نموذج مورين من أورام الكبد النقيلي في وضع إصابة نقص تروية التسريب
Summary
نحن نصف بالتفصيل نموذج ورم سرطان القولون والمستقيم (CRLM) تأثير إعادة إقفاريالكبد (I/R) في نمو الورم والانبثاث. هذا النموذج يمكن أن تساعد على فهم أفضل للآليات الكامنة وراء الجراحة الناجمة عن تعزيز نمو الكبد النقيلي.
Abstract
لا يزال نقص تروية الكبد وإصابة التسريب (I/R)، وهو تحد سريري شائع، عملية باثوفسيولوجية لا مفر منها وقد ثبت أنها تسبب تلفًا متعددًا في الأنسجة والأعضاء. وعلى الرغم من أوجه التقدم الأخيرة والنهج العلاجية، ظلت الاعتلالات العامة غير مرضية خاصة في المرضى الذين يعانون من تشوهات في البُرَيِّة الكامنة. في سياق نمو السرطان العدواني وورم خبيث، يشتبه في أن الإدخال/الإعادة إلى الدخول الجراحي هو المروج الذي ينظم تكرار الورم. تهدف هذه المقالة إلى وصف نموذج المورين ذات الصلة سريريا من الكبد I / R وورم الكبد القولون والمستقيم. في القيام بذلك, ونحن نهدف إلى مساعدة المحققين الآخرين في إنشاء واتقان هذا النموذج لممارسة البحوث الروتينية لفهم أفضل لآثار الكبد I/ R على تعزيز الانبثاث الكبد.
Introduction
الكبد هو واحد من المواقع الأكثر شيوعا لتطوير المرض النقيلي1. الوفيات هي دائما تقريبا تعزى إلى المضاعفات المرتبطة بنمو الورم في الكبد. في المرضى الذين يعانون من الأورام الصلبة النقيلية في الكبد، لا تزال الجراحة تدخلًا حاسمًا لمكافحة المرض والنهج العلاجي المحتمل. ومع ذلك، فإن الغالبية العظمى من المرضى موجودة في نهاية المطاف مع المرض المتكرر، في الغالب في الكبد2،3. خلال الجراحة الكبدية، النزيف أثناء الجراحة شائع، وغالباً ما يتطلب نقل الدم والنهج التقنية المختلفة للسيطرة على النزيف، بما في ذلك أساليب لقط الأوعية الدموية. ومع ذلك، تسبب هذه التدابير نقص التروية الكبدية / التسريب (I/R) إلى أنسجة الكبد. وقد تم توثيق الآثار السلبية للآي /ر على وظيفة الخلايا الكبدية بشكل جيد. الكبد I / R إهانة يشعل الشلالات الالتهابية أثناء استعادة تدفق الدم عن طريق مسارات التهابية4. ليس فقط إصابة الكبد I / R تسهم في فشل الكبد، ولكن الأدلة الحالية تبين أيضا أن إصابة الآي / ر يحفز التصاق الخلايا السرطانية، ويعزز حدوث تشكيل الانبثاث ونمو مرض micrometastatic القائمة5. وقد سبق لنا أن أبلغنا أن الإجهاد الجراحي يحفز تنشيط الخلايا المناعية التي لا تساعد فقط في نمو الورم الأولي، ولكن أيضا يسهل الانبثاث عن طريق التقاط الخلايا السرطانية داخل الدورة الدموية6.
هنا نقوم بوصف بالتفصيل تقنية لإنشاء نموذج ورم الماوس ورم ورم الانبثاث الكبدي. في هذا النموذج، ونحن نقدم أيضا طريقة للحث على إصابة نقص التروية الكبدية التي تعمل كبديل للإجهاد الجراحي الحالي سريريا خلال استئصال الكبد. الطرق مجتمعة من حقن السرطان والكبد I / R يمكن أن تفسر بنجاح تطور CRLM في المرضى الذين خضعوا لاستئصال الورم الأولي.
Protocol
Representative Results
Discussion
ويستند النموذج الحيواني الموصوف في هذه المخطوطة إلى نهجين رئيسيين. الأول هو الاعتراف بقدرة الخلايا السرطانية على توطين وانتشار في فصوص الكبد. والثاني هو دراسة تأثير إصابة نقص التروية الكبدية التي تؤثر على نمو الورم والانبثاث. يسمح هذا النموذج بالدراسة ذات الصلة من الانبثاث الكبد في غياب …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
يشكر المؤلفات [سرا] [مينمير] وإسكندر [كمّرسي] للمراجعات لغويّة.
Materials
| Dulbecco's Modified Eagle Medium | Lonza | 12-614F | |
| Fetal Bovine Serum | Lonza | 900-108 | |
| L-Glutamin | Gibco | 25030-081 | |
| Penicilin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| Stretomysin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| HEPES | Fisher Scientific | SH3023701 | |
| Trypsin | Hyclone | sh30042.02 | |
| Cell culture Flask 75cm | 5 Cells Star | 658170 | |
| 15ml PP Conical Tubes | BioExcell | 41021037 | |
| Trypan Blue Stain | Giibco | 15250-061 | |
| Gauze | Fisherbrand | 1376152 | |
| Cautry | Bovie | AA01 | |
| Microvascular clamp | Finescience tools | 18055-03 | |
| Micro-Serrefine clamp applicator with lock | Fine science toosl | FST-18056-14 | |
| Spring scissor | Fine science toosl | FST-15021-15 | |
| Vessel Dilator | Fine science toosl | FST-00276-13 | |
| Magnetic fixator Retraction system | Fine science toosl | FST-18200020 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11019-12 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11018-12 | |
| 4-0 polypropylene suture | Ethicon | K881H | |
| Needle holder | Harvard Apparatus | 72-8826 | |
| Heating Pad | Fisher scientific | 1443915 | |
| Clipper | Oster | 559A | |
| Povidone-Iodine solution | Medline | MDS093945 | |
| Syringe 1ml 25G | BD safety Glide | 305903 | |
| Insulin syringe 0.5 ml | BD insulin Syringes | 32946 | |
| Cotton -Tipped Applicator | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| Surgical Microscope | Leica | LR92240 | |
| Mycoplasma Elisa Kit | Roche | 11663925910 | |
| Ketamine | Putney | #056344 | |
| Xylazine | NADA | #139-236 | |
| ALT strip | Heska | 15809554 | |
| AST strip | Heska | 15809542 | |
| LDH strip | Heska | 15809607 |
Referências
- Riihimäki, M., Hemminki, A., Sundquist, J., Hemminki, K. Patterns of metastasis in colon and rectal cancer. Scientific Reports. 6 (1), 29765 (2016).
- Oki, E., et al. Recent advances in treatment for colorectal liver metastasis. Annals of gastroenterological surgery. 2 (3), 167-175 (2018).
- Wolpin, B. M., Mayer, R. J. Systemic treatment of colorectal cancer. Gastroenterology. 134 (5), 1296-1310 (2008).
- van Golen, R. F., Reiniers, M. J., Olthof, P. B., van Gulik, T. M., Heger, M. Sterile inflammation in hepatic ischemia/reperfusion injury: present concepts and potential therapeutics. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 28 (3), 394-400 (2013).
- Demicheli, R., Retsky, M. W., Hrushesky, W. J. M., Baum, M., Gukas, I. D. The effects of surgery on tumor growth: a century of investigations. Annals of Oncology. 19 (11), 1821-1828 (2008).
- Tohme, S., et al. Neutrophil Extracellular Traps Promote the Development and Progression of Liver Metastases after Surgical Stress. Pesquisa do Câncer. 76 (6), 1367-1380 (2016).
- Tseng, W., Leong, X., Engleman, E. Orthotopic mouse model of colorectal cancer. Journal of Visualized Experiments. (10), 484 (2007).
- Elkin, M., Vlodavsky, I. Tail vein assay of cancer metastasis. Current Protocols in Cell Biology. 19 (19.2), (2001).
- Thalheimer, A., et al. The intraportal injection model: A practical animal model for hepatic metastases and tumor cell dissemination in human colon cancer. BMC Cancer. 9 (1), 29 (2009).
- Frampas, E., Maurel, C., Thedrez, P., Le Saëc, P. R. e. m. a. u. d. -., Faivre-Chauvet, A., Barbet, J. The intraportal injection model for liver metastasis: Advantages of associated bioluminescence to assess tumor growth and influences on tumor uptake of radiolabeled anti-carcinoembryonic antigen antibody. Nuclear Medicine Communications. 32 (2), 147-154 (2011).
- Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer. Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).
- Limani, P., et al. Selective portal vein injection for the design of syngeneic models of liver malignancy. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 310 (9), G682-G688 (2016).
