Enkel hemlagad verktyg för att hantera bananflugor-Drosophila melanogaster
Summary
Beskrivs här är användningen av flera hemgjorda verktyg för att överföra, kyla och döda vuxna Drosophila, samt att rengöra glas kultur flaskor och samla ägg. Dessa verktyg är lätta att göra och är ganska effektiva i hanteringen av Drosophila.
Abstract
Fruktfluga, Drosophila melanogaster, används flitigt både i biologisk forskning och biologi utbildning. Hantering vuxen flugor är vanligt men svårt i praktiken, som vuxna flugor flyga. Demonstreras här är hur man gör några enkla och kostnadseffektiva verktyg för att hantera svåra frågor i hanteringen av Drosophila. Hål i skum proppar görs och pipettspetsar eller trattar sätts in i hålen. Flugor rör sig då endast i en riktning i pipettspetsen/trattens assemblage, vilket möjliggör en effektiv kontroll av överföringen av adulta Drosophila till eller från en injektionsflaska. Befintliga protokoll har modifierats för cool-anesthetizing flugor genom kylning i krossad is och överföra dem till en kall, hård den yta. Den den är täckt med en bit av medicinska gasväv som håller immobiliserade flugor från kondenserat vatten när de undersöks under en stereomikroskop. Flugorna är slutligen euthanized för att räkna och sortera eller kasseras genom microwaving. En flaskformad bur har också utvecklats för att samla ägg, samt en arbetsbesparande anordning och medföljande protokoll för rengöring glas kultur flaskor.
Introduction
Den fruktfluga, Drosophila melanogaster, är en modell organism som ofta används i biologisk forskning och biologi utbildning för att studera ett brett spektrum av ämnen1,2. De grundläggande problemen med att hantera Drosophila är överföring av vuxna från flaska till injektionsflaska och immobilisering av flugorna så de är lättare att hantera, eftersom alla vuxna (med undantag för vissa mutanter3,4) kan flyga.
Konventionellt, en forskare överföringar flyger från en flaska till en annan genom att hålla två flaskor mun-till-mun, knacka på flugor ner eller tillåter flugor att flyga upp i en annan flaska, sedan separera och koppla båda flaskorna4. Uppenbarligen kräver detta att öppnandet av två flaskor med samma diameter, och det är svårt att kontrollera mängden av flugorna överförs. Under tiden kräver detta snabba händer för att få jobbet gjort, och flyr ströva flugor kan resultera i problem för laboratoriet eller klassrummet. Lägga till extra virgin flugor eller manliga flugor till ett redan förberett kors är en annan rutinmässig uppgift i Drosophila experiment. Konventionellt, flugor måste immobiliseras i korset flaskan innan tillägg av extra flugor.
Adult Drosophila bedövas rutinmässigt av eter, Co2, eller kylning5. Jämfört med eter och co2 exponering, kylning är den mest kostnadseffektiva agenten för immobilisering vuxna Drosophila och minst skadligt för både flugor och forskare (särskilt unga studenter)6,7. Men vatten som kondenserar kontinuerligt på den kalla ytan eller kammaren vippar flugorna. Det är svårt att bestämma fenotyper av våta flugor, och de kan lätt skadas under manipulation8,9. Detta har hållit kylan metoden från att bli mer allmänt accepterad.
Verktyg för flugtransferal och en metod för flug kylning har beskrivits tidigare10. Häri, en modifierad kylning anestesiteknik rapporteras som är säker, pålitlig, och genomförbart för Drosophila experiment. Beskrivs också i detta dokument är 1) metoder för att döda vuxna för att räkna, sortera eller kasta, 2) arbetsbesparande anordningar och protokoll för rengöring av glas kulturer flaskor, och 3) en enkel bur för uppsamling av ägg. De lätt utformade och kostnadseffektiva verktyg som beskrivs här kan användas för att hantera de svåra frågorna om flug hantering, och dessa metoder har testats och visat sig vara robusta, pålitliga och lätthanterliga för erfarna och oerfarna forskare.
Protocol
Representative Results
Discussion
Några hemgjorda verktyg för att hantera grundläggande aktiviteter som är involverade i Drosophila uppfödning och experiment beskrivs i detta dokument. Dessa verktyg är enkla men ganska effektiva. Praktiskt taget kan alla labb göra dessa verktyg med lätthet, och en forskning eller ett undervisnings laboratorium behöver inte hitta ett färdigt alternativ som kanske inte är tillgängligt lokalt.
Flyga överföring är den vanligaste praxis och en svår uppgift i Drosophila …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ingen
Materials
| a pair of pliers | |||
| cordless drill driver | max speed: 500 rpm | ||
| electric soldering iron | |||
| file | |||
| funnel | diameter of disk<60mm | ||
| ice box | |||
| insect pins | |||
| infrared thermometer | HCIYET HT-830 | ||
| long cuff rubber gloves | |||
| mechanical pencils | |||
| medical gauze | |||
| microcentrifuge tube | 100 ul | ||
| microwave oven | |||
| Parafilm | |||
| peri dish | internal diameter 60 mm | ||
| pipette tips | 1 ml | ||
| plastic film | |||
| plastic peri dish | Φ36 mm used to cover the empty vial | ||
| point tweezers | |||
| protective work gloves | |||
| re-freezable hard icepacks | 26.5×14.5×2.5 cm or larger | ||
| rubber air blower | |||
| snap cutter | |||
| soft drink bottle | 500 ml, internal diameter c.a. 65 mm | ||
| sponge stopper | |||
| stainless steel sponges | |||
| tube brush | |||
| vial | Φ34 mm × 90 mm |
Referências
- Jennings, B. H. Drosophila – a versatile model in biology & medicine. Materials Today. 14 (5), 190-195 (2011).
- JoVE Science Education Database. . Biology I: yeast, Drosophila and C. elegans. An Introduction to Drosophila melanogaster. , (2018).
- Ashburner, M., Roote, J., Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. Laboratory Culture of Drosophila. Drosophila Protocols. , (2000).
- Greenspan, R. J. Fly pushing: The theory and practice of Drosophila genetics. Cold Spring Harbor Laboratory Press. , (2004).
- Ashburner, M., Thompson, J., Ashburner, M., Wright, T. R. F. The laboratory culture of Drosophila. The genetics and biology of Drosophila. 2a, 1-109 (1978).
- Ratterman, D. M., O'Donnell, M. A. Eliminating ether by using ice for Drosophila labs. Tested Studies For Laboratory Teaching. , 259-265 (2003).
- . Culturing techniques for Drosophila Available from: https://www.ptbeach.com/cms/lib/NJ01000839/Centricity/Domain/113/ap%20biology%20Labs/Culturing%20techniques%20for%20Drosophila.pdf (2019)
- Markow, T. A., O'Grady, P. M. . Drosophila: A Guide to Species Identification and Use. , (2006).
- Artiss, T., Hughes, B. Taking the Headaches Out of Anesthetizing Drosophila: A Cheap & Easy Method of Constructing Carbon Dioxide Staging. The American Biology Teacher. 69 (8), e77-e80 (2007).
- Qu, W. -. H., Zhu, T. -. B., Yang, D. -. X. A Modified Cooling Method and its Application in Drosophila Experiments. Journal Of Biological Education. 49 (3), 302-308 (2015).
- . Egg-laying cages for drosophila Available from: https://www.kisker-biotech.com/frontoffice/product?produitId=0H-19-17 (2018)
- Roberts, D. B. . Drosophila: a practical approach. , (1998).
- Tang, M., Peng, Q. -. F., Yang, D. Two devices for Drosophila experiments (in Chinese). Bulletin of Biology. 45 (11), 49-50 (2010).
- Zhou, T. -. y., Gan, J., Yang, D. Preparation of sponge plug and sponge plug based fly transferring device for Drosophila experiments (in Chinese). Bulletin of Biology. 46 (6), 49-50 (2011).
- Yang, D. . Genetics laboratory investigation. , (2016).
- Yang, D. Carnivory in the larvae of Drosophila melanogaster and other Drosophila species. Scientific Reports. 8, (2018).
- Stocker, H., Gallant, P., Dahmann, C. Getting Started: An Overview on Raising and Handling Drosophila. Drosophila: Methods and Protocols. , (2008).
