoparticle for Primary Tumor Delineation and Lymphatic Metastasis Mapping in a Head-and-Neck Cancer Rabbit Model. Advanced Healthcare Materials. 4, 2164-2169 (2015).
  29. Tong, H., Duan, L., Zhou, H., Feng, S. Modification of the method to establish a hepatic VX2 carcinoma model in rabbits. Oncology Letters. 15, 22-23 (2018).
  30. Bimonte, S., et al. Induction of VX2 para-renal carcinoma in rabbits: generation of animal model for loco-regional treatments of solid tumors. Infectious Agents and Cancer. 11, 1-8 (2016).
  31. Handal, J. A., et al. Creation of rabbit bone and soft tissue tumor using cultured VX2 cells. Journal of Surgical Research. 179, e127-e132 (2013).
  32. Pezeshki, P. S., et al. Bone targeted bipolar cooled radiofrequency ablation in a VX-2 rabbit femoral carcinoma model. Clinical and Experimental Metastasis. 32, 279-288 (2015).
  33. Wang, Y., et al. Magnetic resonance imaging-navigated argon-helium cryoablation therapy against a rabbit VX2 brain tumor. Experimental and Therapeutic. 9, 2229-2234 (2015).
  34. Zhang, W., et al. Laparotomy cryoablation in rabbit VX2 pancreatic carcinoma. Pancreas. 46, 288-295 (2017).
  35. Xu, L. -. Q., Huang, Y. -. W., Luo, R. -. Z., Zhang, Y. -. N. Establishment of the retroperitoneal lymph node metastasis model of endometrial VX2 carcinoma in rabbits and observation of its metastatic features. World Journal of Surgical Oncology. 13, 109 (2015).
  36. Duan, P., Lü, J. Q., Tu, Q. M., Yu, Z. K. Magnetic resonance evaluation of transplanted endometrial carcinoma and its lymph node metastasis in rabbits. Chinese Journal of Cancer Research. 19, 201-205 (2007).
  37. Huang, Y. -. W., et al. VEGF-c expression in an in vivo model of orthotopic endometrial cancer and retroperitoneal lymph node metastasis. Reproductive Biology and Endocrinology. 11, 49 (2013).
  38. Kidd, J. G., Rous, P. A transplantable rabbit carcinoma originating in a virus-induced papilloma and containing the virus in masked or altered form. J Exp Med. 71 (6), 813-838 (1940).
  39. Shope, B. R. E., Hurst, B. E. W. . Infectious papillomatosis of rabbits. , (1933).
  40. Galasko, C. S. B., Haynes, D. W. Survival of VX2 carcinoma cells in vitro. European Journal of Cancer. 12 (1965), 1025-1026 (1965).
  41. Osato, B. Y. T., Ito, Y. . In vitro Cultivation And Immunofluorescent Studies Of Transplantable Carcinomas Vx2 And Vx7. , (1967).
  42. Easty, D. M., Easty, G. C. Establishment of an in vitro cell line from the rabbit VX2 carcinoma. Virchows Archiv B Cell Pathology Including Molecular Pathology. 39, 333-337 (1982).
  43. Liu, X., et al. Establishment and characterization of a rabbit tumor cell line VX2. Zhonghua bing li xue za zhi Chinese Journal of Pathology. 34, 661-663 (2005).
  44. Parvinian, A., Casadaban, L. C., Gaba, R. C. Development, growth, propagation, and angiographic utilization of the rabbit VX2 model of liver cancer: a pictorial primer and “how to” guide. Diagnostic and Interventional Radiology. 20, 335-340 (2014).
  45. Pascale, F., et al. Modified model of VX2 tumor overexpressing vascular endothelial growth factor. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 23, 809-817 (2012).
  46. Oshiro, H. The role of the lymphatic system in rabbit models for cancer metastasis research a perspective from comparative anatomy. Okajimas Folia Anatomica Japonica. , 6-7 (2014).
  47. Guan, L., Xu, G. Destructive effect of HIFU on rabbit embedded endometrial carcinoma tissues and their vascularities. Oncotarget. 8, 19577-19591 (2017).
  48. Oshiro, H., et al. Establishment of successively transplantable rabbit VX2 cancer cells that express enhanced green fluorescent protein. Medical Molecular Morphology. 48, 13-23 (2015).
  49. Graur, D., Duret, L., Gouyt, M. Phylogenetic position of the order Lagomorpha (rabbits, hares and allies). Nature. 379, 333-335 (1996).
  50. Bõsze, Z., Houdebine, L. M. Application of rabbits in biomedical research: A review. World Rabbit Science. 14, 1-14 (2006).
  51. Kyotani, S., et al. A study of cis-diamminedichloroplatinum(II) suppositories for the treatment of rabbit uterine endometrial carcinoma. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 16, 55-58 (1993).
  52. Harima, Y., Harima, K., Hasegawa, T., Shikata, N., Tanaka, Y. Histopathological changes in rabbit uterus carcinoma alter transcatheter arterial embolization using cisplatin. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 38, 317-322 (1996).
  53. Huang, Y. W., et al. Tumor-induced VEGF-C overexpression in retroperitoneal lymph nodes in VX2 carcinoma-bearing rabbits. Drug Design, Development and Therapy. 9, 5949-5956 (2015).
  54. Bio-Rad. . Real-Time PCR Applications Guide. , (2006).
  55. Taylor, S., et al. A practical approach to RT-qPCR—publishing data that conform to the MIQE guidelines. BioRad Bulletin. , 5859 (2009).
  56. Rhee, T. K., et al. Rabbit VX2 Tumors as an Animal Model of Uterine Fibroids and for Uterine Artery Embolization. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 18, 411-418 (2007).
  57. Takahashi, K., et al. Development of a mouse model for lymph node metastasis with endometrial cancer. Cancer Science. 102, 2272-2277 (2011).

Tags

Orthotopic Endometrial Cancer ModelVX2 CellsRetroperitoneal Lymph Node MetastasisImage-guided SurgeryIn Vitro PropagationIn Vivo PropagationCell CultureCell SuspensionCell CountingCell Injection

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citar este artigo
Philp, L., Chan, H., Rouzbahman, M., Rostami, A., Ding, L., Bratman, S. V., Akens, M. K., Irish, J. C., Bernardini, M. Q., Zheng, G. An Orthotopic Endometrial Cancer Model with Retroperitoneal Lymphadenopathy Made From In Vivo Propagated and Cultured VX2 Cells. J. Vis. Exp. (151), e59340, doi:10.3791/59340 (2019).
Baixar citação
Reimpressões e Permissões

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image