सेकल लिगेशन और पंचर और इंट्रानैसल संक्रमण डुअल मॉडल ऑफ सेप्सिस-प्रेरित इम्यूनोसुप्रेशन का डिजाइन
Summary
इस प्रोटोकॉल का वर्णन संक्रामक परिणामों को मापने के लिए माध्यमिक अस्पताल में अंतर्निहित संक्रमण के लिए इम्यूनोसप्रेसिव हालत में, पहले cecal ligation / इम्यूनोसुप्रेशन सेप्सिस का नैदानिक रूप से प्रासंगिक मॉडल बनाएं।
Abstract
सेप्सिस, एक गंभीर और जटिल जीवन-धमकी देने वाला संक्रमण, कई अंगों में समर्थक और विरोधी भड़काऊ प्रतिक्रियाओं के बीच असंतुलन की विशेषता है। चिकित्सा के विकास के साथ, अधिकांश रोगी अति भड़काऊ चरण से बचते हैं लेकिन एक इम्यूनोसुप्रेसिव चरण में प्रगति करते हैं, जो माध्यमिक संक्रमण के उद्भव को बढ़ाता है। इसलिए, सेप्सिस के दौरान इम्यूनोसप्रेसिव चरण में माध्यमिक अस्पताल द्वारा प्राप्त संक्रमण के अंतर्निहित रोगजन की बेहतर समझ अत्यधिक महत्व की है। यहाँ रिपोर्ट चूहों में डबल हिट संक्रमण पैदा करके संक्रामक परिणामों का परीक्षण करने के लिए एक मॉडल है. एक मानक शल्य चिकित्सा प्रक्रिया का उपयोग पॉलीमाइक्रोबियल पेरिटनिटिस को सीकल लिगेशन और पंचर (सीएलपी) द्वारा प्रेरित करने के लिए किया जाता है और इसके बाद प्रतिरक्षा दमन में होने वाले निमोनिया का अनुकरण करने के लिए स्टेफिलोकोकस ऑरियस के इंट्रानैसल संक्रमण द्वारा किया जाता है जो अक्सर देखा जाता है सेप्टिक रोगियों में। यह दोहरी मॉडल लंबे समय सेसेप्सिस और नोसोकोरियल निमोनिया से माध्यमिक संक्रमण के लिए संवेदनशीलता वाले रोगियों में होने वाली इम्यूनोसप्रेसिव राज्य को प्रतिबिंबित कर सकता है। इसलिए, यह मॉडल सेप्सिस प्रेरित माध्यमिक जीवाणु निमोनिया के पैथोफिजियोलॉजी की जांच करने के लिए एक सरल प्रयोगात्मक दृष्टिकोण प्रदान करता है, जिसका उपयोग सेप्सिस और इसकी जटिलताओं के लिए उपन्यास उपचार की खोज के लिए किया जा सकता है।
Introduction
सेपसिस मेजबान समर्थक भड़काऊ और विरोधी भड़काऊ प्रक्रियाओं की एक जटिल परस्पर क्रिया शुरू करता है और एक अति भड़काऊ प्रतिक्रिया और बाद में प्रतिरक्षा रोग1,2की विशेषता है। सेपसिस एक वैश्विक स्वास्थ्य प्राथमिकता का प्रतिनिधित्व करता है और गहन देखभाल इकाइयों (आईसीयू)3में मौतों की एक उच्च संख्या का कारण बनता है। सेप्सिस की घटनाओं के प्रति वर्ष दुनिया भर में 30 लाख से अधिक मामलों का अनुमान है , आईसीयू प्रबंधन4,5में अग्रिम के बावजूद मृत्यु दर 30% के रूप में उच्च के साथ . 2017 में, विश्व स्वास्थ्य संगठन ने इस घातक बीमारी की रोकथाम, निदान और प्रबंधन में सुधार करने के लिए एक प्रस्ताव पारित किया5. हालांकि, हाल के अध्ययनों से यह स्पष्ट है कि मौत गंभीर सेप्टिक रोगियों में प्राथमिक संक्रमण से नहीं बल्कि माध्यमिक नोसोकोमिक संक्रमण (विशेष रूप से निमोनिया) से होती है जो इम्यूनोसुप्रेशन6,7 के कारण होती है . इसलिए, क्यों सेप्टिक रोगियों माध्यमिक संक्रमण विकसित और अधिक प्रभावी उपचार की खोज के तंत्र को समझने के लिए तत्काल आवश्यक हैं. इसमें, एक दोहरी मॉडल, जिसे एक डबल-हिट मॉडल के रूप में भी जाना जाता है, लंबी सेप्सिस वाले रोगियों में होने वाली इम्यूनोसप्रेसिव घटना का अध्ययन करने के लिए वर्णित है।
बहुसूक्ष्मात्मक सेप्सिस पर अनुसंधान में सोने के मानक प्रयोगात्मक मॉडल के रूप में, सीकल लिगेशन और पंचर (सीएलपी) एक सर्जरी है जो सीकम लिगेशन और वेध की विशेषता है, जो पॉलीमाइक्रोबियल पेरिटोनिटिस और सेप्सिस8,9 में योगदान देती है। . पैथोफिजियोलॉजिकल प्रक्रिया और साइटोकिन प्रोफाइल, गतिज और परिमाण के साथ, नैदानिक सेप्सिस के समान हैं। पंचर के लिए उपयोग किए जाने वाले लिगेशन, सुई के आकार और सीकल पंचर की संख्या की स्थिति प्रमुख कारक हैं जो सीएलपी के बाद मृत्यु दर को प्रभावित करते हैं।
नोसोकोमिल निमोनिया सेप्सिस के साथ गंभीर रूप से बीमार रोगियों के बीच मृत्यु का प्रमुख कारण है। गंभीर सेप्सिस के कारण जीवों के प्रमुख प्रकार में स्टैफिलोकोकस ऑरियस (20.5%), स्यूडोमोनास प्रजाति (19.9%), एंटोबैक्टीरिया (मुख्य रूप से ई. कोलाई, 16.0%), और कवक (19%) शामिल हैं। इस बीच, हाल के अध्ययनों से ग्राम-पॉजिटिव जीवों की बढ़ती घटनाओं का पता चला है, जो अब ग्राम-नकारात्मक संक्रमण3के समान हैं।
इस प्रोटोकॉल में वर्णित विधि में सीएलपी शामिल है, जो सबलेथल पॉलीमाइक्रोबियल पेरिटनिटिस को प्रेरित करने के लिए “पहली हिट” के रूप में प्रदर्शन करता है, जो इम्यूनोसुप्रेशन स्थिति को प्रकट करता है। प्रक्रिया भी एक नैदानिक रूप से प्रासंगिक अनुसंधान मंच प्रदान करने के लिए “दूसरी हिट” के रूप में एस aureus के बाद intranasal instillation शामिल है.
Protocol
Representative Results
Discussion
सेप्सिस अनुसंधान के लिए सोने के मानक मॉडल के रूप में, सीएलपी तीन अपमान का एक संयोजन है, लेपरोटोमी की वजह से ऊतक आघात सहित, सीकम के लिगेशन के कारण नेक्रोसिस, और माइक्रोबियल रिसाव का एक परिणाम के रूप में सं?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह कार्य राष्ट्रीय स्वास्थ्य अनुदान संस्थान R01 AI138203-01, AI109317-04, AI101973-01, और AI097532-01A1 से एम डब्ल्यू के लिए समर्थित किया गया था। नॉर्थ डकोटा कोर सुविधाओं के विश्वविद्यालय NIH अनुदान (INBRE P20GM103442 और COBRE P20GM113123) द्वारा समर्थित थे. यह काम भी चीन के राष्ट्रीय प्रकृति विज्ञान फाउंडेशन के मुख्य कार्यक्रम (81530063) Jianxin जियांग के द्वारा समर्थित किया गया था. funders अध्ययन डिजाइन, डेटा संग्रह और विश्लेषण, प्रकाशित करने का निर्णय, या पांडुलिपि की तैयारी में कोई भूमिका नहीं थी. हम वीडियो बनाने के लिए मारविन Leier (ग्रामीण स्वास्थ्य के लिए केंद्र, उत्तरी डकोटा विश्वविद्यालय) धन्यवाद.
Materials
| 21 G 1 ½ Needle | BD | BD305167 | |
| ACK lysing buffer | Gibco | A10492-01 | |
| Anti-mouse CD11b antibody | Biolegend | 101201 | |
| Anti-mouse Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) antibody | Biolegend | 108401 | |
| C57BL/6 mice | Harlan (Indianapolis) | C57BL/6NHsd | |
| Desk light | General Supply | General Supply | |
| Disinfecting wipes | Clorox | B07NV5JMCS | |
| Electric razor | General Supply | General Supply | |
| ELISA kits (mouse IL-1β, IL-6 and TNFα) | Invitrogen | 88-7013, 88-7064, and 88-7324 | |
| Iodine | Dynarex | B003U463PY | PVP Iodine Wipes |
| Ketamine | FORT DODGE | NDC 0856-2013-01 | Amine hydrochloride injection |
| Laboratory scale | General Supply | General Supply | |
| LB Agar, Miller | Fisher Scientific | BP1425-500 | Molecular genetics, powder |
| Micropipette | ErgoOne | 7100-1100 | |
| Normal saline | General Supply | General Supply | |
| Polylined towel | CardinalHealth, Convertors | 3520 | Surgical drape, sterile, for single use only |
| Silk suture, 4-0 | DAVIS & GECK | 1123-31 | |
| Small animal needle holder | General Supply | General Supply | |
| Small animal surgery scissors | General Supply | General Supply | |
| Small animal surgical forceps | General Supply | General Supply | |
| Staphylococcus aureus | ATCC | 13301 | |
| Warm pad | General Supply | General Supply | |
| Xylazine | Alfa Aesar | 7361-61-7 |
Referências
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