Murine Modell der metastasierenden Lebertumoren in der Einstellung der Ischämie Reperfusionsverletzung
Summary
Wir beschreiben detailliert ein klinisch relevantes Tumormodell der Darmkrebslebermetastasen (CRLM) und den Einfluss der Leberischämie-Reperfusion (I/R) auf Tumorwachstum und Metastasierung. Dieses Modell kann helfen, die Mechanismen, die der chirurgieinduzierten Förderung des metastasierenden Wachstums der Leber zugrunde liegen, besser zu verstehen.
Abstract
Leberischämie und Reperfusion (I/R) Verletzung, eine häufige klinische Herausforderung, bleibt ein unvermeidlicher pathophysiologischer Prozess, der nachweislich mehrere Gewebe- und Organschäden induziert. Trotz der jüngsten Fortschritte und therapeutischen Ansätze ist die allgemeine Morbidität unbefriedigend geblieben, insbesondere bei Patienten mit zugrunde liegenden parenchymalen Anomalien. Im Zusammenhang mit aggressivem Krebswachstum und Metastasierung wird vermutet, dass chirurgische I/R der Promotor ist, der das Tumorrezidiv reguliert. Dieser Artikel zielt darauf ab, ein klinisch relevantes murines Modell der Leber-I/R und kolorektalen Lebermetastasen zu beschreiben. Dabei wollen wir anderen Forschern helfen, dieses Modell für ihre routinemäßige Forschungspraxis zu etablieren und zu perfektionieren, um die Auswirkungen von Leber-I/R auf die Förderung von Lebermetastasen besser zu verstehen.
Introduction
Die Leber ist eine der häufigsten Stellen für die Entwicklung von metastasierenden Erkrankungen1. Die Sterblichkeit ist fast ausnahmslos auf Komplikationen im Zusammenhang mit Tumorwachstum in der Leber zurückzuführen. Bei Patienten mit metastasierenden soliden Tumoren in der Leber bleibt die Chirurgie ein entscheidender Eingriff zur Krankheitskontrolle und ein möglicher heilativer Ansatz. Jedoch, die überwiegende Mehrheit der Patienten schließlich mit wiederkehrenden Erkrankungen, vor allem in der Leber2,3. Während der Leberoperation ist intraoperative Blutung häufig, oft erfordern Bluttransfusion und verschiedene technische Ansätze zur Kontrolle von Blutungen, einschließlich vaskulärer Spannmethoden. Solche Maßnahmen verursachen jedoch hepatische Ischämie/Reperfusion (I/R) im Lebergewebe. Die nebenwirkungen von I/R auf die hepatozelluläre Funktion sind gut dokumentiert. Die Leber I/R Beleidigung entzündet entzündliche Kaskaden während der Wiederherstellung des Blutflusses über entzündliche Bahnen4. Nicht nur Leber-I/R-Verletzung trägt zum Leberversagen bei, aber aktuelle Beweise zeigen auch, dass I/R-Verletzung die Adhäsion der Tumorzellen stimuliert und die Inzidenz der Metastasenbildung und das Wachstum der bestehenden mikrometastasieren Erkrankung fördert5. Wir haben bereits berichtet, dass chirurgischer Stress die Aktivierung von Immunzellen induziert, was nicht nur beim Wachstum des Primärtumors hilft, sondern auch Metastasen erleichtert, indem Krebszellen im Kreislauf erfasst werden6.
Hier beschreiben wir detailliert eine Technik, um ein Lebermetastasen-Maus-Tumor-Modell zu etablieren. In diesem Modell präsentieren wir auch eine Methode, um leberische Ischämie-Reperfusionsverletzungen zu induzieren, die als Ersatz für den chirurgischen Stress wirkt, der klinisch während Hepatektomien vorhanden ist. Die kombinierten Methoden der Krebsinjektion und Leber-I/R können die Entwicklung von CRLM bei Patienten, die sich einer primären Tumorresektion unterzogen haben, erfolgreich interpretieren.
Protocol
Representative Results
Discussion
Das in diesem Manuskript beschriebene Tiermodell basiert auf zwei Hauptansätzen. Die erste besteht darin, die Fähigkeit von Krebszellen zu erkennen, sich in den Leberlappen zu lokalisieren und zu vermehren. Die zweite besteht darin, die Wirkung einer Leber-Ischämie-Reperfusionsverletzung zu untersuchen, die das Tumorwachstum und metastases beeinflusst. Dieses Modell ermöglicht die relevante Untersuchung von Lebermetastasen in Ermangelung von sekundären Metastasen in einer immunkompetenten Maus. Das Modell ist nützl…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren danken Sara Minemyer und Alexander Comerci für die sprachliche Überarbeitung.
Materials
| Dulbecco's Modified Eagle Medium | Lonza | 12-614F | |
| Fetal Bovine Serum | Lonza | 900-108 | |
| L-Glutamin | Gibco | 25030-081 | |
| Penicilin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| Stretomysin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| HEPES | Fisher Scientific | SH3023701 | |
| Trypsin | Hyclone | sh30042.02 | |
| Cell culture Flask 75cm | 5 Cells Star | 658170 | |
| 15ml PP Conical Tubes | BioExcell | 41021037 | |
| Trypan Blue Stain | Giibco | 15250-061 | |
| Gauze | Fisherbrand | 1376152 | |
| Cautry | Bovie | AA01 | |
| Microvascular clamp | Finescience tools | 18055-03 | |
| Micro-Serrefine clamp applicator with lock | Fine science toosl | FST-18056-14 | |
| Spring scissor | Fine science toosl | FST-15021-15 | |
| Vessel Dilator | Fine science toosl | FST-00276-13 | |
| Magnetic fixator Retraction system | Fine science toosl | FST-18200020 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11019-12 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11018-12 | |
| 4-0 polypropylene suture | Ethicon | K881H | |
| Needle holder | Harvard Apparatus | 72-8826 | |
| Heating Pad | Fisher scientific | 1443915 | |
| Clipper | Oster | 559A | |
| Povidone-Iodine solution | Medline | MDS093945 | |
| Syringe 1ml 25G | BD safety Glide | 305903 | |
| Insulin syringe 0.5 ml | BD insulin Syringes | 32946 | |
| Cotton -Tipped Applicator | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| Surgical Microscope | Leica | LR92240 | |
| Mycoplasma Elisa Kit | Roche | 11663925910 | |
| Ketamine | Putney | #056344 | |
| Xylazine | NADA | #139-236 | |
| ALT strip | Heska | 15809554 | |
| AST strip | Heska | 15809542 | |
| LDH strip | Heska | 15809607 |
Referências
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