Простые домашние инструменты для обработки фруктовых мух-Drosophila меланогастер
Summary
Описано здесь использование нескольких самодельных инструментов для передачи, охлаждения и убить взрослых Drosophila, а также для очистки стеклянных флаконов культуры и собирать яйца. Эти инструменты просты в обработке и довольно эффективны в обращении с Drosophila.
Abstract
Плодовая муха, Drosophila melanogaster, широко используется как в биологических исследованиях и биологии образования. Обработка взрослых мух является общим, но трудно на практике, как взрослые мухи летать. Продемонстрировано здесь, как сделать некоторые простые и экономически эффективные инструменты для решения сложных вопросов в обработке Drosophila. Отверстия в пены пробки сделаны и пипетки советы или воронки вставляются в отверстия. Мухи затем двигаться только в одном направлении в пипетки наконечник / воронка сборки, что позволяет эффективно контролировать передачу взрослых Drosophila в или из флакона. Существующие протоколы были изменены для охлаждающих мух, охлаждая в дробленом льду и перенося их на холодную, твердую поверхность ледяного покрова. Ледяной пакет покрыт куском медицинской марли, которая удерживает обездвиженных мух из сгущенной воды при обследовании под стереомикроскопом. Мухи, наконец, усыпленных для подсчета и сортировки или отбрасываются микроволновой печи. Также была разработана клетка в форме бутылки для сбора яиц, а также трудосберегающее устройство и сопутствующее протокол для очистки стеклянных флаконов культуры.
Introduction
Плодовая муха, Drosophila melanogaster, является моделью организма широко используется в биологических исследованиях и биологии образования для изучения широкого круга тем1,2. Основными проблемами обработки drosophila являются передача взрослых от флакона к флакону и иммобилизации мух, чтобы они легче справиться, так как все взрослые (за исключением некоторых мутантов3,4) может летать.
Условно, исследователь передает летит из одного флакона в другой, держа два флакона рот в рот, нажав мух вниз или позволяя мух летать в другой флакон, а затем разделения и replugging обоих флаконов4. Очевидно, что для этого необходимо, чтобы открывались два флакона с одинаковым диаметром, и трудно контролировать количество передаваемых мух. Между тем, это требует быстрых рук, чтобы получить работу, и избежать бродячих мух может привести к проблемам для лаборатории или класса. Добавление экстра девственных мух или самцов мух к уже подготовленному кресту является еще одной рутинной задачей в экспериментах дрозофилы. Условно, мухи должны быть обездвижены в крест флакон перед добавлением дополнительных мух.
Взрослые дрозофилы регулярно обезболиваются эфиром, CO2или леденящей душу5. По сравнению с эфиром и CO2 воздействия, охлаждение является наиболее экономически эффективным агентом для иммобилизации взрослых Drosophila и наименее вредных как для мух и исследователей (особенно молодых студентов)6,7. Однако вода, которая непрерывно конденсируется на холодной поверхности или камере, мочит мух. Трудно определить фенотипы мокрых мух, и они могутлегко повреждаются во время манипуляции 8,9. Это удерживает метод охлаждения от становится все более широкое признание.
Инструменты для переноса мух и метод охлаждения мух ранее были описаны10. В этом вопросе сообщается, что модифицированная методика охлаждения анестезии является безопасной, надежной и осуществимой для экспериментов с дрозофилой. Также описаны в настоящем документе 1) методы для убийства взрослых для подсчета, сортировки или отбрасывания, 2) трудосберегающих устройств и протоколов для очистки стеклянных флаконов культуры, и 3) простая клетка для сбора яиц. Легко разработанные и экономически эффективные инструменты, описанные здесь, могут быть использованы для решения сложных проблем обработки мух, и эти методы были протестированы и доказали свою надежность, надежность и простота в обращении для опытных и начинающих исследователей.
Protocol
Representative Results
Discussion
Некоторые самодельные инструменты для обработки основных видов деятельности, связанных с воспитанием дрозофилы и эксперименты описаны в этой работе. Эти инструменты просты, но довольно эффективны. Фактически любая лаборатория может сделать эти инструменты с легкостью, и исследо…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ни один
Materials
| a pair of pliers | |||
| cordless drill driver | max speed: 500 rpm | ||
| electric soldering iron | |||
| file | |||
| funnel | diameter of disk<60mm | ||
| ice box | |||
| insect pins | |||
| infrared thermometer | HCIYET HT-830 | ||
| long cuff rubber gloves | |||
| mechanical pencils | |||
| medical gauze | |||
| microcentrifuge tube | 100 ul | ||
| microwave oven | |||
| Parafilm | |||
| peri dish | internal diameter 60 mm | ||
| pipette tips | 1 ml | ||
| plastic film | |||
| plastic peri dish | Φ36 mm used to cover the empty vial | ||
| point tweezers | |||
| protective work gloves | |||
| re-freezable hard icepacks | 26.5×14.5×2.5 cm or larger | ||
| rubber air blower | |||
| snap cutter | |||
| soft drink bottle | 500 ml, internal diameter c.a. 65 mm | ||
| sponge stopper | |||
| stainless steel sponges | |||
| tube brush | |||
| vial | Φ34 mm × 90 mm |
Referências
- Jennings, B. H. Drosophila – a versatile model in biology & medicine. Materials Today. 14 (5), 190-195 (2011).
- JoVE Science Education Database. . Biology I: yeast, Drosophila and C. elegans. An Introduction to Drosophila melanogaster. , (2018).
- Ashburner, M., Roote, J., Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. Laboratory Culture of Drosophila. Drosophila Protocols. , (2000).
- Greenspan, R. J. Fly pushing: The theory and practice of Drosophila genetics. Cold Spring Harbor Laboratory Press. , (2004).
- Ashburner, M., Thompson, J., Ashburner, M., Wright, T. R. F. The laboratory culture of Drosophila. The genetics and biology of Drosophila. 2a, 1-109 (1978).
- Ratterman, D. M., O'Donnell, M. A. Eliminating ether by using ice for Drosophila labs. Tested Studies For Laboratory Teaching. , 259-265 (2003).
- . Culturing techniques for Drosophila Available from: https://www.ptbeach.com/cms/lib/NJ01000839/Centricity/Domain/113/ap%20biology%20Labs/Culturing%20techniques%20for%20Drosophila.pdf (2019)
- Markow, T. A., O'Grady, P. M. . Drosophila: A Guide to Species Identification and Use. , (2006).
- Artiss, T., Hughes, B. Taking the Headaches Out of Anesthetizing Drosophila: A Cheap & Easy Method of Constructing Carbon Dioxide Staging. The American Biology Teacher. 69 (8), e77-e80 (2007).
- Qu, W. -. H., Zhu, T. -. B., Yang, D. -. X. A Modified Cooling Method and its Application in Drosophila Experiments. Journal Of Biological Education. 49 (3), 302-308 (2015).
- . Egg-laying cages for drosophila Available from: https://www.kisker-biotech.com/frontoffice/product?produitId=0H-19-17 (2018)
- Roberts, D. B. . Drosophila: a practical approach. , (1998).
- Tang, M., Peng, Q. -. F., Yang, D. Two devices for Drosophila experiments (in Chinese). Bulletin of Biology. 45 (11), 49-50 (2010).
- Zhou, T. -. y., Gan, J., Yang, D. Preparation of sponge plug and sponge plug based fly transferring device for Drosophila experiments (in Chinese). Bulletin of Biology. 46 (6), 49-50 (2011).
- Yang, D. . Genetics laboratory investigation. , (2016).
- Yang, D. Carnivory in the larvae of Drosophila melanogaster and other Drosophila species. Scientific Reports. 8, (2018).
- Stocker, H., Gallant, P., Dahmann, C. Getting Started: An Overview on Raising and Handling Drosophila. Drosophila: Methods and Protocols. , (2008).
