Kromojenik In situ hybridization HPV Ile Ilgili baş ve boyun kanseri tanısı için bir araç ss
Summary
Human papilloma virüsü (HPV) RNA kromojenik in situ hibridizasyon tümörlerde aktif insan papilloma virüsü Enfeksiyon algılama için altın standartlarından biri olarak kabul edilir. HPV E6-E7 mRNA ifadesinin lokalizasyonu ve sinyalinin seminiceliksel değerlendirilmesi ile görselleştirilmesini sağlar.
Abstract
Human papilloma virüsü (HPV) enfeksiyonu, alkol ve tütün ile ilgili opscc ‘den daha iyi bir sonuç ile ilişkili olma eğilimindedir Orofaringeal skuayöz Hücre Karsinomu (opscc) bir alt türü için önemli bir risk faktörüdür. HPV viral RNA ‘nın kromojenik in situ hibridizasyon (cish), Onkojenik proteinlerin E6 ve E7 viral transkriptlerinin yarı niceliksel değerlendirilmesi ve iyi bir uzamsal çözünürlüğe sahip bir in situ görselleştirme sağlar. Bu teknik, tümör HPV enfekte hücrelerde HPV transkripsiyon görselleştirme ile aktif bir enfeksiyon tanısı sağlar. Bu tekniğin bir avantajı, tümörle bitişik olmayan neoplastik HPV enfekte hücrelerden kontaminasyondan kaçınmak. Genel olarak, iyi tanı performansları aktif HPV enfeksiyon tanımlaması için altın standardı olarak kabul etmiştir. Hücre proteinleri ile E6 ve E7 viral protein etkileşiminin sorun ve p53 için zorunlu olduğu için, HPV RNA cısh işlevsel olarak ilgilidir ve aktif Onkojenik HPV enfeksiyonunu akut yansıtır. Bu teknik, “düşük” veya “yüksek” HPV transkripsiyon düzeylerinin HPV ile ilgili P16 pozitif baş ve boyun kanseri hastalarında iki prognoz grubunun tanımlanmasına yardımcı olduğu için klinik olarak da ilgilidir. Burada, üreticiden elde edilen bir kit ile formalin-fixed parafin-Embedded (FFPE) slaytlarında gerçekleştirilen manuel HPV RNA CıSS protokolünü sunuyoruz. Kromojenik vahiy yerine, RNA içinde situ hibridizasyon da floresan Vahiy (RNA balık) ile yapılabilir. Ayrıca konvansiyonel immünostasyon ile birlikte olabilir.
Introduction
HPV RNA CıSH, orofarenks veya uterus serviks gibi çeşitli konumlarda benign veya malign lezyonlarda önemli olabilecek aktif HPV enfeksiyonunun tespiti için güçlü bir araçtır. Aktif bir HPV enfeksiyonunun tespiti, HPV kaynaklı bir lezyonun tanısını destekleyebilir ve böylece tedavi ve prognozunu etkileyebilir.
HPV en sık cinsel yolla bulaşan enfeksiyondur ve 100 ‘ den fazla viral genotip1tanımlanmıştır. Şematik olarak, genotiplerde 6 ve 11 gibi düşük riskli genotipler, genital siğiller, tekrarlayan solunum papillomatozu ve diğer benign lezyonlara neden olduğu bilinmektedir, ancak en servikal kanserlerden 16 ve 18 genotip gibi yüksek riskli genotipler de sorumludur ve anal kanserler ve bölgesel epidemiyolojik veri2tarafından muhasebeleştirilir olarak değişken oranlarda hnscc onkogeninde rol oynar.
HPV enfeksiyonunun algılanması için çeşitli araçlar mevcuttur. Yüksek riskli HPV enfeksiyonu, E6 ve E73‘ ün viral Onkojenik proteinlerinin ifadesine yol açtıkları Için, E6 ve E7 transkriptlerinin tespiti, aktıf HPV enfeksiyon tanımlaması için altın standart olarak yaygın olarak görülebilir4. HPV RNA CıSH, çeşitli HıPV ile ilgili hastalıklardan muzdarip hastalarından oldukça kolay elde edilen FFPE örneklerinde gerçekleştirilebilir. Performansı, serviks, anüs ve vajinanın içinde Skuam intraepitelyal neoplazisinde ve serviks, anüs ve üst Aerodigestive yolu5‘ te invazif skuanöz hücre karsinomunda değerlendirildi:% 98 ‘ den fazla duyarlılık elde etti HPV DNA polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) arasında-pozitif durumlarda. Bu biraz daha iyi P16 immünostat (93%) ve HPV DNA In situ hibridizasyon (DNA ISH: 97%), daha yaygın olarak kullanılır. 57, baş ve boyun bölgesinden kaynaklanan Skuam Hücre Karsinomu (SCC), HPV DNA ıSH ile karşılaştırıldığında genital bölge, cilt ve idrar yollarının başka bir kohort, HPV RNA CıSH daha iyi duyarlılık elde (100% karşı 88%) ve özgüllük (% 87 karşı 74%)6.
P16 immünostasyon HPV enfeksiyonu tarafından (ancak sadece) neden olabilir hücre döngüsü bozulması yansıtan dolaylı bir işaretidir4,7. Bu uygun maliyetli test iyi duyarlılık ve negatif tahmin değeri vardır ve orofarenks kanserinde yüksek riskli HPV enfeksiyonu bir vekil Marker olarak tavsiye edilir (OPC) tarafından Amerikan patologlar Koleji (CAP) ve Birliği tarafından Uluslararası Kanser kontrolü (UıCC)8.
Bu yazıda yalnızca HNSCC ‘de HPV ‘nin saptanmasına odaklanmasına karşın, HPV RNA CıSH, HPV enfeksiyonu içeren diğer çeşitli koşullarda klinik olarak ilgilidir. Örneğin, bu teknik, morfolojik olarak belirsiz vakalar için serviks (LSIL, önceden servikal intraepitelyal neoplazi, Grade 1 [CıN1] olarak bilinen) düşük dereceli skuayöz intraepitelyal lezyonların tanısı doğruluğunu artırabilir9. Orofaringeal SCC ile ilgili olarak, HPV RNA cısh HPV ilişkili SCC tanımlaması sağlar, HPV ilgisiz orofarengeal SCC TNM sınıflandırması baş ve boyun kanseri son sekizinci baskısında farklı olarak etiketli (Uluslararası Kanser Birliği Kontrol [UıCC])10. HPV ile ilgili SCC daha uzun hayatta kalma ve gelişmiş radyoterapi ve HPV ilgisiz SCC11,12,13daha kemoterapi hassasiyeti ile daha iyi bir prognoz sergilediği için, HPV enfeksiyonu tespiti hasta yönetimi14,15. Ayrıca HPV RNA CıSH, HPV ile ilgili multiphenotipfik sinonazal karsinoma tanısı için HPV DNA CıSH16‘ dan daha yüksek sinyalle kullanılabilir. Birden çok değişkenli analizler, E6 ve E7 transkriptlerinin algılanması, Orofaringeal SCC genel olarak7,15,17,18 ve en iyi prognoz ile ilişkilidir. P16-pozitif orofarengeal SCC19,20alt grubu.
Burada, üreticiden elde edilen bir kit ile FFPE slaytlarında gerçekleştirilen manuel HPV RNA CıSH protokolünü sunuyoruz.
Protocol
Representative Results
Discussion
Satın alınan bir kit ile gerçekleştirilen HPV RNA CıSH, viral transkriptlerin tespiti için güçlü bir araçtır ve aktif HPV enfeksiyonu gösterir. El ile gerçekleştirilen, protokolün adımları genel olarak kolaylıkla takip edilir ve satın alınan Kit uygundur. Bu teknik, bir kerede 19 histolojik numune artı bir kontrol slayt boyama sağlar ve tahlil etrafında sürer 8 h. Aksi belirtilmediği sürece örnekleri adımları arasında kuru izin vermek için önemli değildir. Ön tedavi koşulu işlenmiş do…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar Hopital Européen Georges Pompidou ve Necker (Laurianne Chambolle, Elodie Michel ve Gisèle Legall) patolojisi bölümüne teşekkür; PARCC, Hopital Européen Georges Pompidou (Corinne Lesaffre) Histoloji platformu; Virginia Clark dil düzenleme için; Onun katkısı için Alexandra Elbakyan.
Materials
| Hematoxylin solution, Gill No. 1 | Merck | GHS132 | |
| HybEZ Oven (110v) | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 321710 | |
| HybEZ slide rack | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 300104 | |
| ImmEdge Hydrophobic Barrier Pen | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 310018 | |
| RNAscope 2.5 HD Detection Reagents-BROWN | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 322310 | This kit includes amplification reagents AMP1, AMP2, AMP3, AMP4, AMP5 and AMP6, and detection reagents DAB-A and DAB-B |
| RNAscope 3-Plex Negative Control Probe | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 320871 | DAPB |
| RNAscope 3-Plex Positive Control Probe | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 320861 | PPIB |
| RNAscope H202 & Protease Plus Reagent | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 322330 | Hydrogen Peroxyde x2 and Protease Plus x 1 |
| RNAscope Probe- HPV16/18 | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 311121 | |
| RNAscope Target Retrieval Reagents | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 322000 | |
| RNAscope Wash Buffer Reagents | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 310091 | Wash Buffer 50X x4 |
Referências
- Lowy, D. R., Schiller, J. T. Reducing HPV-associated cancer globally. Cancer Prevention Research.(Philadelphia, PA). 5 (1), 18-23 (2012).
- Laban, S., Hoffmann, T. K. Human Papillomavirus Immunity in Oropharyngeal Cancer: Time to Change the Game?. Clinical Cancer Research. 24 (3), 505-507 (2018).
- Wiest, T., Schwarz, E., Enders, C., Flechtenmacher, C., Bosch, F. X. Involvement of intact HPV16 E6/E7 gene expression in head and neck cancers with unaltered p53 status and perturbed pRb cell cycle control. Oncogene. 21 (10), 1510-1517 (2002).
- Ndiaye, C., et al. HPV DNA, E6/E7 mRNA, and p16INK4a detection in head and neck cancers: a systematic review and meta-analysis. The Lancet Oncology. 15 (12), 1319-1331 (2014).
- Mills, A. M., Dirks, D. C., Poulter, M. D., Mills, S. E., Stoler, M. H. HR-HPV E6/E7 mRNA In Situ Hybridization. The American Journal of Surgical Pathology. 41 (5), 607-615 (2017).
- Mendez-Pena, J. E., Sadow, P. M., Nose, V., Hoang, M. P. RNA chromogenic in situ hybridization assay with clinical automated platform is a sensitive method in detecting high-risk human papillomavirus in squamous cell carcinoma. Human Pathology. 63, 184-189 (2017).
- Mirghani, H., et al. Diagnosis of HPV driven oropharyngeal cancers: Comparing p16 based algorithms with the RNAscope HPV-test. Oral Oncology. 62, 101-108 (2016).
- Lewis, J. S., et al. Human Papillomavirus Testing in Head and Neck Carcinomas: Guideline From the College of American Pathologists. Archives of Pathology & Laboratory Medicine. 142 (5), 559-597 (2018).
- Mills, A. M., Coppock, J. D., Willis, B. C., Stoler, M. H. HPV E6/E7 mRNA In Situ Hybridization in the Diagnosis of Cervical Low-grade Squamous Intraepithelial Lesions (LSIL). The American Journal of Surgical Pathology. 42 (2), 192-200 (2018).
- El-Naggar, A., Chan, J. K. C., Grandis, J. R., Takata, T., Slootweg, P. J. . WHO Classification of Head and Neck Tumours. , (2017).
- Ang, K. K., et al. Human papillomavirus and survival of patients with oropharyngeal cancer. The New England Journal of Medicine. 363 (1), 24-35 (2010).
- Badoual, C., et al. PD-1-expressing tumor-infiltrating T cells are a favorable prognostic biomarker in HPV-associated head and neck cancer. Pesquisa do Câncer. 73 (1), 128-138 (2013).
- Outh-Gauer, S., et al. Immunotherapy in head and neck cancers: a new challenge for immunologists, pathologists and clinicians. Cancer Treatment Reviews. 65, 54-64 (2018).
- Mirghani, H., et al. Diagnosis of HPV-driven head and neck cancer with a single test in routine clinical practice. Modern Pathology. 28 (12), 1518-1527 (2015).
- Bishop, J. A., et al. Detection of Transcriptionally Active High-risk HPV in Patients With Head and Neck Squamous Cell Carcinoma as Visualized by a Novel E6/E7 mRNA In Situ Hybridization Method. The American Journal of Surgical Pathology. 36 (12), 1874-1882 (2012).
- Hsieh, M. -. S., Lee, Y. -. H., Jin, Y. -. T., Huang, W. -. C. Strong SOX10 expression in human papillomavirus-related multiphenotypic sinonasal carcinoma: report of 6 new cases validated by high-risk human papillomavirus mRNA in situ hybridization test. Human Pathology. 82, 264-272 (2018).
- Shi, W., et al. Comparative Prognostic Value of HPV16 E6 mRNA Compared With In Situ Hybridization for Human Oropharyngeal Squamous Carcinoma. Journal of Clinical Oncology. 27 (36), 6213-6221 (2009).
- Kuo, K. -. T., et al. The biomarkers of human papillomavirus infection in tonsillar squamous cell carcinoma—molecular basis and predicting favorable outcome. Modern Pathology. 21 (4), 376-386 (2008).
- Augustin, J., et al. Evaluation of the efficacy of the four tests (p16 immunochemistry, PCR, DNA and RNA In situ Hybridization) to evaluate a Human Papillomavirus infection in head and neck cancers: a cohort of 348 French squamous cell carcinomas. Human Pathology. , (2018).
- Jung, A. C., et al. Biological and clinical relevance of transcriptionally active human papillomavirus (HPV) infection in oropharynx squamous cell carcinoma. International Journal of Cancer. 126 (8), 1882-1894 (2009).
- Augustin, J., et al. HPV RNA CISH score identifies two prognostic groups in a p16 positive oropharyngeal squamous cell carcinoma population. Modern Pathology. , (2018).
- Evans, M. F., et al. HPV E6/E7 RNA In Situ Hybridization Signal Patterns as Biomarkers of Three-Tier Cervical Intraepithelial Neoplasia Grade. PLOS ONE. 9 (3), e91142 (2014).
- Dreyer, J. H., Hauck, F., Oliveira-Silva, M., Barros, M. H. M., Niedobitek, G. Detection of HPV infection in head and neck squamous cell carcinoma: a practical proposal. Virchows Archiv. 462 (4), 381-389 (2013).
- Bingham, V., et al. RNAscope in situ hybridization confirms mRNA integrity in formalin-fixed, paraffin-embedded cancer tissue samples. Oncotarget. , (2017).
