Modèle de Murine des tumeurs métastatiques de foie dans le cadre des dommages de reperfusion d'ischémie
Summary
Nous décrivons en détail un modèle de tumeur de métastases de foie de cancer côlorectal médicalement pertinent (CRLM) et l’influence de la reperfusion d’ischémie de foie (I/R) dans la croissance de tumeur et la métastase. Ce modèle peut aider à mieux comprendre les mécanismes sous-jacents à la promotion induite par la chirurgie de la croissance métastatique du foie.
Abstract
L’ischémie hépatique et la lésion de reperfusion (I/R), un défi clinique commun, demeure un processus pathophysiologique inévitable qui a été montré pour induire des dommages multiples de tissu et d’organe. En dépit des avances récentes et des approches thérapeutiques, la morbidité globale est restée insatisfaisante particulièrement dans les patients présentant des anomalies parenchymales sous-jacentes. Dans le contexte de la croissance agressive de cancer et de la métastasie, l’I/R chirurgical est suspecté pour être le promoteur régulant la répétition de tumeur. Cet article vise à décrire un modèle murine médicalement pertinent de foie I/R et métastasie colorectale de foie. Ce faisant, nous visons à aider d’autres chercheurs à établir et à perfectionner ce modèle pour leur pratique de recherche de routine afin de mieux comprendre les effets du foie I/R sur la promotion des métastases hépatiques.
Introduction
Le foie est l’un des sites les plus communs pour le développement de la maladie métastatique1. La mortalité est presque invariablement attribuable aux complications liées à la croissance tumorale dans le foie. Dans les patients présentant les tumeurs pleines métastatiques dans le foie, la chirurgie demeure une intervention cruciale pour le contrôle de la maladie et une approche curative possible. Cependant, la grande majorité des patients se présentent finalement avec la maladie récurrente, principalement dans le foie2,3. Pendant la chirurgie hépatique, le saignement peropératoire est commun, nécessitant souvent la transfusion sanguine et différentes approches techniques pour commander le saignement, y compris les méthodes vasculaires de serrage. Cependant, de telles mesures causent l’ischémie/reperfusion hépatique (I/R) au tissu de foie. Les effets défavorables de I/R sur la fonction hépatocellulaire ont été bien documentés. L’insulte de foie I/R enflamme des cascades inflammatoires pendant la restauration du flux sanguin par des voies inflammatoires4. Non seulement les dommages de foie I/R contribuent à l’échec de foie, mais les preuves actuelles montrent également que les dommages d’I/Rstimulent l’adhérence de cellules de tumeur, et favorise l’incidence de la formation de métastases et la croissance de la maladie micrométastatique existante 5. Nous avons précédemment rapporté que le stress chirurgical induit l’activation des cellules immunitaires qui aide non seulement à lacroissance de la tumeur primaire, mais facilite également les métastases en capturant des cellules cancéreuses dans la circulation 6.
Ici nous décrivons en détail une technique pour établir un modèle de tumeur de souris de métastasie de foie. Dans ce modèle, nous présentons également une méthode pour induire des dommages hépatiques de reperfusion d’ischémie qui agit en tant que substitut au stress chirurgical présent médicalement pendant des hepatectomies. Les méthodes combinées de l’injection de cancer et de l’I/R hépatique peuvent interpréter avec succès le développement de CRLM dans les patients qui ont subi la résection primaire de tumeur.
Protocol
Representative Results
Discussion
Le modèle animal décrit dans ce manuscrit est basé sur deux approches principales. La première est de reconnaître la capacité des cellules cancéreuses à localiser et à proliférer dans les lobes du foie. La deuxième est d’étudier l’effet des dommages hépatiques de reperfusion d’ischémie influençant la croissance et les métastases de tumeur. Ce modèle permet l’étude pertinente des métastases hépatiques en l’absence de métastases secondaires chez une souris immunocompétente. Le modèle est utile pour a…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs remercient Sara Minemyer et Alexander Comerci pour la révision linguistique.
Materials
| Dulbecco's Modified Eagle Medium | Lonza | 12-614F | |
| Fetal Bovine Serum | Lonza | 900-108 | |
| L-Glutamin | Gibco | 25030-081 | |
| Penicilin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| Stretomysin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| HEPES | Fisher Scientific | SH3023701 | |
| Trypsin | Hyclone | sh30042.02 | |
| Cell culture Flask 75cm | 5 Cells Star | 658170 | |
| 15ml PP Conical Tubes | BioExcell | 41021037 | |
| Trypan Blue Stain | Giibco | 15250-061 | |
| Gauze | Fisherbrand | 1376152 | |
| Cautry | Bovie | AA01 | |
| Microvascular clamp | Finescience tools | 18055-03 | |
| Micro-Serrefine clamp applicator with lock | Fine science toosl | FST-18056-14 | |
| Spring scissor | Fine science toosl | FST-15021-15 | |
| Vessel Dilator | Fine science toosl | FST-00276-13 | |
| Magnetic fixator Retraction system | Fine science toosl | FST-18200020 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11019-12 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11018-12 | |
| 4-0 polypropylene suture | Ethicon | K881H | |
| Needle holder | Harvard Apparatus | 72-8826 | |
| Heating Pad | Fisher scientific | 1443915 | |
| Clipper | Oster | 559A | |
| Povidone-Iodine solution | Medline | MDS093945 | |
| Syringe 1ml 25G | BD safety Glide | 305903 | |
| Insulin syringe 0.5 ml | BD insulin Syringes | 32946 | |
| Cotton -Tipped Applicator | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| Surgical Microscope | Leica | LR92240 | |
| Mycoplasma Elisa Kit | Roche | 11663925910 | |
| Ketamine | Putney | #056344 | |
| Xylazine | NADA | #139-236 | |
| ALT strip | Heska | 15809554 | |
| AST strip | Heska | 15809542 | |
| LDH strip | Heska | 15809607 |
Referências
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