Fareler içinde Apical periodontitis İndükleme
Summary
Burada, yerel olarak farelerde apikal periodontitis teşvik etmek için bir protokol sunuyoruz. Biz nasıl fare diş bir delik matkap ve onun hamuru maruz göstermek, amacıyla lokal inflamasyon neden. Mikro-CT ve histoloji gibi bu inflamasyonun doğasını araştırmak için analiz yöntemleri de gösterilmiştir.
Abstract
Yerel kaynaklı inflamasyona katılan mekanizmalar, mevcut birçok hayvan modeli kullanılarak incelenebilir. Bunlardan biri apikal periodontitis indüksiyonu (AP). Apical periodontitis, diş kökünü çevreleyen periodontal dokularda inflamatuar bir doğanın yaygın bir patolojisidir. Bu patolojinin yapısını ve mekanizmasını daha iyi anlamak için farelerde prosedürü gerçekleştirmek avantajlıdır. Bu odontojenik inflamasyonun indüksiyon diş hamuru maruz kadar fare diş içine sondaj ile elde edilir. Sonra, diş hamuru zaman içinde doğal oral Flora tarafından kontamine maruz kalır, apikal periodontitis neden. Bu süre sonra, hayvan feda edilir ve diş ve çene kemiği çeşitli şekillerde analiz edilebilir. Tipik analizler arasında mikro-CT görüntüleme (kemik reorpsiyonu değerlendirmek), histolojik boyama, immünhistokimya ve RNA ifadesi yer aldı. Bu protokol, oral biyoloji alanında, bu inflamatuar süreci uniform koşullara sahip bir In vivo Deneysel ortamda daha iyi anlamak için araştırma için yararlıdır. Prosedür fareler ve izole çene dikkatli bir şekilde işlenmesi gerekir, ve tekniğin görsel bir gösteri yararlıdır. İndüklenen apikal periodontitis ve bir fare modelinde karakterizasyonu için yol açan prosedürlerin tüm teknik yönleri gösterilmiştir.
Introduction
Bu yöntemin amacı, doğal mikroflora ile Apex kontamine ve daha sonra bu patolojik sürecin çeşitli özelliklerini incelemek için bir fare içinde apikal periodontitis ikna etmektir.
Apical periodontitis (AP), diş kökünü çevreleyen periodontal dokularda inflamatuar bir doğanın yaygın bir patolojisidir. Bu diş hastalığı şiddetli ağrıya neden olabilir ve bir diş hekimi tarafından tedavi edilmelidir. Tedavi seçenekleri arasında kök kanal tedavisi (primer veya ikincil), Endodontik cerrahi, diş çıkarma veya klinik ve radyografik bulgulara bağlı olarak takip ve klinisyen görüşü yer aldı. Bu inflamatuar sürecin mekanizması, birkaç yıl1,2,3için okudu rağmen, hala kapsamlı olarak anlaşılmamıştır. Bu patolojinin şiddetini göz önünde bulundurarak, bu nedenle temel doğasını ele alan araştırma için net bir ihtiyaç vardır. Böylece AP ‘nin çalışmasında mümkün olan sistemler büyük bilimsel ilgi görmektedir.
AP, yerel dokulara ve bağışıklık sistemini içeren karmaşık bir patolojik süreçtir, in vitro çalışmalar süreçlerin tam bir anlayış için yetersiz. Bu hastalığın klinik örneklerinin incelenmesi aynı zamanda etik sınırlamalar ve farklı insanlar ve farklı klinik aşamaları arasında önemli değişkenlik nedeniyle sorunlu4,5, ve dolayısıyla in vivo modellerin gereksinimi. Bu modeller, diş hamuru kirliliğine maruz ve periapikal dokularda Bu uyarıcı için vücudun inflamatuar reaksiyonu gözlemleme kavramını temel alan6,7. Ortak in vivo modelleri kemirgenler veya köpekler gibi büyük hayvanları içerir. Minyatür dişler ile çok küçük hayvanlar olan fareler tedavisinde klinik zorluk rağmen, fare modelinin avantajları önemlidir: pratikte, fareler ile çalışmak teknik tesisler açısından basit ve en uygun maliyetli ve bilimsel olarak, fare, kolayca mevcut genetik ve moleküler araçlar ve iyi okudu genom ile iyi incelenmiştir hayvan modelidir. Nitekim, önceki çalışmalar inflamatuar ve kemik reorpsiyon sinyalleri ve hücreler apikal periodontitis katılan okumak için bir fare modeli kullanılan8,9,10,11. Bu nedenle, AP çalışması için bir fare modelinin nasıl kullanılacağı konusunda net bir protokol gereklidir. Burada, böyle bir protokol tarif ediyoruz.
Burada açıklanan protokol knock-out (Ko) fareler çalışmak için uygun olmanın büyük avantajı vardır ve nasıl belirli bir gen eksikliği diş iltihabı etkiler öğrenmek7,12. Bu protokolün diğer kullanışlı uygulamaları, apikal periodontitis13‘ ün gelişimi üzerine ilaçların ve sistemik koşulların etkileri, apikal Periodontitin çenelerin osteatrosis gelişimi üzerine etkisi14 , 15 ve kemik rejenerasyonu için kök hücre terapisi16.
Bu protokol Ayrıca yerel inflamasyon çalışmak için bir model olarak Genelleştirilmiş olabilir. Enflamatuar süreci incelemek için, örneğin indüklenen kolit veya artrit17,18dahil olmak üzere çeşitli fare modelleri geliştirilmiştir. Bu modellerin sistemik etkileri vardır ve aynı hayvan içinde hiçbir yerleşik kontrol vardır. İnflamasyon olmadan kontralateral kontrol içeren indüklenen apikal periodontitis için modeller, bu sınırlamalar14,19üstesinden avantajı vardır.
Aşağıda açıklanan protokol bu nedenle yerel inflamatuar süreçlerle ilgilenen araştırmacılar için yararlıdır. Bu iltihap kontrollü doğası, belirli bir yere onun hapis, ve kontralateral kontrol diş, tüm bu süreç içinde yer alan mekanizmaları incelemek için bu protokol değerli olun. Ayrıca, protokol periapikal inflamasyonun klinik yönleri ile ilgilenen araştırmacılar için yararlıdır. Fare modeli, hastalığın farklı değişkenlerini incelemek için idealdir, fare modelinde genetik manipülasyonları kolayca gerçekleştirebilmek için, periapikal inflamasyonda spesifik genlerin aktivitesini araştırmak için avantajına ek olarak.
Teknik olarak, klinik prosedür fareler dişlerin küçük boyutları nedeniyle yürütmek için zordur. Konumlandırma, gerekli ekipman ve performans hakkında bilgi edinmek için bu prosedürü görselleştirmek yararlı olacaktır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Farelerde apikal periodontitis indüksiyonu için burada bir yöntem tanıtıldı. Yöntemin amacı, bu inflamatuar sürecin mekanizmaları ve sonuçlarını incelemek için apikal periodontitis koşulunu yararlanmasıdır. Apical periodontitis 6-8 hafta eski fareler, kökleri tamamen24geliştirilen bir yaş indüklenen oldu. Bu modelde apikal periodontitis neden için, fare mandibular azı diş hamuru bir diş Burr kullanılarak maruz kalır. Fareler (SPF koşullarında) oral florada…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dr. kanlı Heyman ‘a hayvan konumlandırma, Raphael Lieber ile birlikte mikro-CT analizinde yardım için ve Prof. Andiara de Rossi Daldegan ‘ın deney öncesi konusunda tavsiyelerde bulunmasını istiyoruz. Biz de kritik okuma ve düzenleme için Dr Sidney Cohen kabul etmek istiyorum.
Bu çalışma, Dr. ızador ı. Cabakoff araştırma Bağış Fonu ‘ndan MK ve IA ‘ya bir hibe ve Israil bilim ve Teknoloji Bakanlığı ‘ndan ÖRNEĞIN Yitzhak Navon bursu ile destekleniyordu.
Materials
| Atipamezole hydrochloride | Eurovet Animal Health | CAS 104075-48-1 | |
| ATR | dentsply | tecnika | |
| blocking machine | Leica | EG1150H | |
| buprenorphine | vetmarket | 163451 | |
| clinical microscope/binocular | Olympus | Sz61 | |
| dental bur | Komet dental | ZR8801L 315 008 | |
| dental spatula | Premier | 1003737 | |
| EDTA | J.T Baker | 8993 | |
| entelan | mercury | 1.07961 | |
| Eosin Y solution, alcoholic | SIGMA | HT110116 | |
| hematoxylin solution, Mayer's | SIGMA | MHS 16 | |
| Ketamine hydrochloride | Vetoquinol | CAS 1867-669 | |
| Medetomidine hydrochloride (cepetor) | CP-pharma GmbH | CAS 86347-15-1 | |
| Mepivacaine HCl 3% | Teva | CAS 96-88-8 | |
| microbrushes- adjustable precision applicators | PARKELL | S379 | |
| micro-ct scanner | scanco | uCT 40 | |
| parafin | Leica | 39602004 | |
| PBS | SIGMA | D8537 | |
| PFA | EMS | 15710 | |
| Chloramphenicol eye ointment (5%) | Rekah pharmaceutical | CAS 56-75-7 | |
| tweezers | WAM | Ref-CT | |
| xylazine | Eurovet Animal Health | CAS 7361-61-7 | |
| xylene | Gadot | CAS 1330-20-7 |
Referências
- Azuma, M. M., Samuel, R. O., Gomes-Filho, J. E., Dezan-Junior, E., Cintra, L. T. The role of IL-6 on apical periodontitis: a systematic review. International Endodontics Journal. 47 (7), 615-621 (2014).
- Marton, I. J., Kiss, C. Overlapping protective and destructive regulatory pathways in apical periodontitis. Journal of Endodontics. 40 (2), 155-163 (2014).
- Graunaite, I., Lodiene, G., Maciulskiene, V. Pathogenesis of apical periodontitis: a literature review. Journal of Oral and Maxillofacial Research. 2 (4), e1 (2012).
- Hussein, F. E., Liew, A. K., Ramlee, R. A., Abdullah, D., Chong, B. S. Factors Associated with Apical Periodontitis: A Multilevel Analysis. Journal of Endodontics. 42 (10), 1441-1445 (2016).
- Takahashi, K., MacDonald, D. G., Kinane, D. F. Analysis of immunoglobulin-synthesizing cells in human dental periapical lesions by in situ hybridization and immunohistochemistry. Journal of Oral Pathology Medicine. 25 (6), 331-335 (1996).
- Lin, D., et al. Enterococcus faecalis lipoteichoic acid regulates macrophages autophagy via PI3K/Akt/mTOR pathway. Biochemical and Biophysical Research Community. 498 (4), 1028-1036 (2018).
- Wu, Y., Sun, H., Yang, B., Liu, X., Wang, J. 5-Lipoxygenase Knockout Aggravated Apical Periodontitis in a Murine Model. Journal of Dental Research. 97 (4), 442-450 (2018).
- Barreiros, D., et al. Immunohistochemical and mRNA expression of RANK, RANKL, OPG, TLR2 and MyD88 during apical periodontitis progression in mice. Journal of Applied Oral Science. 26, e20170512 (2018).
- Barreiros, D., et al. MMP2 and MMP9 are Associated with Apical Periodontitis Progression and Might be Modulated by TLR2 and MyD88. Brazillian Dentistry Journal. 29 (1), 43-47 (2018).
- Virtej, A., Papadakou, P., Sasaki, H., Bletsa, A., Berggreen, E. VEGFR-2 reduces while combined VEGFR-2 and -3 signaling increases inflammation in apical periodontitis. Journal of Oral Microbiology. 8, 32433 (2016).
- De Rossi, A., et al. Cementocytes Express Receptor Activator of the Nuclear Factor Kappa-B Ligand in Response to Endodontic Infection in Mice. Journal of Endodontics. 42 (8), 1251-1257 (2016).
- Rider, D., et al. Elevated CD14 (Cluster of Differentiation 14) and Toll-Like Receptor (TLR) 4 Signaling Deteriorate Periapical Inflammation in TLR2 Deficient Mice. Anatomy Records (Hoboken). 299 (9), 1281-1292 (2016).
- Martins, C. M., Sasaki, H., Hirai, K., Andrada, A. C., Gomes-Filho, J. E. Relationship between hypertension and periapical lesion: an in vitro and in vivo study. Brazillian Oral Research. 30 (1), e78 (2016).
- Rao, N. J., Wang, J. Y., Yu, R. Q., Leung, Y. Y., Zheng, L. W. Role of Periapical Diseases in Medication-Related Osteonecrosis of the Jaws. Biomedical Research International. 2017, 1560175 (2017).
- Song, M., et al. Preexisting Periapical Inflammatory Condition Exacerbates Tooth Extraction-induced Bisphosphonate-related Osteonecrosis of the Jaw Lesions in Mice. Journal of Endodontics. 42 (11), 1641-1646 (2016).
- Wu, Y., et al. Hypoxic Preconditioning Enhances Dental Pulp Stem Cell Therapy for Infection-Caused Bone Destruction. Tissue Engineering Part A. 22 (19-20), 1191-1203 (2016).
- Eichele, D. D., Kharbanda, K. K. Dextran sodium sulfate colitis murine model: An indispensable tool for advancing our understanding of inflammatory bowel diseases pathogenesis. World Journal of Gastroenterology. 23 (33), 6016-6029 (2017).
- Choudhary, N., Bhatt, L. K., Prabhavalkar, K. S. Experimental animal models for rheumatoid arthritis. Immunopharmacology and Immunotoxicology. 40 (3), 193-200 (2018).
- Shah, A., et al. Clastic cells are absent around the root surface in pulp-exposed periapical periodontitis lesions in mice. Oral Disease. 24 (1-2), 57-62 (2018).
- Wan, C., et al. MMP9 deficiency increased the size of experimentally induced apical periodontitis. Journal of Endodontics. 40 (5), 658-664 (2014).
- Bezerra da Silva, R. A., et al. MyD88 knockout mice develop initial enlarged periapical lesions with increased numbers of neutrophils. International Endod Journal. 47 (7), 675-686 (2014).
- Mehrazarin, S., Alshaikh, A., Kang, M. K. Molecular Mechanisms of Apical Periodontitis: Emerging Role of Epigenetic Regulators. Dental Clinics of North America. 61 (1), 17-35 (2017).
- Metzger, Z. Macrophages in periapical lesions. Endodontics Dentisrty and Traumatology. 16 (1), 1-8 (2000).
- Lungova, V., et al. Tooth-bone morphogenesis during postnatal stages of mouse first molar development. Journal of Anatomy. 218 (6), 699-716 (2011).
- Zilberstein, L. F., Moens, Y. P., Leterrier, E. The effect of local anaesthesia on anaesthetic requirements for feline ovariectomy. Veterinary Journal. 178 (2), 214-218 (2008).
- Kaufman, E., Epstein, J. B., Gorsky, M., Jackson, D. L., Kadari, A. Preemptive analgesia and local anesthesia as a supplement to general anesthesia: a review. Anesthesia Progress. 52 (1), 29-38 (2005).
- Song, M., et al. Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice. Journal of Visual Experimentalization. (119), (2017).
- Yoneda, N., et al. Development of a root canal treatment model in the rat. Scientific Reports. 7 (1), 3315 (2017).
- AlShwaimi, E., et al. Regulatory T cells in mouse periapical lesions. Journal of Endodontics. 35 (9), 1229-1233 (2009).
