बैक्टीरियल रोगजनकों के खिलाफ Immunological प्रतिक्रियाओं का आकलन करने के लिए Opsonophagocytic हत्या परख
Summary
इस ऑप्सोनोफेगोसाइटिक हत्या परख के लिए भगोसाइटिक प्रतिरक्षा कोशिकाओं की क्षमता की तुलना करने के लिए जवाब और विभिंन उपचार और/ Classically, इस परख opsonin के रूप में एक जीवाणु के खिलाफ उठाया एंटीबॉडी के effector कार्यों का आकलन करने के लिए सोने के मानक के रूप में कार्य करता है ।
Abstract
प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के एक प्रमुख पहलू को मेजबान के बैक्टीरियल उपनिवेशन के लिए phagocytosis है । एक ऑप्सोनोफेगोसाइटिक हत्या परख (OPKA) एक प्रायोगिक प्रक्रिया है जिसमें भक्षकाणु कोशिकाओं बैक्टीरियल इकाइयों के साथ सह-सभ्य हैं । प्रतिरक्षा कोशिकाओं phagocytose और एक पूरक निर्भर तरीके से जीवाणु संस्कृतियों को मार डालेगा । प्रतिरक्षा-मध्यस्थता कोशिका हत्या की दक्षता कारकों की एक संख्या पर निर्भर है और कैसे विभिन्न बैक्टीरिया संस्कृतियों कोशिका मौत के प्रतिरोध के संबंध में तुलना निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । इस तरह, संभावित प्रतिरक्षा आधारित चिकित्सा विज्ञान की प्रभावकारिता विशिष्ट बैक्टीरियल उपभेदों और/या serotypes के खिलाफ मूल्यांकन किया जा सकता है । इस प्रोटोकॉल में, हम एक सरलीकृत OPKA का वर्णन है कि बुनियादी संस्कृति की स्थिति और सेल को सह के बाद बैक्टीरियल सेल व्यवहार्यता का निर्धारण करने के लिए गिनती का इस्तेमाल-उपचार शर्तों और HL-६० प्रतिरक्षा कोशिकाओं के साथ संस्कृति । इस विधि का सफलतापूर्वक विभिन्न न्यूमोकोकल सेरोटाइप, कैप्सूलर और अकास्लर उपभेदों, और अन्य जीवाणु प्रजातियों के साथ उपयोग किया गया है । इस OPKA प्रोटोकॉल के लाभ अपनी सादगी, बहुमुखी प्रतिभा है (के रूप में इस परख opsonins के रूप में एंटीबॉडी उपचार के लिए सीमित नहीं है), और समय और अभिकर्मकों के ंयूनतम करने के लिए बुनियादी प्रयोगात्मक समूहों का आकलन ।
Introduction
ऑप्सोनोफैगोसाइटिक हत्या परख (OPKA) बैक्टीरियल संरचना या प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और समारोह में बाद में परिवर्तन के लिए समारोह में परिवर्तन को जोड़ने के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण है । जैसे, यह अक्सर एक पूरक परख एंटीबॉडी उपचार, वैक्सीन उंमीदवारों, एंजाइम अनुकूलन, आदि के प्रतिरक्षा आधारित प्रभावकारिता निर्धारित करने के रूप में प्रयोग किया जाता है जबकि vivo assays में एक जीवाणु संक्रमण मॉडल में प्रभावी मंजूरी या सुरक्षा निर्धारित करने के लिए आवश्यक हैं, OPKA को सबसे बुनियादी घटकों में बैक्टीरियल कोशिका मौत के लिए प्रतिरक्षा योगदान का आकलन किया जा सकता है: बैक्टीरिया, प्रतिरक्षा कोशिकाओं, और प्रयोगात्मक उपचार. पिछले अध्ययनों से पता चला है कि opkas और संशोधित किया जा सकता है बैक्टीरिया और serotypes की एक किस्म के लिए इस्तेमाल किया, streptococcus निमोनियासहित1, staphylococcus2, स्यूडोमोनस aeruginosa3। इसके अलावा, इन अनुकूलित assays के लिए एक एंजाइम की क्षमता के लिए और अधिक सुलभ करने के लिए पूरक-मध्यस्थता प्रतिरक्षा कोशिकाओं4 और एंटीबॉडी उपचार में सुधार करने के लिए बनाने के लिए सहित विभिन्न प्रायोगिक उपचार, का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता opsonization5. प्रतिष्ठित, opka परख सफलतापूर्वक रोगज़नक़ द्वारा प्रेरित सुरक्षा के लिए एक शक्तिशाली संकेतक के रूप में बुनियादी और नैदानिक अनुसंधान सेटिंग्स में इस्तेमाल किया गया है विशिष्ट एंटीबॉडी6,7,8,9 .
प्रतिरक्षा कोशिकाओं के विभिन्न प्रकार opsonophagocytic हत्या के आकलन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । एक आम तौर पर इस्तेमाल किया भक्षकाण्विक जनसंख्या HL-६० मानव ल्यूसेमिक सेल लाइन है । इस सेल लाइन संस्कृति में निष्क्रिय promyelocytes के रूप में रखा जा सकता है; हालांकि, वे विभिंन दवा उपचार10,11के माध्यम से विभिंन सक्रिय राज्यों में विभेदित किया जा सकता है । N के साथ HL60 के उपचार, N-dimethylformamide मजबूत भकोसिटिक गतिविधि11के साथ सक्रिय न्यूट्रोफिल में सेल लाइन differentiates. जबकि HL-६० कोशिकाओं को अनुकूलित किया गया है और अक्सर इन phagocytosis के लिए इस्तेमाल किया जाता है10assays, अंय प्राथमिक polymorphonuclear ल्यूकोसाइट्स प्रयोग12के प्रतिरक्षा हाथ के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है ।
इसके अतिरिक्त, इन assays13 या बहुसंकेतित14 सरलीकृत किया जा सकता है बैक्टीरिया के कई एंटीबायोटिक प्रतिरोधी उपभेदों को देखने के लिए परीक्षण किया जा करने के लिए । बहुसंकेतित विधि को सॉफ्टवेयर के विकास के माध्यम से अधिक व्यवहार्य बनाया गया है जो एक आगर प्लेट15पर बैक्टीरिया कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (सीएफयूएस) को कुशलतापूर्वक गिन सकता है । यहां, हम एक सुव्यवस्थित विधि का वर्णन एक जीवाणु तनाव का उपयोग कर, HL-६० कोशिकाओं, बेबी खरगोश पूरक, और रक्त आगर प्लेटें । इस विधि के साथ, कई उपचार जल्दी कैसे बैक्टीरियल संक्रमण के लिए सहज प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया modulated किया जा सकता है पर विशिष्ट अनुसंधान सवाल पता करने के लिए मूल्यांकन किया जा सकता है ।
Protocol
Representative Results
Discussion
Opkas एंटीबॉडी मध्यस्थता प्रतिरक्षा6,8टीकाकरण द्वारा प्रेरित प्रतिक्रियाओं का आकलन करने में आवश्यक भूमिकाओं की सेवा । इस सरलीकृत OPKA का मुख्य महत्व है (यानी, एंटीबॉडी, एंजाइम उपचार, आ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम डॉ चांद Nahm (अलबामा बर्मिंघम के विश्वविद्यालय) हमारी प्रयोगशाला में OPKA assays की स्थापना में उनकी अमूल्य सहायता के लिए धंयवाद । इस कार्य को राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान द्वारा सहायता प्रदान की गई थी, जो FYA के लिए 1R01AI123383-01A1 है ।
Materials
| Annexin V (APC conjugated) | BioLegend | 640919 | |
| anti-CD35, human (PE conjugated) | BioLegend | 333405 | |
| anti-CD71, human (PE conjugated) | BioLegend | 334105 | |
| bacterial strain to be used (ie, Streptococcus pneumoniae, WU2) | Bacterial Respiratory Reference Laboratory (Dr. Moon Nahm) | ||
| blood agar plates | Hardy Diagnostic | A10 | |
| Fetal Clone serum | HyClone | SH30080.03 | |
| glycerol | Sigma | G9012-1L | |
| HL-60 cells | ATCC | CCL-240 | |
| IgG Isotype Control (PE conjugated) | BioLegend | 400907 | |
| N,N-dimethylformamide (DMF) | Fisher Chemical | UN2265 | |
| propidium iodide | Sigma | P4864 | |
| RPMI media with L-glutamine | Corning | 10-040-CV |
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