Enkle hjemmelagde verktøy for å håndtere Fruit fluer-Drosophila melanogaster

Summary

Beskrevet her er bruken av flere hjemmelagde verktøy for å overføre, chill, og drepe voksne Drosophila, samt å rengjøre glass kultur hetteglass og samle egg. Disse verktøyene er enkle å lage og er ganske effektive i å håndtere Drosophila.

Abstract

Frukten fly, Drosophila melanogaster, er mye brukt både i biologisk forskning og biologi utdanning. Håndtering voksen fluer er vanlig, men vanskelig i praksis, som voksne fluer fly. Demonstrert her er hvordan å gjøre noen enkle og kostnadseffektive verktøy for å ta vanskelige problemer i håndteringen av Drosophila. Hull i skum propper er laget og pipette tips eller trakter er satt inn i hullene. Fluer flytter deretter bare i én retning inn i pipette spissen/trakt samling, noe som gir effektiv kontroll av overføring av voksen Drosophila inn i eller ut av et hetteglass. Eksisterende protokoller har blitt modifisert for kjølig-anesthetizing fluer ved Chilling i knust is og overføre dem på en kald, hard ismasken overflate. Ismasken er dekket med et stykke medisinsk gasbind som holder immobilisert fluer fra kondensert vann når undersøkt under en stereomikroskopet. Fluene er endelig euthanized for telling og sortering eller forkastet av mikrobølgeovnen. En flaske-formet buret har også blitt utviklet for å samle egg, samt en arbeidsbesparende enhet og tilhørende protokoll for rengjøring glass kultur hetteglass.

Introduction

Frukten fly, Drosophila melanogaster, er en modell organisme mye brukt i biologisk forskning og biologi utdanning for å studere et bredt spekter av emner^1,2. De grunnleggende problemene med håndtering Drosophila er overføring av voksne fra hetteglass til hetteglass og immobilisering av fluene slik at de er lettere å håndtere, som alle voksne (med unntak av noen mutanter^3,4) kan fly.

Konvensjonelt, en forsker overfører fluer fra ett hetteglass til et annet ved å holde to hetteglass munn til munn, trykke på fluene ned eller la fluer å fly opp i et annet hetteglass, deretter skille og replugging begge hetteglass⁴. Selvfølgelig krever dette at åpningen av to ampuller med samme diameter, og det er vanskelig å kontrollere mengden av fluer overført. I mellomtiden, dette krever raske hender for å få jobben gjort, og rømmer Stray fluer kan føre til problemer for laboratoriet eller klasserommet. Legge ekstra jomfru fluer eller mannlige fluer til en allerede forberedt kors er en annen rutine oppgave i Drosophila eksperimenter. Konvensjonelt, må fluer være immobilisert i korset hetteglasset før tilsetning av ekstra fluer.

Voksen Drosophila er rutinemessig anesteserte av ETER, co₂, eller Chilling⁵. Sammenlignet med Eter og co₂ eksponering, kjøling er den mest kostnadseffektive agent for immobilizing voksen Drosophila og minst skadelig for både fluer og forskere (spesielt unge studenter)^6,7. Men vann som kondenserer kontinuerlig på den kalde overflaten eller kammer tisser fluene. Det er vanskelig å bestemme fenotyper av våte fluer, og de kan lett bli skadet under manipulasjon^8,9. Dette har beholdt den skremmende metoden fra å bli mer allment akseptert.

Verktøy for flue overføring og en metode for fly kjøling har tidligere blitt beskrevet¹⁰. Heri er en modifisert kjøling anestesi teknikk rapporteres som er trygt, pålitelig, og gjennomførbart for Drosophila eksperimenter. Også beskrevet i dette papiret er 1) metoder for å drepe voksne for telling, sortering, eller forkaste, 2) arbeidsbesparende enheter og protokoller for rengjøring glass kultur hetteglass, og 3) et enkelt bur for å samle egg. De lett utformede og kostnadseffektive verktøyene som er beskrevet her, kan brukes til å håndtere de vanskelige spørsmålene om fly håndtering, og disse metodene har blitt testet og er bevist å være robuste, pålitelige og enkle å håndtere for erfarne og uerfarne forskere.

Protocol

1. klargjøre verktøy og tilbehør Tips/trakt propper Skaff to svamp plugger (diameteren av pluggene må være litt større enn den interne diameteren av hetteglassene som brukes til å overføre fluer). Lag et hull i sentrene av svamp plugger med en oppvarmet elektrisk loddebolt. Skaff to 1 mL pipette spisser, skjær en i halv tvers med en skarp kniv, og kast den spisse enden. Deretter klippes 1,5 cm av den spisse enden av den andre pipette spissen. Lim restene av de to p…

Representative Results

T-og F-propper ble utviklet som et sett med enkle verktøy som kan tilpasses og brukes i enhver flue overføring aktiviteter. Overføring av fluer fra en gammel kultur til flere friske kulturer innebærer å fjerne pluggene på de friske hetteglassene, erstatte dem med F-propper, deretter trykke ned fluene i det gamle hetteglasset, raskt fjerne pluggen, og erstatte den med en T-propp. Hvis den gamle maten er kompakt, er det viktig å snu det gamle hetteglasset og sette tuppen av T-proppen…

Discussion

Noen hjemmelagde verktøy for håndtering av grunnleggende aktiviteter involvert i Drosophila oppdrett og eksperimentering er beskrevet i denne utredningen. Disse verktøyene er enkle, men ganske effektive. Nesten, enhver Lab kan gjøre disse verktøyene med letthet, og en forskning eller en pedagogisk laboratorium trenger ikke å finne et ferdig alternativ som er kanskje ikke tilgjengelig lokalt.

Fly overføring er den vanligste praksisen og en vanskelig oppgave i Drosophila </em…

Materials

a pair of pliers
cordless drill driver			max speed: 500 rpm
electric soldering iron
file
funnel			diameter of disk<60mm
ice box
insect pins
infrared thermometer			HCIYET HT-830
long cuff rubber gloves
mechanical pencils
medical gauze
microcentrifuge tube			100 ul
microwave oven
Parafilm
peri dish			internal diameter 60 mm
pipette tips			1 ml
plastic film
plastic peri dish			Φ36 mm used to cover the empty vial
point tweezers
protective work gloves
re-freezable hard icepacks			26.5×14.5×2.5 cm or larger
rubber air blower
snap cutter
soft drink bottle			500 ml, internal diameter c.a. 65 mm
sponge stopper
stainless steel sponges
tube brush
vial			Φ34 mm × 90 mm