Uso de um acelerador linear para realização de experimentos de radiobiologia in vitro

Resumo

Aceleradores lineares clínicos podem ser usados para determinar os efeitos biológicos de uma ampla gama de taxas de dose em células cancerosas. Nós discutimos como estabelecer um acelerador linear para os ensaios e os ensaios Cell-Based para o cancro Stem-como as pilhas crescidas como tumorspheres na suspensão e nas linhas de pilha crescidas como culturas aderentes.

Resumo

A radioterapia continua sendo uma das pedras angulares do manejo do câncer. Para a maioria de cancros, é a terapia a mais eficaz, Nonsurgical aos tumores do resseca. Aqui, descrevemos um método para irradiar células cancerosas com um acelerador linear. O avanço da tecnologia de acelerador linear melhorou a precisão e eficiência da radioterapia. Os efeitos biológicos de uma ampla gama de doses de radiação e taxas de dose continuam a ser uma área intensa de investigação. O uso de aceleradores lineares pode facilitar esses estudos usando doses clinicamente relevantes e taxas de dose.

Introdução

A radioterapia é um tratamento efetivo para muitos tipos de câncer^1,2,3,4. A irradiação da taxa de dose elevada extra é relativamente nova na terapia de radiação e é feita possível por avanços tecnológicos recentes em aceleradores lineares⁵. As vantagens clínicas da taxa de dose extra elevada sobre a irradiação padrão da taxa de dose incluem o tempo encurtado do tratamento e a experiência paciente melhorada. Aceleradores lineares também fornecem um cenário clínico para estudos de biologia de radiação baseada em cultur....

Protocolo

1. preparação da pilha para a cultura da pilha da suspensão

1. Glioma da cultura Stem-como pilhas em meios de cultura da pilha de haste em aproximadamente 5 x 10⁶ placas da pilha/10 cm em uma incubadora da cultura de pilha com 5% co₂, umidade relativa de 95% em 37 ° c.
   Observação: a condição de cultura de célula é a mesma em todos os procedimentos. A mídia usada no protocolo são mídia completa.
2. Dois dias antes da irradiação programada, colete a glioma haste-como pilhas da placa da cultura com uma pipeta estéril de 5 mL em um tubo de centrifugação de 15 mL em uma capa da cultura.
3. Centrifugue as pilhas coletadas em 200....

Resultados

Para investigar o efeito do ciclo celular da taxa de dose padrão e da irradiação da taxa de dose extra alta por um acelerador linear, três amostras de glioma Stem-como pilhas foram preparadas usando este protocolo e coletadas 24 h após a irradiação¹⁷: uma amostra de controle que não foi irradiada (Figura 2a), uma amostra IRRADIADA com 400 MU/min (unidade monitor, 4,2 GY/min taxa de dose padrão, Figura 2B).......

Discussão

A radioterapia é parte integrante do manejo do câncer. Os esforços contínuos procuram melhorar a eficácia e a eficiência do tratamento de radiação. Os avanços na tecnologia de acelerador linear têm proporcionado a oportunidade de tratar pacientes com precisão e segurança sem precedentes. Como a maioria dos pacientes é tratada com raios-X de alta energia de aceleradores lineares, estudos que examinam os efeitos biológicos de uma grande variedade de taxas de dose executadas em aceleradores lineares podem ser prontamente ap.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Material
glioma célula-tronco 387			presente do Dr. Jeremy Rich
293 células	ATCC	CRL-1573
meio de cultura de células-tronco de neurônios	Thermo Fisher Scientific	21103049	NeurobasalTM DMEM
	Thermo Fisher Scientific	10569044
Soro bovino fetal	Thermo Fisher Scientific	16000044
penicilina/estreptomicina	Thermo Fisher Scientific	15140-122
Proteína EGF humana recombinante	R & D Systems	236-EG-01M
R & Básico de FGF Humano Recombinante	D Systems	4114-TC-01M
B-27™ Suplemento	Thermo Fisher Scientific	17504044
Pirovato de Sódio	Thermo Fisher Scientific	11360070
L-Glutamina	Thermo Fisher Scientific	25030164
Tripsina-EDTA	Thermo Fisher	25200056
matriz de proteção extracelular	Corning	354277	MatrigelTM
Etanol	Fisher químico	A4094
Equipamento
10 cm placa de cultura de células	Denville	T1110
3,5 cm placa de cultura de células	USA Scientific Inc.	CC7682-3340
22x22mm lamínula de vidro	microscopia eletrônica sciences	72210-10
Tubo de centrífuga de 15 ml	Thomas Scientific	1159M36
Tubo de centrífuga de 50 ml	Thomas Scientific	1158R10
Pipeta de 5 ml	Fisher Scientific	14-955-233
pipeta auxiliar	Fisher Scientific	13-681-06
Misturador de vórtice	Fisher Scientific	02-215-414
Centrífuga	Eppendorf	5810R
Acelerador Linear	Varian	n/a
material equivalente em água	Sun Nuclear corporation	557	Água sólidaTM
Preparação de reagentes
Meio DMEM	10% soro fetal bovino (FBS), 2 mM L-glutamina, 100 unidades/mL de penicilina G, 100 µ g/mL de estreptomicina em 500 ml de meio
cultura de células-tronco	10 ml de suplemento B27, 20 µ g hFGF, 20 µ g hEGF, 2 mM L-glutamina, 100 unidades/mL de penicilina G, 100 µ g/mL de estreptomicina em 500 ml de meio

DMEM de neurobasal