マウスにおけるアピカル歯年理炎の誘導
Summary
ここで、マウスにおいて局所的に頂点歯状炎を誘導するプロトコルを提示する。マウスの歯に穴を開け、パルプを露出させ、局所的な炎症を引き起こす方法を示します。また、マイクロCTや組織学など、この炎症の性質を調べるための分析方法も実証されている。
Abstract
局所誘発性炎症に関与するメカニズムは、いくつかの利用可能な動物モデルを使用して研究することができる。これらの1つは、頂点歯状炎(AP)の誘導である。頂点歯周炎は、歯根を取り囲む歯周組織における炎症性の一般的な病理である。この病理の性質およびメカニズムをよりよく理解するためには、マウスで手順を実行することが有利である。この歯髄の炎症の誘導は、歯髄が露出するまでマウス歯に穴を開けることによって達成される。次に、歯パルプは、時間の経過とともに自然な口腔細菌叢によって汚染され続け、頂点歯状炎を引き起こす。この期間の後、動物を犠牲にし、歯と顎の骨を様々な方法で分析することができます。典型的な分析には、マイクロCTイメージング(骨吸収を評価する)、組織染色、免疫組織化学、RNA発現が含まれます。このプロトコルは、均一な条件を有するインインインインインインバイオ実験環境におけるこの炎症過程をよりよく理解するために、口腔生物学の分野における研究に有用である。この手順は、マウスと単離された顎の慎重な処理を必要とし、技術の視覚的なデモンストレーションが有用である。誘導されたアピカル歯全歯炎およびマウスモデルにおけるその特徴を引き起こした手順のすべての技術的側面が実証される。
Introduction
この方法の目的は、天然微生物叢で頂点を汚染することにより、マウスの頂点歯状炎を誘導し、その後、この病理学的プロセスの様々な特性を研究することである。
頂点歯周炎(AP)は、歯根を取り囲む歯周組織における炎症性の一般的な病理である。この歯科疾患は重度の痛みを引き起こす可能性があり、歯科医によって治療されなければなりません。治療オプションには、根管治療(一次または二次)、内因性手術、歯の抽出、または臨床および放射線学的所見に応じてフォローアップ、および臨床医の意見が含まれます。この炎症過程のメカニズムは、数十年にわたって研究されたが、1、2、3は、まだ包括的に理解されていない。この病理の重症度を考慮すると、その根本的な性質に取り組む研究の必要性は明らかである。したがって、APの研究が可能なシステムは、大きな科学的関心を持っている。
APは局所組織と免疫系を含む複雑な病理学的プロセスであるため、インビトロ研究はプロセスを完全に理解するには不十分です。この疾患の臨床サンプルの研究はまた、異なる人々と異なる臨床段階4、5との間の倫理的な制限と有意な変動性のために問題であり、したがって、生体内モデルの必要性。これらのモデルは、歯髄を汚染にさらし、体の炎症反応を周期組織6,7のこの刺激に観察するという概念に基づいている。生体内モデルで一般的には、げっ歯類または犬などの大型動物が含まれる。ミニチュア歯を持つ非常に小さな動物であるマウスの治療における臨床的課題にもかかわらず、マウスモデルの利点は重要です:実際には、マウスを使用することは、施設の面で技術的に簡単であり、最も費用対効果が高く、科学的に、マウスは容易に入手可能な遺伝的および分子ツールとよく研究されたゲノムを持つよく研究された動物モデルです。実際、以前の研究では、炎症性および骨吸収シグナルおよび頂点歯状炎に関与する細胞を研究するためのマウスモデルを使用し、8、9、10、11。したがって、AP の研究にマウス モデルを使用する方法に関する明確なプロトコルが必要です。ここでは、このようなプロトコルについて説明します。
ここで説明するプロトコルは、ノックアウト(KO)マウスを研究し、特定の遺伝子の欠如が歯の炎症7、12にどのように影響するかを学ぶのに適しているという大きな利点を有する。このプロトコルの他の有用な応用は、薬物および全身性状態の研究が頂点歯止炎13の発症に及ぶ、顎の骨壊死の発症に対する頂点歯状炎の影響14を含む。,骨再生のための15および幹細胞療法16.
このプロトコルはまた、局所炎症を研究するためのモデルとして一般化することができる。炎症過程を研究するために、いくつかのマウスモデルが開発されており、例えば誘発大腸炎または関節炎17、18を含む。これらのモデルは全身効果があり、同じ動物に組み込みの制御を持っていない。炎症のない逆対性コントロールを含む誘発性頂点歯膜炎のモデルは、これらの制限14、19を克服する利点を有する。
したがって、以下に説明するプロトコルは、局所的な炎症過程に興味を持っている研究者のために有用である。この炎症の制御された性質、特定の場所へのその閉じ込め、および反対の制御歯はすべて、このプロセスに関与するメカニズムを研究するためにこのプロトコルを貴重なものにする。さらに、このプロトコルは、周期的な炎症の臨床的側面に興味を持つ研究者にとって有用である。マウスモデルは、疾患の異なる変数を研究するのに理想的であり、マウスモデルにおいて容易に遺伝子操作を行うことができるという利点に加えて、周期的な炎症における特定の遺伝子の活性を調べることができる。
技術的には、臨床手順は、マウスの歯の小さな寸法のために行うことが困難です。位置、必要な機器、およびパフォーマンスについて学ぶために、この手順を視覚化することが有益です。
Protocol
Representative Results
Discussion
マウスにおける頂点歯状炎の誘導に関する方法をここで紹介する。この方法の目的は、この炎症過程のメカニズムおよび結果を研究するための頂点歯状炎の状態を利用することです。アピカル歯全歯炎は、6〜8週齢のマウスで誘発され、根が完全に発達した年齢24である。このモデルで頂点歯膜炎を引き起こすために、マウスの顎臼歯の歯パルプは、歯のバリを使?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
オデッド・ヘイマン博士が動物の位置決めを手伝ってくれることを認め、ラファエル・リーバーがマイクロCT解析を手伝い、そして実験の前に助言を求めるアンディアラ・デ・ロッシ・ダルデガン教授に謝りたい。また、シドニー・コーエン博士の批判的な読み取りと編集についても認め申し上げ上げ、お知り申し上げ上げください。
この研究は、イザドール・I・カバコフ研究基金からMKとIAへの助成金、イスラエル科学技術省からEGへのイツァク・ナボン・フェローシップによって支援されました。
Materials
| Atipamezole hydrochloride | Eurovet Animal Health | CAS 104075-48-1 | |
| ATR | dentsply | tecnika | |
| blocking machine | Leica | EG1150H | |
| buprenorphine | vetmarket | 163451 | |
| clinical microscope/binocular | Olympus | Sz61 | |
| dental bur | Komet dental | ZR8801L 315 008 | |
| dental spatula | Premier | 1003737 | |
| EDTA | J.T Baker | 8993 | |
| entelan | mercury | 1.07961 | |
| Eosin Y solution, alcoholic | SIGMA | HT110116 | |
| hematoxylin solution, Mayer's | SIGMA | MHS 16 | |
| Ketamine hydrochloride | Vetoquinol | CAS 1867-669 | |
| Medetomidine hydrochloride (cepetor) | CP-pharma GmbH | CAS 86347-15-1 | |
| Mepivacaine HCl 3% | Teva | CAS 96-88-8 | |
| microbrushes- adjustable precision applicators | PARKELL | S379 | |
| micro-ct scanner | scanco | uCT 40 | |
| parafin | Leica | 39602004 | |
| PBS | SIGMA | D8537 | |
| PFA | EMS | 15710 | |
| Chloramphenicol eye ointment (5%) | Rekah pharmaceutical | CAS 56-75-7 | |
| tweezers | WAM | Ref-CT | |
| xylazine | Eurovet Animal Health | CAS 7361-61-7 | |
| xylene | Gadot | CAS 1330-20-7 |
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