هنا، نقدم بروتوكول للحث محليا ً على وجود فُبر الأوبيفي في الفئران. نعرض كيفية حفر ثقب في سن الماوس وفضح اللب، من أجل التسبب في التهاب محلي. كما يتم عرض طرق التحليل للتحقيق في طبيعة هذا الالتهاب، مثل التصوير المقطعي المحوسب الدقيق وعلم الأنسجة.
يمكن دراسة الآليات التي تنطوي عليها الالتهاب المستحث المحلي باستخدام العديد من النماذج الحيوانية المتاحة. واحدة من هذه هي تحريض من أمراض اللثة apical (AP). التهاب اللثة Apical هو مرض شائع من طبيعة التهابية في أنسجة اللثة المحيطة جذر الأسنان. من أجل فهم أفضل لطبيعة وآلية هذا المرض فمن المفيد لتنفيذ الإجراء في الفئران. يتم تحقيق الحث على هذا الالتهاب odontogenic عن طريق الحفر في سن الماوس حتى يتعرض لب الأسنان. بعد ذلك، لا يزال لب الأسنان عرضة للتلوث بالنباتات الفموية الطبيعية مع مرور الوقت، مما تسبب في إصابة اللثة. بعد هذه الفترة الزمنية ، يتم التضحية بالحيوان ، ويمكن تحليل الأسنان وعظم الفك بطرق مختلفة. وتشمل التحليلات النموذجية التصوير المقطعي المحوسب الدقيق (لتقييم ارتشاف العظام)، وتلطيخ النسيج، والكيمياء المناعية، والتعبير عن الحمض النووي الريبي. هذا البروتوكول مفيد للبحوث في مجال البيولوجيا عن طريق الفم لفهم أفضل هذه العملية الالتهابية في بيئة تجريبية في الجسم الحي مع ظروف موحدة. يتطلب الإجراء التعامل الدقيق مع الفئران والفك المعزول، والعرض البصري للتقنية مفيد. يتم عرض جميع الجوانب التقنية للإجراءات المؤدية إلى أمراض اللثة المستحثة وتوصيفه في نموذج الماوس.
والهدف من هذه الطريقة هو الحث على وجود فحولاللثة في الماوس عن طريق تلويث قمة مع البكتيريا الطبيعية ، ومن ثم دراسة مختلف خصائص هذه العملية المرضية.
التهاب اللثة Apical (AP) هو مرض شائع من طبيعة التهابية في أنسجة اللثة المحيطة جذر الأسنان. يمكن أن يسبب هذا المرض الأسنان ألم شديد ويجب أن يعالج من قبل طبيب الأسنان. وتشمل خيارات العلاج علاج قناة الجذر (الابتدائية أو الثانوية)، والجراحة اللبية، واستخراج الأسنان، أو المتابعة اعتمادا على النتائج السريرية والإشعاعية، ورأي الطبيب. آلية هذه العملية الالتهابية ، على الرغم من دراستها لعدة عقود1،2،3، لا تزال غير مفهومة بشكل شامل. وبالنظر إلى شدة هذا المرض ، هناك بالتالي حاجة واضحة للبحوث التي تعالج طبيعته الأساسية. وبالتالي، فإن النظم التي يمكن فيها دراسة AP تحظى باهتمام علمي كبير.
منذ AP هي عملية مرضية معقدة تنطوي على الأنسجة المحلية والجهاز المناعي، والدراسات في المختبر غير كافية لفهم كامل للعمليات. دراسة العينات السريرية لهذا المرض هي أيضا إشكالية بسبب القيود الأخلاقية والتباين الكبير بين مختلف الناس والمراحل السريرية المختلفة4،5، وبالتالي ضرورة في نماذج الجسم الحي. وتستند هذه النماذج على مفهوم تعريض لب الأسنان للتلوث ومراقبة رد الفعل الالتهابي للجسم لهذا التحفيز في الأنسجة المحيطة6،7. وتشمل النماذج الشائعة في الجسم الحي القوارض أو الحيوانات الأكبر مثل الكلاب. على الرغم من التحدي السريري في علاج الفئران، والتي هي الحيوانات الصغيرة جدا مع أسنان مصغرة، ومزايا نموذج الماوس كبيرة: عمليا، والعمل مع الفئران هو بسيط من الناحية الفنية من حيث المرافق وأكثر فعالية من حيث التكلفة، و من الناحية العلمية، الماوس هو نموذج حيواني مدروس جيدا مع الأدوات الوراثية والجزيئية المتاحة بسهولة والجينوم مدروسة جيدا. في الواقع، استخدمت الدراسات السابقة نموذج الماوس لدراسة إشارات التهابية وارتشاف العظام والخلايا المشاركة في التهاب اللثة apical8،9،10،11. لذلك، هناك حاجة إلى بروتوكول واضح حول كيفية استخدام نموذج الماوس لدراسة AP. هنا، نحن نصف مثل هذا البروتوكول.
البروتوكول الموصوف هنا لديه ميزة كبيرة من كونها مناسبة لدراسة خروج المغلوب (KO) الفئران وتعلم كيف يؤثر عدم وجود جين معين التهاب الأسنان7،12. وتشمل التطبيقات المفيدة الأخرى لهذا البروتوكول دراسة آثار الأدوية والظروف النظامية على تطور التهاب اللثة الapical13، وتأثير التهاب اللثة الأوبيعلى تطور نخر العظم في الفكين14 , 15 والعلاج بالخلايا الجذعية لتجديد العظام16.
ويمكن أيضا تعميم هذا البروتوكول كنموذج لدراسة الالتهاب المحلي. لدراسة العملية الالتهابية ، تم تطوير العديد من نماذج الماوس ، والتي تشمل على سبيل المثال التهاب القولون المستحث أو التهاب المفاصل17،18. هذه النماذج لها آثار نظامية وليس لها سيطرة مدمجة في نفس الحيوان. نماذج لالتهاب اللثة apical المستحثة، والتي تشمل السيطرة المضادة دون التهاب، لديها ميزة التغلب على هذه القيود14،19.
ولذلك فإن البروتوكول الموضح أدناه مفيد للباحثين المهتمين بالعمليات الالتهابية المحلية. الطبيعة الخاضعة للرقابة من هذا الالتهاب، وحبسه إلى موقع معين، والأسنان السيطرة المضادة، وكلها تجعل هذا البروتوكول قيمة لدراسة الآليات التي تنطوي عليها هذه العملية. وعلاوة على ذلك، فإن البروتوكول مفيد للباحثين المهتمين في الجوانب السريرية للالتهاب المحيط. نموذج الماوس مثالية لدراسة متغيرات مختلفة من المرض، بالإضافة إلى ميزة القدرة على إجراء التلاعب اتلاف وراثي بسهولة في نموذج الماوس، للتحقيق في نشاط جينات محددة في التهاب حول اللبأ.
من الناحية الفنية، فإن الإجراء السريري يشكل تحديا لتنفيذ بسبب الأبعاد الصغيرة للأسنان الفئران. سيكون من المفيد تصور هذا الإجراء من أجل معرفة المزيد عن تحديد المواقع، والمعدات اللازمة، والأداء.
يتم إدخال طريقة هنا لتحريض من أمراض اللثة apical في الفئران. والهدف من هذه الطريقة هو استغلال شرط التهاب اللثة apical لدراسة آليات ونتائج هذه العملية الالتهابية. وقد تسبب في أمراض اللثة Apical في الفئران 6-8 أسابيع القديمة، وهو العمر الذي يتم تطوير الجذور بشكل كامل24. من أجل التسب?…
The authors have nothing to disclose.
نود أن نعرب عن تقديرنا للدكتور أويد هيمان لمساعدته في تحديد مواقع الحيوانات، ورافاييل ليبر للمساعدة في تحليل التصوير المقطعي المحوسب الصغير، والبروفيسور أنديارا دي روسي دالديغان للحصول على المشورة بشأن تشكيل التجربة مسبقاً. ونود أيضا أن نعرب عن تقديرنا للدكتور سيدني كوهين للقراءة والتحرير النقديين.
وقد تم دعم هذا العمل بمنحة من صندوق الهبات البحثي للدكتور إيزادور إ. كاباكوف إلى عضو الكنيست وIA، وزمالة إسحاق نافون من وزارة العلوم والتكنولوجيا الإسرائيلية إلى شركة EG.
Atipamezole hydrochloride | Eurovet Animal Health | CAS 104075-48-1 | |
ATR | dentsply | tecnika | |
blocking machine | Leica | EG1150H | |
buprenorphine | vetmarket | 163451 | |
clinical microscope/binocular | Olympus | Sz61 | |
dental bur | Komet dental | ZR8801L 315 008 | |
dental spatula | Premier | 1003737 | |
EDTA | J.T Baker | 8993 | |
entelan | mercury | 1.07961 | |
Eosin Y solution, alcoholic | SIGMA | HT110116 | |
hematoxylin solution, Mayer's | SIGMA | MHS 16 | |
Ketamine hydrochloride | Vetoquinol | CAS 1867-669 | |
Medetomidine hydrochloride (cepetor) | CP-pharma GmbH | CAS 86347-15-1 | |
Mepivacaine HCl 3% | Teva | CAS 96-88-8 | |
microbrushes- adjustable precision applicators | PARKELL | S379 | |
micro-ct scanner | scanco | uCT 40 | |
parafin | Leica | 39602004 | |
PBS | SIGMA | D8537 | |
PFA | EMS | 15710 | |
Chloramphenicol eye ointment (5%) | Rekah pharmaceutical | CAS 56-75-7 | |
tweezers | WAM | Ref-CT | |
xylazine | Eurovet Animal Health | CAS 7361-61-7 | |
xylene | Gadot | CAS 1330-20-7 |